マウスモデルにおけるウェイトドロップによる外傷後発作を誘発する技術

要約

出典:Shandra, O. et al., 反復性びまん性外傷性脳損傷のマウスモデルにおける心的外傷後てんかんの誘導。J. Vis. Exp. (2020)

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. ウェイトドロップ手順

1. マウスを誘導チャンバーに入れます。酸素と真空の流れを1 L / minに設定し、イソフルランガスのレベルを3%〜5%に設定します。マウスに5分間麻酔をかけます。
2. マウスを誘導チャンバーから取り外し、フォームパッドの上に置きます。つま先や尻尾のつまみに対する反応がないかどうかをテストします。
3. 鎮痛剤(0.1 mg / kgブプレノルフィン)を皮下投与します。.脳波検査(EEG)手術を同日に行う場合は、ブプレノルフィンを非ステロイド性抗炎症カルプロフェン(5 mg / kg)と組み合わせて皮下投与します。.
4. 乳酸ナトリウム溶液(動物の体重1グラムあたり3μL)を最後の衝撃の前後に皮下投与します。.乳酸ナトリウム溶液は、鎮痛薬と混合して、1回の注射で迅速に投与できます。.
   注: 乳酸ナトリウム溶液は、水中に塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムの混合物を含んでいます。このステップは、液体と電解質の交換に役立ち、回復を助けます。
5. マウスの頭をウェイトドロップチューブ(図1A)の下に置き、平らなステンレス製ディスク(直径1.3 cm、厚さ1 mm、重量880 mg)を頭の中央、目と耳のラインの間に置きます。
   注:この円盤は、衝撃を頭蓋骨の表面全体に拡散させます(図1B)。
6. ウェイトドロップチューブのピンを取り外して、100gのウェイトロッドを50cmの高さから解放します。対照マウスの偽の損傷を誘発するには、ピンの偶発的な解放と体重の落下を防ぐために、チューブからウェイトロッドを取り外してください。
   注:動物の頭は平らに配置され、ロッドが円盤の表面全体に自由落下するようにする必要があります。
7. 無意識の動物を仰向けにして、滅菌ポリライニング吸収タオルで覆われた加熱パッドに置き、回復させます。直立反射の回復時間(つまり、マウスが背中から自分自身を立て直すのにかかる時間)は、無意識に過ごした時間の読み出しとして測定できます。

結果

図1:反復性びまん性外傷性脳損傷(TBI)のマウスモデル。(A)ウェイトドロップデバイス。(A1)ウェイトドロップチューブ。(A2)100gのウェイトロッド。(A3)ロッドを保持するピン。(A4)高さを変更したり、ウェイトドロップチューブからロッドを取り外したりする場合にロッドを持ち上げるためのひも。(A5)です。動物をウェイトドロップチューブの下に置くためのフォームパッド。(B)ウェイトドロップ手順。(B1)ステンレス製の円盤は、目と耳のラインの間の頭の中央に配置されています。(B2 および ...

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
ブプレノルフィン	Par Pharmaceuticals, Cos. Inc., スプリングバレー, ニューヨーク州, USA	60969
C57BL/6マウス	ハーラン/エンビゴ・ラボラトリーズ株式会社		男性、12-16週齢
C57BL/6マウス	ジャクソン研究所		男性、12-16週齢
カルプロフェン	Zoetis Services LLC, Parsippany, NJ, USA	26357	注:この薬は、定位電極の埋め込みが同じ日に行われる場合にのみ、体重減少時に追加されます
吸入麻酔用フルリソ液	MWI Veterinary Supply Co., USA	502017
ステンレス製ディスク			カスタムメイド
滅菌ポリライニング吸収性タオルパッド	カーディナルヘルス、アメリカ	3520