麻酔マウスのてんかん病巣へのGABAの電気泳動送達

要約

出典: Slezia, A. et al.てんかん病巣へのγ-アミノ酪酸(GABA)の電気泳動送達はマウスの発作を予防するJ. Vis. 経験。(2019年)

このビデオは、麻酔マウスの発作活性を阻害するためのガンマアミノ酪酸(GABA)の電気泳動送達を示しています。プローブの埋め込み、神経活動の記録、発作の誘導、およびマイクロ流体イオンポンプを介した制御されたGABA送達に関わる手順を概説し、その治療効果を評価します。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1.手術/開頭術

1. 麻酔をかけたマウスの頭を定位固定フレームに固定します。30 Gの針を使用して、局所鎮痛薬ロピバカイン(5 μL、7.5 mg / mL、 材料表を参照)を計画された切開部位に皮下注射します。有効になるまで5分待ちます。
メ
2. スで頭蓋骨の上の皮膚にまっすぐな正中線を作ります。細い鉗子で皮膚を横にそっと引っ張り、ブルドッグのセレファインクランプで脇にクランプして、頭蓋骨を露出させてさらに作業します。
3. メスまたは同様の道具で筋膜の頭蓋骨をきれいにします。表在性出血の場合は、綿棒またはペーパータオルの小片で血液を取り除きます。
4. ポリ(3,4-エチレンジオキシチオフェン)ポリスチレンスルホン酸塩(PEDOT:PSS)でコーティングされたアースネジ(サイズ:#00、直径:0.047インチ、長さ:1/8インチ、 材料表を参照)をはんだ付け線で取り、コネクタでアンプヘッドステージに接続します。
5. 目的の穴の部位で頭蓋骨を湿らせ、硬膜が見えるまで小脳の上の頭蓋骨に細い丸いドリルビット(直径0.4 mm)を使用して高速で穴を開けます。アースネジを穴に入れ、小脳の上部に達するまで精密ドライバーでねじ込みます。
   注:

結果

図1:マウス脳における頭蓋硬膜切開術とインプラントの局在化。 (A)マウス脳における手術、開頭術、およびインプラントの標的の概略図。(B) 3 つのデバイスの移植に定位座標と角度を使用しました。μFIP = 20°中外側(ML)、-1,200μm DV(緑)。マルチチャンネルシリコンプローブ = 20° AP、-1,800 μm DV (青)。シリンジ付きマイクロピペット = 20° LM、-1,500 μm DV.......

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
4AP	Sigma	275875
Amplifier	Neuralynx、モンタナ州、米国	Lynx 4SX
アンプ	Ampliplex	KJE-1001
Atlas Stereotaxique	アレン アトラス	978-0470054086
ボロシリカ ガラス ピペット	サッター	BF120-69-15
ブレイン マトリックス	WPI	RBMA-200C
骨トリマー	FST	16109-14
コネクタ	INSTECH	SC20/15
コトン タイジ	モノプリ	EMD 6107OD
カバースリップ	メンゼルガラス	15747592
DiI ステイン	サーモフィッシャー	D282
DMSO	シグマ	11412-11
ドリル	FOREDOM	K1070
鉗子	FST	11412-11
GABA	シグマ	A2129
GOPS	シグマ	440167-100M
ハミルトン シリンジ	ハミルトン	80330
ヘッドスクリュー	コンポーネント サプライ	TX00-2FH
加熱パッド	ハーバード装置	341446
インジェクション ポンプ	WPI	UMP3-3
Keithley	Tektoronix	216A
ケタミン	Renaudin	5787419
磁気ホルダー	Narishige	GJ-1
マウス	チャールズ リバー	612
モーター マニピュレーター	Scientifica、英国	IVM
水素二ナトリウムリン酸塩	シグマ	255793
酸二水素ナトリウム	グマ	7558807
NeuroTrace DiI	Thermofisher	N22880
ペーパータオル	キンバリー・クラーク	7552000
PB	シグマ	P4417
PEDOT:PSS	CLEVIOS		81076212
PFA	Acros Organic	30525-89-4
直腸温度プローブ	ハーバード大学装置	521591
ロピバカイン	KABI	1260216
生理食塩水	グマ	7982
メス	F.S.T	AUST
Seringue	BD Medical	324826
Serrefine クランプ	FST	18050-28	4 をお勧めします
シリコンプローブ	NeuroNexus、ミシガン州、米国	A2x16-10mm-50-500-177 または A1x16-5mm-150-703
立体毒性フレーム	Stoelting	51733U
キシラジン	バイエル	4007221032311

Digital リンシシ R195806