3次元イメージングによる脳スライスにおけるリアルタイム遺伝子発現モニタリング

この記事について

要約

出典: Shimojo, H., et al.マウス神経新生中のノッチシグナル伝達動力学の実時間生物ルミネセンスイメージングJ. Vis. 経験。(2019年)

このビデオでは、トランスジェニックマウス胚からの皮質スライス培養物を使用して、3次元イメージングを通じて遺伝子発現を監視します。生物発光、蛍光、明視野画像を使用して、天然組織内のニューロン分化中のリアルタイムの遺伝子発現を視覚化します。

プロトコル

動物サンプルを含むすべての手順は、適切な動物倫理審査委員会によって審査され、承認されています。

スライス培養におけるルシフェラーゼレポーター発現の可視化
1. 解剖を開始する前に、発光ライブイメージングシステムを開始します。皮質スライス培養には、40%O₂、5%CO₂、37°Cの条件を使用します。
2. 40倍対物レンズに浸漬油を塗ります。サンプル皿を顕微鏡ステージに置きます。蛍光試験画像を取得し、励起光の照射下で位置と焦点面を関心領域に設定します。
3. 3次元(発光、蛍光、明視野)取得によるタイムラプス取得を24時間実行します(図1F-H)。発光画像取得には、低転送速度(50 kHz)、2x2/4x4ビニング、露光時間10分/5分のカメラ設定を使用します。蛍光および明視野画像取得には、中間転送速度(1 MHz)、1x1ビニング、および100 ms露光時間の設定を使用します。

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結果

図1:胚性終脳の皮質スライスを作成し、皮質スライス培養におけるDll1タンパク質のダイナミクスを視覚化します。(A)蛍光実体顕微鏡によるEGFPの発現確認。赤い矢印は、EGFP(Enhanced Green Fluorescent Protein)を発現する皮質の領域を示しています。左半球(a)、右半球(b)、および中脳(c)。(B)点線は、(<...

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前	会社	カタログ番号
冷水循環器(チラー)	Julabo	モデル:F12-ED
冷却CCDカメラ	Andor Technology	モデル:iKon-M 934
インキュベーターシステム	TOKAI HIT	モデル:INU-ONICS
倒立顕微鏡	オリンパス	モデル:IX81
倒立顕微鏡	オリンパス	モデル:IX83
LED照明装置	CoolLED	モデル:pE1
MetaMorph	MOLECULAR DEVICES	モデル:40000
混合ガスコントローラー	トッケン	モデル:TK-MIGM OLO2
対物レンズ	オリンパス	モデル:UPLFLN 40X O

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