出典:Jantzie, L. L., et.alです。ラットの羊水内リポ多糖による出生前低酸素虚血を使用した未熟児の脳症のモデリング。J. Vis. Exp. (2015)
このビデオは、子宮血流を制限し、LPSを注射することにより、胎児ラットの低酸素性虚血および炎症状態を誘発するプロトコルを示し、早産研究に関連する神経炎症と脳の発達の混乱をモデル化します。
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方法論記事
出生前ラットにおけるモデル脳症に対する低酸素性虚血性および炎症状態の誘発
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2025年4月28日
この記事について
要約
プロトコル
動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。
1. 動脈瘤クリップの配置
- 各子宮動脈にラット30Gの動脈瘤クリップを配置します。近位および遠位の脈拍を含む血流の停止、および個々の胎盤を含む子宮血管の黒ずみを確保します。露出した角と術野全体をガーゼで覆い、滅菌生理食塩水で洗浄します。約10分ごとに畑を灌漑して、湿った状態を保ちます。
- 60分後、ガーゼをはがし、畑を灌漑します。クリップの取り外しを成功させるために、子宮の角と血管が十分に湿っていることを確認してください。鉗子を使用して各動脈瘤クリップをそっと取り外します。血管に外傷を生じさせないように注意し、除去中に組織の完全性を維持してください。
- 子宮の角と野原を徹底的に灌漑し、羊水嚢から浮遊したガーゼの糸を取り除くように注意します。
2. 羊水嚢へのリポ多糖の注入
- 個々の羊膜嚢の基部、胎盤プレートのすぐ前方に、100 μlのリポ多糖(LPS)(4 μg/sac)を希釈したエバンズブルー染料を羊水に注入します。鈍い鉗子を使用して、各羊膜嚢を安定させ、注射に最適な位置に回転させます。Dilute Evanの青色染料は、適切なシリンジの配置と注入を確認するのに役立つ造影剤です。
注:羊水内注射には、8mmの31G針が取り付けられた超極細の0.3mlインスリン注射器のみを使用してください。より大きなゲージの針を使用すると、慢性的な羊水の損失、胎児の死亡、および妊娠の再吸収につながります。シリンジを取り外す際の少量の羊水漏れは、羊水嚢に直接圧力をかけることで軽減できます。一部のラットの胎児は、ある程度の羊水過少症に耐える場合があります。しかし、太鼓の大きな針による穿刺や偶発的な穿刺による急性羊水の損失は、慢性的な体液漏れを引き起こし、胎児の喪失を引き起こし、重症の場合は隣接する妊娠の喪失につながります。 - 滅菌生理食塩水で子宮角を3回洗浄します。
3. 開腹術の閉鎖
- 鉗子を使用して、子宮角を慎重に腹腔に戻します。羊水嚢と正中線切開部との間の十分なスペースを確保し、ランニング3-0シルク縫合糸を使用して筋筋膜層の端を再近似します。筋肉切開部を閉じる際の羊水嚢の配置に注意してください。嚢に縫合したり、嚢を縫合したりしないように注意してください。
- ランニング3-0シルク縫合糸を使用して、皮膚層を再近似し、皮膚層を閉じます。
注:開腹術は、妊娠期間の増加に伴う皮膚と筋肉の拡張を可能にするために、連続縫合糸の2層で閉じる必要があります。連続縫合糸により、創傷張力を均等に分散させることができます。縫合糸の中断は、複数の結び目が刺激的であり、麻酔から回復したときにラットが簡単に噛むことができるため、あまり望ましくありません。外科用ステープルは望ましくありません。外科用結び目の尾は非常に短く(<3 mm)カットする必要があります。 - 26Gの針を使用して、1 mlの0.125%ブピバカインを創傷縁の周囲に皮下注射します。.0.1 mg / kgのブプレノルフィンを首筋に皮下投与します。.
- イソフルランをオフにし、必要に応じてラットをタオルで乾かします。ラットを清潔な家庭用ケージに入れ、麻酔からの回復を監視します。ラットが低体温にならないようにしてください。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 生理食塩水、0.9% | シグマ | S8776 | |
| LPS 011B4 | シグマ | L2630 | |
| エバンズブルーダイ | シグマ | E2129 | |
| 手術用手袋 | バイオジェル | 40870 | |
| またはタオル | カーディナルヘルス | 287000-008 | 滅菌 |
| PDIアルコール調製パッド | フィッシャーブランド | 06-669-62 | |
| ミニアルコ充電式バリカン | ケントサイエンティフィックコーポレーション | CL8787 | |
| 鈍器鉗子 | ロボズ | RS-8100 | |
| ハサミ | ロボズ | RS-6808 | |
| 手術ハサミ | Roboz | RS-5880 | |
| 手術ハサミ | F.S.T. | 14002-16 | |
| シリンジ | BD | 309628 | 1ml |
| ニードル | BD | 305122 | 25G 5/8 |
| ニードル | ... BD | 305128 | 30G 1 |
| コットンチップアプリケーター | フィッシャーブランド | 23-400-114 | 小型、6インチ滅菌 |
| コットンガーゼスポンジ | フィッシャーブランド | 22-362-178 | |
| ニードルホルダー | ケントサイエンティフィックコーポレーション | }INS600109 | 12.5 CM STR |
| ベッセルクリップ | ケントサイエンティフィックCorp. | INS600120 | 30G 圧力 |
| 3-0 パーマハンドシルク縫合糸 | エチコン | 1684G | ブラックブレード、3-0 (2メートル法)、18インチ、非吸収性、PS-1 24mm針、3/8円形 |
| インスリン注射器 | BD | 328438 | 0.3cc 3mm 31G |
