このビデオでは、血小板数のスクリーニング、採血と遠心分離、血小板の単離による高品質の多血小板血漿(PRP)の調製を実演しています。このPRPは、組織の再生と治癒の治療用途に使用されます。
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方法論記事
ヒト末梢血からの多血小板血漿の調製
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2026年1月15日
この記事について
要約
プロトコル
人間の参加者が関与するすべての手順は、人間の福祉に関する制度的、国内的、および国際的なガイドラインに準拠して実施され、地元の施設審査委員会によって審査されています。
1. サンプルコレクション
}予備的な血球数を使用して患者をスクリーニングし、血小板減少症を除外し、ベースラインの細胞数を確立します。これを行うには、細胞計数に臨床グレードの血球計算盤を使用します。血小板数が150,000細胞/μLを超えていることを確認してください
サンプルを採取する前に、患者が十分に水分を補給していることを確認してください。これは、舌の目視検査、皮膚の膨満感、および血圧の測定によって確認することができます。
5 mLの酸性-クエン酸-デキストロース-アデニン(ACDA)抗凝固剤を1:10の比率で充填した2 x 50 mLシリンジを使用して、患者の肘前静脈から100 mLの末梢静脈血を採取します。.収集したシリンジを傾けて抗凝固剤を適切に混合し、血液サンプルの凝固を防ぎ、次のステップに進みます。
注:採血が遅いと、採取した血液と抗凝固剤との混合が不十分になり、凝固する可能性があります。したがって、採血には最低18Gのカニューレを使用してください。シリンジ内の血液100 mLを、各チューブに10 mLを入れた15 mLの円錐底遠心分離チューブに移します。
2. 遠心分離と単離
?遠心チューブを室温に維持された臨床グレードの卓上遠心分離機に置き、最初のソフトスピンを100 x gの速度で15分間実行します。抗凝固血液は、下部が赤血球、上部が血漿、中央がバフィーコートの3つの層に分離します。
18Gの滅菌脊髄針を使用して、3層サンプルの最上層を滅菌状態でピペットで固定し、別の円錐形の底部遠心分離チューブに回収します。収集された血漿10 mLごとに個別のチューブを確保します。.
注:バフィーコートを含めるかどうかの決定は、分離しようとしている多血小板血漿の性質に依存し、それはその臨床応用の性質に依存します。白血球に乏しいPRPが所望の製品である場合、バフィーコート層を含めることは控えてください。一方、白血球に富むPRPが所望の製品である場合、上部の血漿層とバフィーコートは、遠心分離の2回目のラウンドのためにピペットで排出されます。15 mLの遠心分離チューブに収集した血漿を、それぞれ10 mLの血漿とともに、1600 x gで20分間ハードスピン遠心分離します。試験管の底にある血漿ペレットに存在する血小板。上清を別のチューブに集めます。
18 Gの滅菌脊髄針を使用して、血小板ペレットを5 mLシリンジにピペットで移します。ペレットが入ったすべての試験管を1本の5 mLシリンジに集めて塗布します。
回収したペレットを、2回目の遠心分離後に遠心チューブ内の上清血漿を使用して臨床使用に十分な量で再構成します。
3. 検証
}臨床グレードの血球計算計を使用して細胞カウントに準備された最終PRPを対象とし、血小板数を計算し、PRPの絶対血小板数を計算し、ベースラインを超えて達成された血小板濃度勾配、およびプロトコルの血小板回復効果を次の式を使用して計算します。
絶対血小板数=PRPの血小板数(μL)×1000×PRPの量(mL)
血小板濃度勾配=
血小板回復効率=
例えば、ベースライン血小板数が200,000/μLの血液100mLをPRP調製に用いるとします。 そして、最終血小板数が3,000,000 /μLの5mLのPRPが得られる。上記のパラメータは次のように計算されます:
絶対血小板数 = 3,000,000 x 1000 x 5 = 150億血小板
血小板濃度勾配 = 3,000,000 / 200,000 = 15
血小板回復効率 = 3,000,000 x 1000 x 5 / 200,000 x 1000 x 100 = 75%プロトコルの回復効率を確保しますサイクルを繰り返すことで。利用される効果的なプロトコルは、ベースラインの5倍を超える濃度勾配を提供し、>80%の回収効率を実現します。PRPの量の望ましい使用量に基づいて、送達する必要がある血小板数をそれに応じて滴定できます。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 抗凝固剤クエン酸ブドウ糖溶液 IP | フレゼニウス・カビ、インド | ACDAIP/L/A/19/00 | |
| BD Quincke Needle | ベクトン・ディキンソン、スペイン | 405125 | 18G |
| DISPOVAN 50ml syringe | Hindustan Syringes & Medical Devices Ltd, インド | ||
| DISPOVAN 5ml syringe | Hindustan Syringes & Medical Devices Ltd, India | ||
| Spinwin Tube Conical Bottom | ターソン、 インド | 546021 | |
| Sysmex XN-350 | Sysmex Inc., USA | XN 350 | |
| テーブルトップ臨床遠心分離機 | REMI, インド | R-8C | 4x4 ウェルスイングアウトローター |
