マウス脳におけるTRPV1脱感作のためのレシニフェラトキシンによる脳室内治療

要約

出典: Fukushima, A., et al. レシニフェラトキシンによる脳室内治療とマウスの疼痛試験J. Vis. 経験。(2020年)

このビデオは、脳内のTRPV1受容体を脱感作するためにマウスにレシニフェラトキシンの脳室内注射を行う手順を示しています。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. RTXの脳室内注射

1. ペントバルビタールナトリウム塩(60 mg / kg、腹腔内)でマウスを麻酔し、正位反射の喪失を確認します。
2. 脳室内(i.c.v.)治療の場合は、5 μLのレシニフェラトキシン(RTX)(20 μg/mL)を右側脳室に注射します。対照群の場合、ビヒクル(10%エタノール、10%ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレイン酸塩、80%人工脳脊髄液(ACSF))を同じ方法で注入します。
   1. 使い捨ての27-G針を金属管(内径0.8 mm)に通し、針の3.0〜3.5 mmの先端を露出させます(図1A)。
   2. マウスの頭を70%アルコールで消毒し、マウスの扁平上皮骨を指でしっかりと保持します(図1B)。手記：扁平上皮の突起は注射のランドマークとして機能するため、扁平上皮突起の位置に注意してください。
   3. 頭皮の上で針を横方向に動かし、針の先端が縫合糸に引っ掛かっているので矢状縫合糸を見つけます。
   4. 先端を右に約1mm動かし、次に先端を吻側に動かし、冠状縫合糸を見つけます。(図1B)。
   5. 針をゆっくりと垂直に挿入し、約10秒でRTX溶液を注入し、約10秒間保持します。
   6. 針をゆっくりと引き抜き、マウスをホームケージに戻します。出血は通常最小限であるか、存在しません。大出血が発生した場合は、別のマウスの使用を検討する必要があります。

結果

図1:脳室内(i.c.v.)注射の写真と概略図。(A)i.c.v.注射に使用される針。(B)マウスの頭蓋骨のスキーマと針先の動き。扁平上皮の骨は青色で示されています。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
レシニフェラトキシン	LKT Laboratories	R1774	s.c./i.c.v. 前処理および RTX テスト
ペントバルビタールナトリウム塩	化学工業	P0776	酔に使用
エタノール (99.5%)	和光純化学工業	057-00456	RTX
ポリオキシエチレン(20) ソルビタンモノオレイン酸	和光	161-21621
25 mL マイクロシリンジ	ハミルトン	1702LT	i.c.v.注射用
26ゲージ使い捨て針	TERUMO	NN-2613S	i.c.v.注射用

東京 麻 純化学工業 RTX の溶解に使用