原子間力顕微鏡を用いたマウス脳組織の機械的特性の評価

Abstract

出典:Canovic, E. P., et al.原子間力顕微鏡、衝撃インデンテーション、およびレオメトリーを使用した脳組織のマルチスケールの機械的特性の特性評価。J. Vis. Exp. (2016)

このビデオは、球状プローブを備えた片持ち梁が組織と相互作用し、加えられた力の下で曲がる脳組織の粘弾性特性を測定するための原子間力顕微鏡(AFM)の使用を示しています。検出器に偏向されたレーザービームは、カンチレバーを追跡してくぼみの深さと力の緩和を測定し、組織の機械的特性の特性評価を可能にします。

Protocol

動物サンプルを含むすべての手順は、適切な動物倫理審査委員会によって審査され、承認されています。

1. 原子間力顕微鏡(AFM)対応インデンテーション

1. 直径60mmのペトリ(P60)皿を、製造元の指示に従って淡水産貝由来の生体接着剤で準備します。
   1. 0.1 M重炭酸ナトリウムからなる中性緩衝液を、最適pH 8.0の滅菌水中に調製します。重曹緩衝液を(0.2ミクロン)フィルター滅菌し、4°Cで保存します。
   2. 層流フードで、重曹緩衝液に6.25%ムール貝由来の生体接着剤と3.125%水酸化ナトリウム(NaOH)の溶液を混合します。
   3. 100μlの生体接着溶液を直径60mmのペトリ(P60)ディッシュにピペットで固定し、ピペットチップを使用して溶液を直径3〜5cmの円に広げます。
   4. P60ディッシュを層流フードに蓋をせずに放置し、溶液を乾燥させます(~30分)。皿をリン酸緩衝生理食塩水(PBS)で1回、滅菌水で2回洗います。皿を層流フードで風乾させ、密封されたビニール袋に入れて4°Cで最大1か月間保管します。
2. AFMをキャリブレーションし、AFMに脳サンプルを設定します。注:メーカーのAFMキャリブレーション手順に従ってください。
   1. 公称ばね定数が0....

Materials