EAEマウスモデルにおける生物発光イメージング

要約

出典: Schmitz, K., et al., マウスの多発性硬化症のEAEモデルにおける視神経炎および脳炎症の生物発光および近赤外イメージング. J. Vis. Exp. (2017年)。

このビデオでは、生物発光イメージングを使用して、実験的自己免疫性脳脊髄炎または視神経のEAE誘発性炎症を視覚化およびモニタリングする方法を示します。これには、マウスの位置決め、試薬注入、および経時的な生物発光の変化を監視するためのシーケンシャル画像のキャプチャが含まれます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 視神経炎および脳炎症の生物発光イメージング

1. イメージングシステムのセットアップ
   1. 生物発光および近赤外信号の解析が可能な機器であれば、任意の機器でin vivoイメージングを行うことができます。
   2. すべてのイメージング手順では、マウスを2〜2.5%イソフルラン麻酔未満に保ちます。
   3. 1匹または2匹のマウスを装置内で並べて配置し、中央のガス供給装置を使用します。上部脊椎を中央に配置します。
   4. 薬の効果を評価するには、2匹のマウスを同時に使用してマウスのペアを比較します(グループごとに1匹)。これは、生物発光イメージングにとって重要です。
   5. 免疫部位を黒い布でシールドし、写真とベースライン画像を撮影して、マウス/マウスの正しい位置を評価します。すべての画像で、カメラから6.5cmの距離でBフォーカスを使用します。
2. 生物発光性炎症プローブの注射とイメージング
   1. in vivoイメージングシステム設定を使用します:Epi-BLI、Emフィルターオープン、Exフィルターブロック、fstop 1、ビニング8、フォーカスB = 6.5 cm、広告露出120秒;ベースライン イメージを撮影します。
   2. 100 μL i.p.に、すぐに使用できる化学発光試薬(40 mg/mL)を注入します。シリンジを充填する前によく混ぜます。
   3. 注入の5分後、10分後、15分後に生物発光画像を撮影します。生物発光ピークの時間経過は動物によって異なります。
      注: ピークは注入後5〜10分で発生します。15 分で減少する場合は、それ以上の画像が不要であることを示します。対照群と治療群のマウスペアを使用して、異なる時間経過による軽微なバイアスを排除します。
   4. 実験に関連する説明を入力します。ダイアログボックスが自動的にポップアップするのを観察します。これには、マウスの系統、性別、時点、プローブ注入の時間、グループ、etcなどの情報が含まれます。すべてのファイルを1つのフォルダに保存します。それらには、時間タグとすべての説明があります。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
XenoLight RediJect Inflammation Probe	Perkin Elmer, Inc., Waltham, USA	760535	Imaging Probe, activatable by oxidases, useful for imaging of inflammation
PLP139-151/CFA emulsion	Hooke Labs, St Lawrence, MA	EK-0123	EAEインダクションキット
IVIS Lumina Spectrum	Perkin Elmer, Inc., Waltham, USA		生物発光および赤外線イメージングシステム
LivingImage 4.5 ソフトウェア	Perkin Elmer, Inc., Waltham, USA	CLS136334	IVIS analysis software
Isoflurane	Abbott Labs, 米国イリノイ州	26675-46-7	麻酔薬