脊髄損傷同軸プラットフォームを使用したマウスモデルにおける脊髄挫傷の誘発

要約

出典:Elzat, E. Y. Y., et al., Establishing a Mouse Contusion Spinal Cord Injury Model Based on a Minimally Invasive Technique.J. Vis. Exp. (2022).

このビデオでは、脊髄損傷同軸プラットフォームを使用して、マウスモデルのT9レベルの脊髄で挫傷を誘発する方法を示します。T9レベルの脊髄に重りを落とすと、挫傷ができ、すぐに組織の変色と腫れを引き起こします。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1.9^番目の胸椎の位置特定と椎弓切除術(T9)

注:生後9-10週齢の雌C57BL/6Jマウスは、済南Pengyue実験動物会社(済南、中国)から購入しました。

1. オートクレーブで実験用の手術器具一式を作成し、手術前に手術台を75%のアルコールで滅菌してください。
2. 麻酔手術のための麻酔の30分前に鎮痛のためのブプレノルフィン（0.05-2.0mg/kg）を皮下注射してください。次に、マウスにイソフルランを投与します(導入:~3-5%、維持:~1.5-2%)。動物が尾やつま先のつま先の反射神経によって完全に麻酔されているかどうかを確認します。麻酔が効いたら、マウスを手術台の指定された部分に腹臥位に置き、角膜に眼科用軟膏を塗ります(手術中に眼が乾燥するのを防ぐために角膜に眼科用軟膏を塗布します)。
   1. 胸腰椎の上で電気シェーバーを使用して尾側から吻側までの髪を剃ります。ヨードフォアで円を描くように数回皮膚を滅菌し、続いて75%アルコールで滅菌します。滅菌外科用ドレープを装着し、メスとブレードで約6^番目の胸椎(T6)から13^番目の胸椎(T13)までの皮膚に約1.5cmの縦切開を行います。
      注：肋骨縁に沿って、第12^胸椎（T12） - T13棘間隙が位置する正中線まで触診します。吻側を1.5cm切開すると、切開部はT6-T13椎骨とほぼ同じ高さになります。
3. 手術顕微鏡下の骨部分から片側の13^番目の肋骨を探索してください。肋骨角の領域に軽く触れ、次に吻側に向かってT12-T13の棘間腔を見つけることにより、正中線の棘突起を探索します。T12-T13の空間から吻側まで、T9-10^番目の胸椎(T10)の棘間腔を探索します。(図1A、2A)
4. T9の棘突起に沿って傍脊髄筋を両側の前後のファセットジョイントまでマイクロハサミで解剖します（図2B）。マイクロリトラクターで傍脊髄筋を引っ込め、マイクロハサミで第8胸椎(T8)-T9およびT9-T10の椎弓板と棘間腔の軟部組織を清掃します。
5. T9椎弓切除術を行い、T9の棘突起をマイクロサージェリー鉗子で固定し、それを少し持ち上げ、脊髄の損傷を避けながら、マイクロハサミを右背外側に沿って平行に挿入し、マイクロハサミで椎弓板を切断します。左側で繰り返すと、脊髄が露出する可能性があります(図1B、2C)。
6. 椎骨を固定する前に、ユニバーサルアームを緩め、脊椎の両側の9^番目から10^番目のファセットジョイントを脊椎スタビライザーのマイクロ蚊鉗子でゆっくりと固定してください。マイクロ蚊鉗子のネジを締めると、椎骨が安定します。脊髄を水平面に合わせ、ユニバーサルアームを締め、椎骨を固定します(図2D)。

2.T9挫傷<

1. span style='background-color:transparent;color:#000000;'>T9レベルの脊髄が露出し、椎骨が固定されたら、手術顕微鏡の下のスリーブの内側の先端で脊髄を狙います（図2E）。
2. 顕微鏡下で脊髄と先端の関係を観察するのが簡単で、手術台を簡単に回転させることができるため、脊髄の後面と外側面から先端の表面が脊髄と平行になっているか確認してください。
3. 先端が椎弓切除術後に脊髄と接触する前に、先端の表面がスペア層の両側境界と平行であるかどうかを確認してください。なぜなら、それは脊髄に平行な自然な基準面であるためです。
4. T12-T13の棘間空間を見つけた後、インパクターの端が観測窓のマークと一致し、指定された高さ22mmに達するまでスリーブを下げてください。プルピンを引っ張ってウェイトを解放します(グループに応じて1.3 g、2.0 g、または2.7 g、各グループには3匹のマウスが含まれ、各グループには各時点で1つのマウスがあります)。
   注:脊髄は地面に対して平行で、先端に対して垂直であるべきです。手術台は非常にコンパクトであるため、手術台を動かして顕微鏡視野を確保してください。
5. 打撲が終わったらインパクターを取り外し、手術中の顕微鏡で脊髄損傷(SCI)の程度を観察してください。軽度のグループでは、明るい赤色の変化が見られますが、中等度のグループでは、損傷部位は3〜4秒で暗赤色を示し、おそらく目立つことが観察されます。重篤なグループでは、暗赤色の症状がすぐに現れることがあり、硬膜の明らかな隆起が現れますが、硬膜はまだ一貫した形をしています(図2F)。

結果

図 1.T13肋骨椎骨位置決め法の画像グラフ。(A) 13^thの肋骨とT13は比較的一定の解剖学的構造です。T13肋骨角は顕微鏡で容易に検出でき、オペレーターはそこから棘突起に向かって探り、T12-T13棘間腔を見つけることができます。次に、吻側に向かって順次プローブして、ターゲットの損傷椎骨(たとえば、T9)を見つけます。(B) 低侵襲の9^th胸部椎弓切除術は、隣接する椎体間の適切な椎弓板と椎間関節を維持することができます。

材料

<テーブル class='ck-table-resized'>この記事で使用された材料の一覧 名前 会社 カタログ番号 コメント エタノールFuyu Reagent64-17-5 蛍光顕微鏡KEYENCEBZ-X800<td style='width:278pt;'> Mice済南ペンギュエ実験動物会社C57BL/6J Microsurgery apparatus山東ULTバイオテクノロジー株式会社すべての手術器具はカスタムメイドです眼科用ハサミ、マイクロ蚊用鉗子、マイクロ手術用鉗子、マイクロハサミRWD Laboratory inhalation anesthetic stationRWD Life Science Co., LtdR550 小動物生体内マイクロCTイメージングシステムPerkinElmerQuantum GX2 脊髄損傷同軸プラットフォーム山東ULTバイオテクノロジー株式会社カスタムメイド(Feng's標準)（https://shop43957633.m.youzan.com/wscgoods/detail/367x5ovgn69q18g?banner_id=f.81386274~goods.7~1~
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