高密度リポタンパク質模倣ナノ粒子への神経成長因子のカプセル化

要約

出典: Zhu, J., et. al., 神経成長因子カプセル化のための新規 HDL 模倣ナノ粒子の調製と特性評価。J. Vis. 経験。(2017年)

このビデオでは、プロタミン支援カプセル化と脂質ベースの自己組織化を使用して、潜在的な神経栄養送達アプリケーションのためのNGF負荷HDL模倣ナノ粒子の段階的アセンブリを示します。

プロトコル

1. NGF HDL模倣ナノ粒子の調製

賦

1. 形剤、ホスファチジルコリン(PC)、スフィンゴミエリン(SM)、ホスファチジルセリン(PS)、オレイン酸コレステリル(CO)、およびコハク酸D-α-トコフェロールポリエチレングリコール(TPGS)をエタノールに溶解し、1 mg/mL.
   注:ストック溶液を分注し、-20°Cで保存しました。オレイン酸コレステリルは暗いボトルに保管されました。PC、SM、PS、CO原液は、-20°Cでそれぞれ最大6、3、12、12ヶ月間安定していました。TPGS溶液は、-20°Cで少なくとも12か月間安定していました。
2. 10 μLのNGF(水中1 mg / mL)と10 μLのプロタミンUSP(水中1 mg / mL)を1.5 mL微量遠心チューブで混合し、室温で10分間放置して複合体を形成します。
   注:NGFおよびプロタミンストック溶液を分注し、-20°Cで保存しました。NGFストックでは、凍結と解凍を繰り返すことは推奨されません。
3. 59 μLのPC、11 μLのSM、4 μLのPS、15 μLのCO、および45 μLのTPGSをガラスバイアルに加えます。穏やかな窒素流の下でエタノールを約5分間混合し、蒸発させます。すべての賦形剤は、ガラスバイアルの底に油性の薄い膜を形成する必要があります。
4. 1 mLの超純水(タイプ1)をバイアルに加え、室温で9,500 rpm(8,600 x g)で5分間均質化して、プロトタイプナノ粒子(NP)を形成します。
5. ステップ1.2で調製した複合体をプロトタイプのNPに加え、ガラスバイアル内の小さな攪拌棒を使用して攪拌しながら37°Cで30分間インキュベートします。
6. 室温でさらに30分間攪拌してNPを冷却します。これを冷却した後、106 μLのApo A-I(1.49 mg / mL)を加え、室温で一晩撹拌して、最終的なNGF HDL模倣NPを形成します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
組換えヒトベータ-NGF	クリエイティブ バイオマート	NGF-05H
L-a-ホスファチジルコリン (PC)	Avanti	131601P	95%、卵、チキン
スフィンゴミエリン (SM)	Avanti	860062P	ブレイン、ブタ ホ
スファチジルセリン (PS)	Avanti	840032P	脳、ブタ
ステリル オレイン酸 (CO)	シグマ	C9253
D-α-トコフェロール ポリエチレングリコール コハク酸塩 (TPGS)	BASF	9002-96-4	ビタミン E ポリエチレングリコール コハク酸プロタミン
シ	グマ	P3369	は USP 試験仕様
に適合アポリポタンパク質 A1、ヒト血漿	Athens Research &	Technology 16-16-120101	1mg in 671 μl 10 mM 重炭酸アンモニウム、pH 7.4
ホモジナイザー	Tekmar	T 25-S1
Polytron ホモジナイザー	Kinematica	PT 1200C

コレ硫酸;