脊髄損傷のマウスモデルの生成

要約

出典:Kumar, S., et.al. 脊髄損傷後の褥瘡のマウスモデル。J. Vis. Exp. (2019)

このビデオは、マウスにおける脊髄損傷の詳細な誘発を示しています。麻酔をかけたマウスを解剖してT9-T10椎骨を露出させ、その棘突起を切除します。その後、露出した脊髄を切除して損傷を負わせます。その後、手術領域を閉じ、マウスを回復させます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1。手術用および非手術用器具の準備

1. オートクレーブで手術用および非手術用器具を滅菌します。
2. 手術台を70%エタノールで洗浄し、加熱パッドを37°Cに温めます
3. 加熱パッドを手術台の上に置き、滅菌済みの手術用ドレープで覆います。
   注: すべてのサバイバル手順では、ここでは無菌性を維持するために「ノータッチ」技術が使用されます。

2. 動物の準備とT9-T10脊椎椎椎弓切除術の実施

1. 10週齢の雄マウスの成体(Balb/c)を調達します。吸入器を使用して各動物に麻酔を誘発し、5%イソフルランから始めて2〜3%に減らし、残りの手順で鎮静を維持します。
2. 尻尾/足のピンチによる侵害受容刺激に反応を引き出さないようにして、完全な麻酔を確認します。
3. 背側(頭から尻尾まで)の毛を電動バリカンで剃り、脱毛クリームを塗って(3分)残りの毛を取り除きます。最後に、背部を流水/湿ったスクラブで洗い、動物をケージに戻します。
   注: これは、皮膚へのさらなる刺激や皮膚の傷の際の化学的汚染を避けるために必要です
4. 翌日、角膜に眼科用軟膏を塗布して、手術中の目が乾燥するのを防ぎます。次に、ベタジンスクラブと70%エタノールの3つの代替製剤で皮膚をこすります。
5. メスを使用して、T8-T12椎骨のレベルで背中の正中線に沿って皮膚切開(1.0~1.5cm)を行います。
   注: 椎骨のレベルは、T13 椎骨に対応する浮遊肋骨の位置を使用して T13 から椎骨をバックカウントすることで識別されます。
6. 皮下脂肪組織をきれいにして傍脊髄筋にアクセスし、ゆっくりと解剖して両側の棘突起と椎弓板を露出させます。
   注: この時点での過剰な出血や脊髄の損傷を避けるために、この手順は非常に慎重に行ってください。
7. 椎弓切除術を行い、マイクロ解剖鉗子を使用して脊椎椎弓板を優しく剥がすことにより、脊髄(T9-T10椎骨)を露出させます。
   注: 椎弓切除術を行い、過剰な脊髄が露出して損傷が生じやすくなるようにします。対照群では、椎弓切除術のみが行われます。

3. T9-T10 完全脊髄損傷 (SCI)

1. 鉗子を使用して、T8で脊柱を固定し、脊椎の湾曲を誇張するために持ち上げます。
2. 細いハサミを使用して、T9椎骨とT10椎骨の間の脊髄を脊柱管の床まで完全に切片化し、完全に切断されるようにします。
3. 手術用顕微鏡で完全な切断を観察した後、椎弓切除部位に皮下脂肪を塗布して、手術部位を閉鎖する前に脊髄をさらに保護します。
4. 最後に、創傷を閉じ、連続縫合糸を使用して傍脊椎筋と表在筋膜を縫合し、次に縫合クリップを使用して皮膚を閉じます。
5. SCI後、翌日の排便を観察します。ただし、手動の膀胱排出によって膀胱を管理します。
   注: バッソマウススケール(BMS)は、SCI後の後肢機能回復の進行状況を2日目から毎週モニターするために使用することができます。

材料