ショウジョウバエの脳をマトリックスに埋め込むことで、概日時計ニューロンのタイムラプスイメージングが可能

要約

Source: Sabado, V., et al., 名越、E. 単一セル解像度蛍光ライブイメージング ショウジョウバエ 幼虫の脳文化における概日時計。 J. Vis. Exp. (2018).

このビデオは、 ショウジョウバエし、その後、概日時計ニューロンのタイムラプス蛍光イメージングを行い、明暗サイクルと同期したリズミカルな活動を分析します。

プロトコル

1. 脳外植片の3Dマトリックスへの埋め込みとマウント(~20分)。

結果

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
KH2PO4	Sigma-Aldrich	P5655	彼らが研究室にあるものとまったく同じかどうかはわかりません。私は可能な限り「昆虫細胞培養に適した」を選択しました
CaCl2	Sigma-Aldrich	C7902
MgSO4.7H2O	Sigma-Aldrich	230391
NaCl	Sigma-Aldrich	S5886
NaHCO3	Sigma-Aldrich	S5761
D-(+) Glucose	Sigma-Aldrich	G7021
酵母抽出	Sigma-Aldrich	Y1000
Insulin	Sigma-Aldrich	I0516-5ML
Penicillin-Streptomycin	Sigma-Aldrich	P4333
BIS-TRIS	Sigma-Aldrich	B4429
L-(−)-リンゴ酸	Sigma-Aldrich	M7397<
D-(+)-トレハロース二水和物	Sigma-Aldrich	T0167<
コハク酸	Sigma-Aldrich	S9512
フマル酸	Sigma-Aldrich	F8509
α-ケトグルタル酸	Sigma-Aldrich	K1128<
非熱不活性化、胎児子牛血清(FCS)マイコプラズマおよびウイルススクリーニング済み	BioConcept Ltd. Amimed	2-01F30-I
HEPES-KOH, pH 7.4	E&K Scientific Products	EK-654011
KCl	Sigma-Aldrich	P5405
NaH2PO4	Sigma-Aldrich	S5011
Sucrose	Sigma-Aldrich	S7903
ウシ血漿からのフィブリノーゲン	Calbiochem (Merck)	341573-1GM	注意:吸入、皮膚との接触、および飲み込むと有害です。層流下で操作
ウシプラズマからのトロンビン	Sigma-Aldrich	T9549	注意：健康被害、手袋を使用してください
PDF, NH2-NSELINSLLSLPKNMNDA-OH	Chi Scientific	custom made
Vacuum grease	Sigma-Aldrich	18405
35 mm 皿、No. 1.5 カバースリップ、ガラス径 20 mm、コーティングなし	MatTek	P35G-1.5-20-C
Corning Falcon Easy-Grip Tissue Culture Dishes	Fisherscientific	08-772A
Sterile 500 mL Steritop-GP 33 mm スレッドボトルトップフィルター、0.22 μm	Millipore	SCGPS05RE
ポリテトラフルオロエチレン(PTFE)フィルム	Dupont	200AテフロンFEPフィルム
Millex-HV シリンジフィルターユニット, 0.45 μm, PVDF, 33 mm, ガンマ滅菌済み	Millipore	SLHV033RS
Millex-GV シリンジフィルターユニット, 0.22 μm, PVDF, 33 mm, ガンマ線滅菌済み	Millipore	SLGV033RS
3ウェルガラス解剖皿	任意の会社
Fine Forceps, size 5, Dumont	ファインサイエンスツール	11254-20
タンデムスキャナ反転TCS SP5共焦点顕微鏡、共振スキャナとHyD光電子増倍器	Leica microsystem CMS GmbH	<
温度制御チャンバー	Life Imaging Services	キューブ&ボックス温度制御システム、カスタムデザイン
-stage-top 湿度コントローラー	Life Imaging Services	custom made
Water Immersion Micro Dispenser: dispenser, extended micro-pump MP6 series and Autoimmersion Objective Controller software	Leica microsystem CMS GmbH	<
SUM-stack作成と3D補正ドリフトプラグイン	ImageJ software
10x 反復デコンボリューション	AutoQuant と Imaris ソフトウェア

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