走査型電子顕微鏡によるマウス脳脈絡叢の可視化

Abstract

出典: Van Wonterghem, E., et al.マウス脈絡叢の顕微解剖およびホールマウント走査型電子顕微鏡の可視化。J. Vis. Exp.(2022年度)

このビデオでは、走査型電子顕微鏡(SEM)を使用して、マウスの脳から脈絡叢組織を調製し、イメージングする方法を示します。このプロセスには、組織の固定、脱水、および導電性白金層によるコーティングが含まれ、サンプルを安定化してイメージング用に準備します。SEMは、微絨毛で上皮細胞の詳細な画像をキャプチャし、組織の構造的特徴に関する洞察を提供します。

Protocol

動物サンプルを含むすべての手順は、適切な動物倫理審査委員会によって審査され、承認されています。

1.走査型電子顕微鏡(SEM)を使用した脈絡叢(CP)組織の形態学的解析

注意:次の処理ステップでは、有毒溶液が使用されます。サンプル調製はヒュームフードで行うことをお勧めします。

1. 以下に説明するようにSEMのサンプル調製を行います。
   1. 新たに単離したCPを、0.1 M Na-カコジル酸緩衝液(pH 7.4)に2%パラホルムアルデヒドと2.5%グルタルアルデヒドを含有する新たに調製した固定溶液に移します。4°Cで一晩インキュベートします
      注:CP組織は非常に壊れやすく薄いため、組織を小さな標本バスケット(材料表を参照)に入れてバッファー間で移す必要があります。このようにして、組織の構造がよりよく保存されます。カコジル酸ベースの固定液は、強力なカコジル酸緩衝液がEM固定液中のグルタルアルデヒドの低pHに対抗できるため、リン酸緩衝生理食塩水(PBS)ベースの固定液よりも使用されます。
   2. サンプルを3〜5 mLの0.1 M Na-カコジル酸緩衝液(pH 7.4)でそれぞれ5分間3回洗浄します。
   3. 0.1 M Na-カコジル酸緩衝液中の 2% 四酸化オスミウム 3-5 mL にサンプルを 3-....

Materials