方法論記事

共焦点マクロスコピーを用いた出生後小脳顆粒細胞遊走の Ex vivo イメージング

2025年6月17日

この記事について

要約

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

出典:Bénard, M., et al. Ex Vivo Imaging of Postnatal Cerebellar Granule Cell Migration Using Confocal Macroscopy.J. Vis. Exp. (2015)

このビデオは、出生後のラット脳の小脳切片中の顆粒細胞のex vivoの移動を追跡する共焦点巨視的方法を示しています。

プロトコル

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動物サンプルを含むすべての手順は、適切な動物倫理審査委員会によって審査され、承認されています。

1. 生きている介在ニューロンの蛍光染色

1.大口径ガラス製の切り捨てられたパスツールピペットで小脳スライスを6ウェルプレートに移します(最大3スライス/ウェルあたり)。ハンクス平衡塩溶液(HBSS)培地を吸引します。

2. 蛍光色素のローディング溶液5ml(最大3個)でスライス(最大3個)をインキュベートします。

3. 光から保護するために、マイクロプレートをアルミホイルで覆ってください。35rpmのジャイロ移動テーブルに室温で10分間置くと、細胞の標識が容易になります。

4. Transwellインサートのメンブレン上でスライスを転写します（3.0 μmの孔径;図1D)ワイドボアガラス製の切り捨てられたパスツールピペット付き。ローディング媒体をピペットで吸引します。

5. インサートを取り外し、ウェルに1.9mlのダルベッコ修正イーグルメディウム(DMEM)を入れます。インサートを交換し、スライスの上に100 μlのDMEMを加えて組織を覆います。

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結果

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figure-results-1

図1:Ex vivo P10小脳スライスの培養。(A)P10ラットから小脳を解剖した。スケールバー = 6 mm. (B) 生体厚さ180μmの小脳スライスを立体顕微鏡で顕微鏡で撮影。スケールバー = 3 mm. (C) 高倍率では、小脳の4つの皮質層(外部顆粒層(EGL)、分子層(ML)、プルキンエ細.......

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
ダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)栄養混合物 F-12Sigma-AldrichD8437
Cell Tracker Green CMFDAInvitrogenC2925
ポリエステルトランスウェルクリアインサートコーニング3452
6ウェル細胞培養クラスターコーニング3516
DMSOフィッシャーサイエンティフィックBP231-100
ジャイロロッカー、SSL3スチュアート
CO₂インキュベーター、 Hera Cell 150サーモサイエンティフィック
共焦点マクロスコープ、TCS LSIライカマイクロシステムズ
CO₂-controllerPeCon
ハンクの平衡塩溶液10xシグマ・アルドリッチH1641
容量可変ピペット(0.5-10μL)エッペンドルフ4910 000.018
温度コントローラーPeCon

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タグ

ImageJ Manual Tracking Z Transwell

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