蛍光寿命イメージング顕微鏡を用いた組織切片のアミロイド構造の解析

Abstract

出典:Nyström, S., et al., ハイパースペクトル共焦点顕微鏡法および蛍光寿命イメージングによる発光共役オリゴチオフェンで染色されたアミロイド組織イメージング。J. Vis. Exp. (2017).

このビデオでは、hFTAA色素を使用して、アミロイド構造を蛍光寿命イメージング顕微鏡またはFLIMで解析し、アミロイド組織を反映して、色分けされた画像でコンパクトなコアを青/緑、不安定な周辺を赤/黄色で明らかにする方法を示します。

Protocol

1. 組織サンプルの調製

注: 多くの組織タイプは、アミロイドマーカーとしてヘプタメルホルミルチオフェン酢酸(hFTAA)を使用してイメージングできます。hFTAAは凝集体構造に敏感です。したがって、染色は、好ましくは、エピトープ曝露のない中断されていない凝集体に対して実施されるべきである。組織の固定が最小限に抑えられている場合、最適なスペクトル品質が達成されます。したがって、染色時にエタノールに穏やかに固定された新鮮な凍結材料が好ましい。しかし、、例えば、ホルマリンで固定された組織でもアミロイド沈着物を検出することは可能です。hFTAAは一般的に組織によく浸透します。目的のイメージング技術に適した試料の厚さを選択します。

1. ホルマリン固定パラフィン包埋切片を使用する場合は、キシレンで一晩脱パラフィンする必要があります。次に、切片を99%エタノール、70%エタノール、dH₂O、およびリン酸緩衝生理食塩水(PBS)の....

Materials