マウスモデルにおけるグリア細胞リプログラミングのためのウイルスベクターの定位注射

要約

出典: Pereira, M. et al., In Vivo Direct Reprogramming of Resident Gial Cells into Interneurons by Intentrebral Injection of Viral Vectors.J. Vis. 経験。(2019年)

このビデオは、トランスジェニックマウスの大脳皮質にアデノ随伴ウイルスを定位注射して、Cre依存性ニューロンのリプログラミングと蛍光レポーター遺伝子をグリア細胞に送達する方法を示しています。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1.脳への再プログラミング因子の注入

1. 動物のセットアップ、定位固定配置および穴あけ注:このプロトコルは、NG2(ニューロン-グリア抗原2)グリアを介在ニューロンに再プログラミングするためのAscl1、Lmx1a、およびNurr1(ALN)の使用に焦点を当てています。私たちの経験では、同様の表現型の介在ニューロンは、他の因子の組み合わせを使用して取得できます
   定位
   1. 固定フレームのM / L-D / Vアームを所定の位置(動物の上)に移動し、固定します。
      注:定位固定フレームを使用すると、前方/後方(A / P、Y軸)、内側/外側(M / L、X軸)に沿ってシリンジを調整できます。 および背側/腹側(D / V、Z軸)軸。
   定位
   2. 固定フレームの異なる軸に沿って注射器を動かして、ガラス毛細血管の先端をブレグマ(異なる頭蓋プレートが交わる接合点)のすぐ上に近づけます。
   3. 毛細管の先端が A/P 面と M/L 面の両方で完全に真っ直ぐであることを確認してください。あいまいな前骨の場合は、外側縫合糸と正中線縫合糸の平均を取ります。
   4. 毛細管の先端がブレグマの上に正しく配置されたら、デジタル座標カウンタのM/L値とA/....

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
動物モデル
NG2-Creマウス	Jackson	NG2-CrexB6129、在庫#008533
試薬
水
生理食塩水	Apoteket AB		70%
エタノール	ソルベコ
イソルフラン	Apoteket AB		温水で 1% 溶液に希釈
Virkon	Viroderm	7511
ペントバルビタール	Apoteket AB	P0500000	RSGの60 mg/ml
クロース	Merck	S0389-500G
Trypan Blu	Thermo Fisher Scientific	15250061
トロビーズ	Lumafluor	R170
Buprenorphine	Apoteket AB
機器			ゾーリンゲン
さみ	VWR	233-1552	生化学
セット	VWR	232-0007
鉗子	VWR	232-0120
メスホルダー	VWR	RSGA106.621	番号 20
メス	VWR	RSGA106.200
定位固定フレーム	Stoelting Europe	51500D
マウスイヤーバー	Stoelting Europe	51648	5 ul
シリンジ、取り外し可能な針付き	Hamilton Company 65		0.75 内径と 1.5 外径。
ガラスキャピラリー	Stoelting	50811
ガラスキャピラリープーラー	Sutter company	P-1000
歯科用ドリル	Agnthos AB	1464
シェーバー	Agnthos AB	GT420
イソフルランチャンバーとポンプ	Agnthos AB	8323101	2 mL
シリンジ	メルク	Z118400-30EA	25G
ニードル	メルク	Z192414 アルドリッチ
および新生児ラット 定位固定フレーム用アダプター	ストールティング	51625
加熱パッド	Braintree scientific, inc	53800M
コットンガーゼ	フィッシャーサイエンティフィック	22-037-902
ゴムチューブ	Elfa Distrelec	HFT-A-9.5/4.8 PO-X BK 150
綿棒フィ	ッシャーサイエンティフィック	18-366-473

スレの用量での最終処置用はピン マウス