神経筋ブロッカー治療による筋収縮の評価

要約

出典:Lin, C. U., et al., ヒト誘導多能性幹細胞から誘導されたIn Vitro Neuromuscular Junction.J. Vis. Exp. (2020)

このビデオでは、培養運動ニューロン、シュワン細胞、筋管を使用して筋肉を評価し、その後、神経筋ブロッカーによる治療で収縮を抑制する様子を説明しています。色分けされたタイムモーショングラフィックスは、色分けされたタイムモーショングラフィックを示します。赤は最も速い動きを示し、青は最も遅い動きを示します。

プロトコル

1. 筋収縮とキュア治療

1. 筋管の収縮を引き起こすには、25 mMの塩化カルシウム(CaCl₂)を培地に加えます。筋管の動きは1\u20122分で観察できます。
2. 6ウェルプレートを倒立顕微鏡のステージに置きます。筋管収縮の様子を生細胞顕微鏡で動画に記録します。
3. 筋管の収縮を止めるには、培養液(300 ng/mL)にクラーレを加えます。次に、手順1.2としてムービーを録画します。
4. モーションベクトル解析ソフトウェアで動画ファイルを開き、[モーション解析]ボタンをクリックして動画を解析します。
   注: 筋管の収縮はタイムモーショングラフィックとして表示されます。動画は、myotubeの移動速度を示すために色分けされています。色分けされたキラキラ光る信号は、赤い色が最も速い移動速度を示し、青色が最も遅い移動速度を示す筋管の動きを示しています。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
ミディアム、グロースファクター、試薬	アイテム	ブランド	猫。番号
	B27、ギブコ	ギブコ	12587-001
	BDNF	R&Dシステムズ	248-BD
	ECM、マトリゲル(成長因子減少)	コーニング	356230
	GDNF	R&Dシステムズ	212-GD
	イオンコーター	日本電子	JEC3000FC
	生細胞顕微鏡検査	ニコン	エクリプスTi顕微鏡
	モーションベクトル解析ソフトウェア	ソニー	SI8000
	N2、ギブコ	ギブコ	17502-048
	神経基礎媒体	ギブコ	21103-049
	NT3	R&Dシステムズ	267-N3