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原子間力顕微鏡を用いたマウス脳から単離されたポリソームのイメージング

May 29th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

出典: Lunelli, L., et.al. 原子間力顕微鏡で脳ポリソームを覗き込む. J. Vis. Exp.（2016).

このビデオでは、原子間力顕微鏡を用いたポリソームのイメージングを実演しています。ニッケルイオン被覆マイカシートは、RNAをリボソームに付着させてアンカーします。サンプルを洗浄し、乾燥させ、顕微鏡ステージにマウントします。カンチレバーチップはサンプル表面をスキャンし、レーザーのたわみを記録してトポロジーをマッピングします。ソフトウェアは、歪みを補正し、高解像度のポリソーム構造を視覚化するために使用されます。

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

注意: サンプルのRNA分解を避けるために、すべてのバッファーをDEPC処理水で調製し、RNase汚染を最小限に抑えてください。

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Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
シクロヘキシミドシグマ1810ライセートの調製
DNAseIThermo Scientific89836ライセートの調製
RiboLock RNAse阻害剤ライフテクノロジーズEO-0381の調製ライセート
DEPCシグマ40718ライセートの調製
Triton X100SigmaT8532ライセートの調製
DTTSigma43815ライセートの調製
デオキシコレートナトリウムシグマD6750ライセートの調製
マイクロ遠心分離機エッペンドルフ5417Rライセートの調製
ショ糖シグマS5016ショ糖勾配調製
超遠心分離機ベックマン・コールターオプティマLE-80Kショ糖勾配遠心分離機
超遠心分離機ローターベックマン・コールターSW 41 Tiショ糖勾配遠心分離機
ポリアロマーチューブベックマン・コールター331372ショ糖勾配遠心分離装置
密度勾配分画装置テレダイン・イスコ67-9000-176ショ糖勾配分画
AFMアサイラムリサーチサイファーポリソームの可視化

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