マウスモデルの顔面神経に対するクラッシュ軸索切開術の実施

要約

出典:Olmstead, D. N., et al., Facial Nerve Axotomy in Mice: A Model to Study Motoneuron Response to Injury.J. Vis. Exp. (2015).

このビデオは、マウスの顔面神経潰傷手順を示しています。これは、主要なランドマークを通じて鈍的解剖を行うと、茎状突孔の顔面神経幹が露出します。次に、鉗子を使用して神経幹を圧迫し、軸索の損傷を誘発し、ニューロンの信号伝達を妨害します。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1。外科的アプローチ

1. ステレオスコープを手術野に合わせ、ピントを合わせます。ノーズコーンを調整し、視野の端に沿って配置されるようにテープで留めます。
2. マウスを左側に寝かせた状態で、右耳の端を鼻錐形にテープで固定し、切開を行う耳の後ろの領域を露出させます。後耳介静脈が耳を横切って水平に移動することを確認します。動物の正しい配置と耳のテーピングは、顔面神経をすばやく見つけるために重要であることに注意してください。
3. 耳の上と後ろの毛皮を70%エタノールで濡らし、かみそりまたはメスの刃を使用して手術部位を剃ります。ファーを事前に濡らしておくと、この解剖学的位置でのシェービングが容易になります。
4. ベタジンサージカルスクラブ(7.5%ポビドンヨード)などのヨウ素溶液で肌をきれいにし、続いて70%エタノールで肌をきれいにします。このクリーニングをさらに2回繰り返して、その領域を完全に消毒します。
5. 切開する場所を決定するには、耳の後部から耳の隆起後方の領域まで後耳介静脈をトレースします。スプリングハサミを使用して、突起部の後方に4mmの切開を2〜3mm行います。
6. 鈍的解剖を使用して皮下脂肪と筋膜を解剖します。はさみで直接切ることは、血管や筋肉組織が損傷しやすいため避けてください。
7. 出血が発生した場合は、滅菌綿棒で手術部位に少なくとも30秒間圧力をかけます。体液の大幅な損失が発生した場合は、25Gまたは27Gの針を使用して、マウスに最大0.5mlの滅菌0.9%生理食塩水を腹腔内に注入します。.
8. いくつかの重要なランドマーク、脊椎副神経、外耳道、および前顎二腹筋(以下で説明)を使用して、顔面神経を特定します。顔面神経の枝が視覚化されるまで、これらのランドマークの周りを解剖します。神経が明らかになると、神経は重要な固体の白い構造として現れ、筋膜の層がそれを下にある構造に接着します。
   1. 皮下脂肪と筋膜が解剖された後、頭蓋骨の尾側部分から移動して僧帽筋を神経支配する脊髄副神経を見つけます。顔面神経は脊椎副神経の奥深くにあります。
   2. 真珠のような白く見え、顔面神経まで吻側に見える軟骨性外耳道を見つけます。
   3. 顔面神経の真上と尾側にある前顎顎筋の筋肉腹を見つけます。
9. 顔面神経の主要な枝が視覚化されたら、それらを背側になぞって、茎状突孔からその起源を見つけます。先端の細いデュモン鉗子#5/45を使用して手術部位を開いたままにし、神経の経路に沿ってスプリングシザーの先端を進め、次に鉗子を背側に動かして新しく進行した領域を開いたままにします。
10. この時点で、頬骨、頬側、および辺縁下顎の枝を持つ顔面神経の幹を視覚化します。
    NOTE:側頭枝は孔の近くで見つかります。下顎辺縁神経は、顎に近い上部と下部に分岐するため、このレベルではそれらの神経枝は見えません。
    1. 挫傷を負う場合は、Dumont #5/45鉗子を使用して、一定の圧力で30秒間神経を圧迫し、すべての軸索を切断し、最初の挫傷部位に垂直な2番目の角度でこの挫傷を繰り返します。30秒間のクラッシュ中に可変量の圧力を加えることは避けてください、そうしないと、動物間で怪我が一貫していなくなります。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
実体顕微鏡	ライカ	M60
ラベリングテープ	フィッシャーサイエンティフィック	15-952
Vannas-Tübingen Spring Blankers - ストレート/シャープ/8.5cm/5mm刃先	ファインサイエンスツール	15003-08	使用前に滅菌する
デュモン #5/45 鉗子 - 標準先端/角度付き 45°/デュモクセル/11cm	ファインサイエンスツール	11251-35	使用前に滅菌する
0.9% 塩化ナトリウム注射剤、USP	ホスピーラ	0409-4888-10
ベタジン、16オンス、ディスペンサー付き	フィッシャーサイエンティフィック	19-027132
70% エタノール
ガラスビーズ滅菌器