近赤外蛍光と高分解能スキャニングを用いたげっ歯類脳におけるタンパク質発現の測定

要約

出典: Kimmelmann-Shultz, B., et.al. }近赤外蛍光と高解像度スキャンを使用して、げっ歯類の脳内のタンパク質発現を測定します。J. Vis. Exp. (2019)

このビデオは、げっ歯類の脳内でのタンパク質発現を測定するための近赤外蛍光と高解像度のスキャン方法を示しています。

プロトコル

動物サンプルを含むすべての手順は、適切な動物倫理審査委員会によって審査され、承認されています。

1. イメージング

1.組織を下に向けて、スライドを近赤外線スキャンインターフェースに置きます。選択ツールを使用して、スライドガラスを 1 枚または一度に複数のスライドに画像化します。

2. オフセット0nm、分解能21μmの最高品質設定を使用してスライドを画像化します。スキャンには、使用するスキャン機器にもよりますが、通常13〜19時間かかります。

3. 画像を画像解析ソフトウェア(Image Studioなど)にインポートして、半定量的タンパク質解析の表示とマーキングを行います。

2.タンパク質発現解析

1.画像解析ソフトウェアを開き、画像がスキャンされた作業エリアを選択します。

2.スキャンした画像を画像解析ソフトウェアで開いてスキャンを表示し、生の画像や総定量化された放射を変更することなく、表示する波長、コントラスト、明るさ、倍率を調整します。

3. 定量化のための主要な領域を特定し、ページ上部の分析 タブを選択し、次に 長方形を描画 （または楕円を描く/ フリーハンドを描く) を使用して、定量化される領域に長方形を描画します。

4. 長方形のサイズを表示するには、画面左下の形状を選択し、右下の列を選択します。形状のサイズを識別するために、Height と Width 列を追加します。

注: 定量を比較する際には、形状サイズを制御することが重要です。その領域の排出量を正確にサンプリングするために、目的の定量化位置に配置された同一の形状を使用することをお勧めします。

5.次に、形状に名前を付けて繰り返します。すべてのリージョンがサンプリングされると、列、タブから利用可能なデータを集約して分析できます。

材料