ラットモデルにおける眼圧上昇の誘導

要約

出典:Lani-Louzada, R., et al., げっ歯類の外科的に誘発された緑内障のための辺縁血管神経叢の全円焼灼。J. Vis. Exp. (2022)

このビデオは、ラットモデルにおける眼圧上昇(IOP)の誘導とモニタリングを示しています。このプロセスには、辺縁血管の焼灼が含まれ、血管の閉塞と眼圧の上昇をもたらします。その後、ラットは回復し、比較のために実験眼と対照眼の両方でIOPが定期的に監視されます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

本研究では、生後2〜3ヶ月、体重180〜320gの雌雄両ラットのLister Hoodedラットを用いた。しかしながら、この手順は、様々な年齢範囲の異なるラット系統に適応させることができる。

高眼圧症手術と臨床フォローアップ

1. を制御した温度環境で動物を飼育し、標準的なペレット化ガンマ線照射食品(Nuvilab® CR-1、Quimtia S/A、ブラジル)と水(トリプルフィルター、無毒の活性炭を含む)を利用できるad libitum。
2. 10%塩酸ケタミン3部と2%塩酸キシラジン1部(希釈剤:滅菌水)からなるストック麻酔カクテル混合物を調製します。
3. 背側の皮膚を保持して動物を優しく拘束し、混合物の体重1μL / g(ケタミン:75 mg / kg、キシラジン:5 mg / kg)を腹腔内投与して麻酔を誘発します。.約5分後につま先をつまむ反応を行うことにより、適切な麻酔が行われるか確認します。
4. プロキシメタカイン塩酸塩 0.5% 点眼薬を点眼することにより、両方の眼表面に局所麻酔をかけます。30〜60秒待ってから、小さな滅菌綿棒で鼻または外側の球結膜にそっと触れて、残りの溶液を地球の前面から取り出します。
5. 実験用対照眼と対側対照眼の両方のベースライン IOP を測定するには、動物をベンチトップの腹側褥瘡位置に置き、角膜表面が眼圧計の先端に簡単にアクセスできるようにします。
6. アプラネーションまたはリバウンドハンドヘルド眼圧計を使用します(図1A)。眼圧計の先端を、中央の角膜ゾーンに垂直にわずかに触れるように配置します。機械で生成された信頼性の高い平均を 3 から 5 個取得し、平均化します。各平均は、6回の個別測定が成功した後、デバイスによって自動的に計算されます。
   1. リバウンド眼圧計にプローブをロードし、測定ボタンを1回押してオンにすると同時に、プローブが落下しないようにデバイスの先端を上向きに置きます。電源を入れると、ディスプレイに00が表示され、機器が測定の準備ができていることを示します。
   2. プローブの先端を角膜から1〜4 mmの位置に置き、機器を動かさずに測定ボタンを迅速かつ慎重に押して測定値を取得します。成功した各測定値は短いビープ音で識別され、6回後に平均がデバイスの画面に表示されます。
      注: アプラネーション眼圧計の長い経験にもかかわらず、著者は全体の手順を最適化するために、信頼性の高い眼圧測定を簡単に取得できるリバウンド眼圧計の使用を推奨しています。
7. 実体顕微鏡で動物をわずかに横方向の褥瘡の位置に置き、実験用の眼を40倍の倍率で検査して手術を慎重に計画します。処置中にカルメロースナトリウムまたはヒアルロン酸ナトリウムを一滴点眼することにより、反対側のコントロールアイを潤滑状態に保つことを忘れないでください。
8. 湾曲した鉗子を使用して、実験眼球をゆっくりと前方に押して、輪部の360°を囲む血管系を露出させます。一方、低温眼科用焼灼器(1,300°F;Bovie Medical, USA) (図 1B-E
   注:前述の焼灼器は、縦方向に辺縁血管系に接触するはずの丸い先端を持っています。
9. 角膜末梢を焼灼しないように注意する必要があります。術後の角膜混濁を引き起こす可能性があり、網膜機能のin vivoの評価が妨げられます。
10. 強膜辺縁部に焼灼の小さな円形のマークが出現し、辺縁血管系の閉塞、および手術された眼の瞳孔拡張を観察します。これらは、成功した外科的処置の兆候です。
    注:ラットとマウスの辺縁血管系は解剖学的に類似しており、使用される焼灼器の先端は緩やかで小さいため、このプロトコルは適応なしでマウスの目にも機能します。
11. 手術後、ステップ 1.5 で説明したように、両眼の術直後の IOP を確認します。
12. 眼科用酢酸プレドニゾロン(1.2 mg / mL)を一滴塗布し、これを実験眼の前面に約40秒間接触させた後、抗生物質の眼科用軟膏(オキシテトラサイクリン塩酸塩30 mg / gとポリミキシンB 10,000 U / g、またはシプロフロキサシン3.5 mg / g)に置き換えてください。.手技後の痛みを防ぐために、塩酸トラマドールの筋肉内注射(単回投与; 2 mg / kg)を行います。.

結果

図1:辺縁血管神経叢の温焼灼と網膜機能への影響in vivo。 (A) ラットの眼圧を測定する代替方法:リバウンド眼圧測定(優良)と圧平眼圧測定(劣)です。(B-E)手術;矢じり:辺縁血管神経叢;矢印:眼球の前面を露出させ、辺縁血管への外科的評価を最適化するために使用される湾曲した鉗子。ハッシュ:低温眼科用焼灼器の丸い先端。アスタリスク:焼灼マーク。スケールバー:2mm。(D)の挿入図は、高倍率で焼灼される辺縁血管系を示しています。(F)OHT(赤)とコントロール(黒)の目(n = 131)でのIOP測定の時間経過。垂直下向き矢印:LPC手術。* = p < 0.05 (

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
Cautery Low Temp Fine Tip 10/bx	Bovie Medical Corporation	AA00	低温眼科用焼灼
セタミン	Syntec do Brasil Ltda	00200-3-000003	ケタミン塩酸塩 10%
エコフィルム	Cristália Produtos QuímicosFarmacêuticos Ltda	MS-1.0298.0487	カルメロースナトリウム 0.5%
Hyabak	União Química Farmacêutica Nacional S/A	MS-8042140002	ヒアルロン酸ナトリウム 0.15%
Icare Tonolab	Icare Finland Oy	TV02 (型番)	リバウンド手持ち眼圧計
Maxiflox	Cristália Produtos Químicos Farmacêuticos Ltda	MS-1.0298.0489	シプロフロキサシン 3.5 mg/g
Ster MD	União Química Farmacêutica Nacional S/A	MS-1.0497.1287	プレドニゾロンアセテート0.12%
テロラック	Cristália Produtos Químicos Farmacêuticos Ltda	MS-1.0497.1286	Ketorolac trometamol 0.5%
テラミシナ	Laboratórios Pfizer Ltda	MS-1.0216.0024	オキシテトラサイクリン塩酸塩30mg/ g + ポリミキシンB 10,000 U/g
Tono-Pen XL	Reichert Technologies	230635	デジタルアプラネーションハンドヘルド眼圧計
	カールツァイス	-	手術および網膜解剖用実体顕微鏡