動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。
1.麻酔と準備
注：この研究は、生後12週齢の15匹の雄Sprague Dawleyラットに対して行われました。
- 動物に5%イソフルランを導入投与し、2%-3%イソフルランで麻酔を維持します。
注：2%のイソフルランによるメンテナンスは、通常、気管挿管や機械的な換気を必要とせずに、十分な麻酔と自発呼吸をもたらします。 - ピンセットで足をつまんで動物の反射神経を確認してください。先に進む前に、動物が反応しないことを確認してください。手術野をひざから足首まで電動シェーバーで剃り、眼軟膏を目に塗って乾燥を防ぎます。腹部に0.5 mg / kgの鎮痛カルプロフェンを皮下
注射します。.- 麻酔をかけたラットを仰向けに置き、頭を左または右に向け、手術を受ける脚を外科医の近くに置きます。内側くるぶしが上を向くように、下肢を外旋します。ラットを6倍の倍率の実体手術顕微鏡の下に置きます。
- ヨウ素ベースのスクラブを3回交互に繰り返し、その後にアルコールを注入して、剃った部分を消毒します。脚に手術穴を開けた滅菌シートを敷き、手術野のみが見えるようにします。手術中は、これらの無菌状態を維持するようにしてください。
2. 手術
- 手術野を水平に保つために、足首の下に小さな綿棒を置きます。膝の位置を特定し、ふくらはぎの中央から足首まで後足の内側にメスを使用して1〜2cmの縦方向にゆっくりと切開します。必要に応じて、筋肉層が見えるまでマイクロハサミで皮膚と皮下をさらに開きます。
- 表在性の神経血管束を2つまたは3つの白と、時には小さな枝を持つ太い紫/赤の線として識別し、筋肉層上を自由に移動することができます。電気焼灼器(材料の表を参照)を使用して、術野の活発な出血やにじみ出ているものを凝固させます。神経血管束を傷つけないように注意してください。
- 2.2の表在性神経血管束のすぐ後方にある腓腹筋の間の筋膜を開くために、単刀直入に解剖します。筋肉の筋膜の間には、脛骨神経があります。脛骨神経は、神経血管束の表在神経の約3倍の大きさです。脛骨を追加の目印として使用します(脛骨神経は脛骨のすぐ後方にあります)。
- 脛骨神経とその分岐部を特定します。
注: 分岐部は通常、神経の縦方向に細い線で見えます。 - 周囲の血管束から解放された脛骨神経を慎重に解剖します。脛骨神経を鈍く動かし、脛骨神経を動かしながらある程度伸びが見られる露出した組織を切断して解剖を行います。
注：解剖後に脛骨神経が交差静脈に付着している場合、これらの静脈は脛骨神経全体を露出させるために凝固させることができます。脛骨束自体が凝固しないように注意してください。 - 脛骨神経が交差する筋肉層の下に消えるまで、近位に露出させます。この時点で、脛骨神経は膝に向かって後足により深く潜っているようです。脛骨神経を足首まで遠位に露出させます。
注：脛骨神経がより遠位に露出すると、交差するコラーゲン線維(すなわち、神経線維の方向に垂直な線維)の量が増加します。これらのコラーゲン繊維は、脛骨神経を転位させるのに十分な長さを可能にするために切断する必要があります。- 脛骨神経全体が露出したら、神経の脱水を避けるために筋肉層を戻してください。神経が脱水状態になる(つまり、神経がより硬くなり、鈍くなり、しわになる)場合、筋肉の層で覆うだけでは不十分な場合は、生理食塩水を一滴垂らして水分を補給します。
- 鈍いマイクロサージェリーツール、できればマイクロニードルホルダーを使用して、皮下筋層から前脛骨の皮膚を切開し、皮下トンネルを作ります。これを行うには、皮膚を持ち上げて、鈍い先端を皮膚と平行に組織に押し込みます。トンネルの端が脛骨前または横方向に配置されていることを確認して、神経腫をテストするための領域に簡単にアクセスできるようにします。
- イソフルランを5%に増やします。脛骨神経に戻り、それを露出させます(つまり、ステップ2.6で説明した場所に戻ります)。足首近くの最も遠位レベルで脛骨神経(つまり、両方の足底枝)を切断します。イソフルランを正常レベルの2%〜3%に減らします。
- 顕微鏡の倍率を10倍または16倍に変更してください。ステップ2.8で行った切り傷に近接する脛骨神経の神経上膜を特定します。または、脛骨神経のより近位の分岐がある場合は、ステップ2.8で切り傷に近接する内側および外側足底枝の両方の神経上膜を特定します。
注:神経上膜は、内部の神経線維に比べて白く、硬くなっています。神経線維はより黄色く、柔らかいです。 - 慎重に8-0を配置してください。神経上端をピンセットで慎重に保持し、神経上膜の間に針を約0.5mmの噛み合わせで挿入することにより、近位神経端の神経上膜を通してナイロン縫合糸(材料の表を参照)します。縫合糸を引き抜き、手順2.7で作成した皮下トンネルの端で針を皮下で噛みます。結び目を作り、神経を横方向に皮下トンネルに移します。
注：両方の足底枝が共通の神経上膜を共有している場合、1つの縫合糸で十分です。両方の足底枝が独自の神経上膜を持っている場合、各神経上膜は個別に固定する必要があります。縫合糸を皮膚に通すことは避けてください。皮下固定のみ。 - 皮膚を貫通せず、固定された神経端に濃い色の縫合糸(できれば青または黒の4-0縫合糸)を配置します。縫合糸が皮膚の外側から見えることを確認してください。前足や筋肉を動かした後も神経が所定の位置に留まるかどうかを確認します。縫合糸の端を切り取り、4-0の縫合糸の端を8-0よりも少し長くします縫合。
- 顕微鏡の倍率を6倍に戻して、表皮内縫合糸で皮膚を閉じます。8-0を使用して縫合し、綿棒を使用して0.9%NaClで皮膚をやさしく洗浄します。
3. 術後治療
- ラットをペーパータオルの下の清潔なケージに入れ、快適な位置に置きます。部屋が寒い場合は、ケージの一部の下にヒートパッドを置きます(動物が必要なときに熱から逃れることができるように、ケージの一部の下にのみ置きます)。食料と水への容易なアクセスを確保します。
- 手術後のラットが胸骨の横臥を維持するのに十分な意識を取り戻すまで放置しないでください。ラットは、手術後の麻酔から完全に回復したときに、他の動物の会社に戻すことができます。これは通常、1時間後、ラットが通常の歩行パターンと行動を示すときです。
- 手術後24時間後と48時間後に、0.5mg/kgのカルプロフェンを皮下(腹部)に投与し、術後の痛みを治療します。
