マウスモデルにおける低酸素症と虚血による血栓性脳卒中の誘発

要約

出典:Sun, Y. Y., et al., 一過性脳低酸素虚血に基づく血栓性脳卒中モデル.J. Vis. Exp. (2015).'

このビデオでは、マウスモデルで右総頸動脈を塞ぎ、マウスを低酸素環境にさらすことにより、血栓性脳卒中を再現する手順を示しています。このプロセスにより、脳への血液と酸素の流れが減少し、血栓の形成と脳の損傷を引き起こします。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. セットアップ

1. 手術前に、37°Cのヒートポンプに接続された加温パッドに手術用ベッドを少なくとも15分間準備します。手術用ベッドに3mlの注射器のバレルを使用してネックロールを置きます。医療用空気中の2%イソフルランを含む麻酔ガスを準備します。
2. オートクレーブ滅菌した鉗子、はさみ、マイクロニードルホルダー、止血剤、綿棒、縫合糸を準備します。また、ティッシュ接着剤と目の軟膏を準備します。
3. 低酸素システムと温度コントローラーをヒーティングランプと直腸プローブでセットアップします。7.5% O₂ に 2% イソフルランを含む 92.5% N₂ で低酸素ガスを調製します。
4. 手術の1時間前に、マウスに徐放性メロキシカム(4.0 mg / kg)の皮下注射により鎮痛します。

2. 一過性脳低酸素虚血(図1B)

1. 麻酔導入チャンバーで体重22〜30 gの10〜13週齢のオスC57BL / 6マウスに麻酔をかけ、3%イソフルランを使用して動物が足の圧迫に反応しなくなるまで麻酔をかけ、次に電子シェーバーを使用して右首の毛を取り除きます。
2. 2% イソフルランを医療用空気中で 2 L/min の流量で接続した手術用ベッドにマウスを置きます。医療用テープを使用して、ネックロールに沿って伸びた前肢を側面に固定します。
3. 手術部位を切開のためにベタジン、アルコール、綿棒できれいにします。
4. 解剖顕微鏡下で、正中線皮膚から約0.2cm横方向のストレート鉗子とマイクロハサミを使用して、0.5cmの右頸椎切開を行います。
5. 細かく鋸歯状の鉗子を使用して筋膜と組織を引き離し、右総頸動脈(RCCA)を露出させます。一対の細い滑らかな鉗子を使用して、RCCAを迷走神経から慎重に分離します。
6. RCCAに2つのプレカット5-0シルク縫合糸(リリース可能)をライブノットし、次に4-0ナイロンモノフィラメント縫合糸(図1C)を使用して皮膚を縫い合わせます。
7. 乾燥を防ぐために両目に目の軟膏を塗ります。
8. マウスを低酸素システムにすばやく移し、鼻と口を2%イソフルランと7.5%O₂を含むフェイスマスクに入れ、0.5〜1 L / minの流量で30分間。
   1. 低酸素状態では、加熱ランプ付きの温度コントローラーを使用して、直腸温を37.5±0.5°Cで制御し、呼吸数を80〜120呼吸/分で監視します。低酸素状態のときに体温を37°C以上に保つことは、一貫した脳梗塞を引き起こすために重要です。低呼吸数は通常、低酸素状態の20分後に発生します。フェイスマスクを取り外し、呼吸数が40を下回った場合は通常の空気供給を許可します。これには1〜2分かかり、30分間の低酸素症の持続時間
   にはカウントされません。

結果

図1: 成体マウスにおける一過性脳低酸素虚血(tHI)傷害の手順。(A)血栓症を推進するVirchowのトライアドには、血流のうっ滞、内皮損傷、および血液の凝固亢進が含まれます。(B)tHIストローク手順の概略図。2つの取り外し可能な結び目を右総頸動脈(CCA)に結び付け、続いてマウスの直腸温を37〜38°Cに維持しながら、鼻円錐を介して7.5%の酸素を30分間送達しました。一過性の全身性低酸素症の後、CCA結紮は、解放可能な縫合糸の結び目の一端を引き抜くことによって解放されました。MCA、中大脳動脈;ICA、内頸動脈;ECA、外部頸動脈;CCA、総頸動脈。(C)一過性右CCA閉塞の外科的処置。1. 2つのプレカット縫合糸(#1と#2)を分離された右CAAの下に配置しました。2. 2つの取り外し可能な結び目が作られました。3.切開線は縫合糸#3によって閉じられました。縫合糸#1と#2の端が切開線...

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
成体オスマウス	チャールズ川	C57BL/6	生後10~13週齢 (22~30g)
移動式実験動物麻酔システム	ベトエキップ	901807	麻酔
医療用エア(圧縮)エアタンク	エアガス	UN1002	麻酔
イソフルラン	ピラマルヘルスケア	NDCの66794-013-25	麻酔
マルチステーション実験動物麻酔システム	サージベット	V703501	低酸素システム
7.5% O2 バランス 92.5% N2 タンク	エアガス	UN1956	低酸素システム
加熱ランプ付き温度コントローラー	コール・パーマー	EW-89000-10	温度コントローラー
直腸用ゾンデ	コール・パーマー	NCI-00141PG	温度コントローラー
解剖顕微鏡	オリンポス	SZ40	手術のセットアップ
保温パッド付きヒートポンプ	ゲイマー	TP700	手術のセットアップ
細く湾曲した鉗子(鋸歯状)	FSTの	11370から31	手術器具
細く湾曲した鉗子(滑らか)	FSTの	11373から12	手術器具
マイクロハサミ	FSTの	15000から03	手術器具
マイクロニードルホルダー	FSTの	12060から01	手術器具
ハルステッド・モスキート止血剤	FSTの	13008-12	手術器具
5-0シルク縫合糸	ハーバード大学装置	624143	手術用品
4-0ナイロンモノフィラメント縫合糸	ほら	766Bの	手術用品
ティッシュ接着剤	アボットラボラトリーズ	NC9855218	手術用品
Puralube Vet軟膏	漁夫	NC0138063	目の乾燥予防