ラットモデルにおける眼窩下神経の収縮による神経障害性疼痛の誘発

要約

出典:Deseure, K., et al. 三叉神経障害性疼痛を研究するためのラットの眼窩下神経の慢性収縮損傷(IoN-CCI)。J. Vis. Exp. (2015).

このビデオでは、ラットモデルで眼窩下神経を収縮させることにより神経障害性疼痛を誘発する方法を実演しています。眼窩下神経を露出させ、結紮糸を結んで収縮させた後、損傷部位の免疫応答により、隣接するニューロンの興奮性が高まり、痛みの信号を脳に伝達します。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1。被験者

1. オスのSprague-Dawleyラット(到着時250-300g)を使用してください。
2. 湿度40〜60%、室温(RT)が21±〜1°Cのコロニールームの堅底ケージに入ったイエネズミ
3. 水と餌を自由に利用できるようにします。
4. ラットを逆の12:12時間のダーク/ライトサイクルの下に保ちます(20時間でライトが点灯します)。

2.手術

1. ラットあたり、長さ約6cmのクロミック腸結紮糸(5-0)を2枚準備し、乾燥して硬くなってもろくなるのを防ぐために滅菌生理食塩水に入れます。
2. ペントバルビタール(60 mg / kg、腹腔内[i.p.])で動物を麻酔し、アトロピン(0.1 mg / kg、i.p.)で治療します。.片方の足を伸ばし、指の爪でつま先の間の皮膚の網をつまんで、適切な圧力が加えられていることを確認して、麻酔のレベルを監視します。動物が手足を曲げないようにしてください。必要に応じて、追加のペントバルビタールを投与します。.
3. ラットの頭を剃り、目の中心から前後に等距離で約25mmの頭皮の正中線切開ができるようにします。
4. ラットの頭を定位固定装置に固定するか、ラットの頭を固定します。体温を維持するために、ラットを加熱されたパッドの上に置きます。
5. 両目に眼用軟膏を塗布して、乾燥による損傷を防ぎます。
6. 坊主頭の部分をアルコールでこすり、次にベタジンでこすります。
7. 頭皮の正中線を切開し、頭蓋骨と鼻骨を露出させます。
8. 手術用顕微鏡を使用して、手順2.9から2.16を実行します。
9. 上顎骨、前頭骨、涙骨骨、頬骨によって形成された眼窩の端を自由に解剖し、綿先の綿棒とデュモン鉗子のペアを使用します。綿棒を使用して、出血の可能性から血液を吸収します。
10. 眼窩下神経(IoN)へのアクセスを可能にするには、IoNよりも上を横切る前篩骨神経を過度に伸ばさないように注意しながら、精密綿棒で眼窩内容物をそらします。精密な綿棒とデュモン鉗子のペアを使用して、周囲の結合組織からIoNを解剖し、拡散運動を使用します。綿棒を使用して、出血の可能性から血液を吸収します。
11. 結紮を行うには、クロム腸の1つの部分の一方の端を前頭骨に沿って下方に押し、IoNの内側に押し込み、IoNに対して数ミリメートル平行で下向きに進みます。結紮糸は、IoNと前頭骨の間に固定されます。
12. 45度の角度のついたデュモン鉗子の先端をIoNの下に滑り込ませて、結紮糸のすぐ近くに置きます。IoNを横方向にゆっくりと引っ込めて、鉗子の結紮糸と先端を露出させます。鉗子で結紮糸をつかみ、鉗子をIoNの下から横方向に引き出します。
13. 結紮糸の両端がIoNからほぼ等距離になるまで、結紮糸を眼窩腔から引き出します。
14. 結紮糸の両端から「スリップノット」を作り、収縮の程度を完全に制御できるようにし、結び目をIoNに対してスライドさせます。結び目をさらにスライドさせてIoNを収縮させ、神経の直径が目立つだけ小さくなるようにします。スリップノットの上に通常の結び目を作り、くびれの量が一定になるようにします(つまり、スリットノットが滑らないように.、)。
15. 結紮糸をカットして、結び目から約2mmの自由端を残します。
16. 同じ手順(ステップ2.11から2.15)を繰り返して、2回目のライゲーションを1回目のライゲーションから2mm離します。
17. 偽手術の場合は、手順2.2から2.10を実行します。
18. ポリエステル縫合糸(4-0)を使用して頭皮の切開部を閉じ、ラットが加熱されたパッドで回復するのを待ちます。動物が胸骨の横臥を維持するのに十分な意識を取り戻すまで動物を放置せず、完全に回復するまで動物を他の動物の会社に戻さないでください。.
19. 神経因性疼痛の発症に対する先制的な鎮痛効果を避けるために、術後の痛みに対して鎮痛剤を投与しないでください。.

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
クロミックキャットガット	ダイネック	CG504
ネンブタール(ペントバルビタール)	薬局
アトロピン	薬局
クリッパー小動物用 - ファヴォリータII.	Aesculap	GT104
定位固定装置	ストールティング	51600
眼科用軟膏(リポシック)	薬局
ホメオロミックモニターシステム	ハーバード大学装置	PY8 50-7221-F
コットンアプリケーター	薬局
精密綿棒	Qosina	10225
手術用顕微鏡	Kaps	SOM 62
デュモン #5 鉗子	ファインサイエンスツール	11251-10
デュモン鉗子 - マイクロ鈍い先端 (#5/45)	ファインサイエンスツール	11253-25
ハサミ - 鈍い先端	ファインサイエンスツール	14574-09
ポリエステル縫合糸 - メルシレン (4-0)	エチコン	R871H