脳虚血のマウスモデルにおける酸性ポストコンディショニングの神経保護効果の評価

要約

出典: Zheng, Y., et al.脳虚血に対する酸性ポストコンディショニングの神経保護を研究するための実験モデル。J. Vis. 経験。(2017年)

このビデオでは、中大脳動脈閉塞症 (MCAO) のマウス モデルにおける虚血性損傷に対する神経保護効果を評価するための酸性ポストコンディショニング (APC) の適用を示します。MCAO モデルにおける再灌流に関わる手順と、興奮毒性、酸化ストレス、およびニューロン死を軽減するための再灌流中の APC の適用について概説します。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 中大脳動脈閉塞症 (MCAO):
   1. 麻酔をかけたマウス (頭蓋骨にレーザー ドップラー流量計 (LDF) プローブを取り付けて) を仰臥位に置いて固定し、手術中はヒート ランプを使用して体温を維持します。首を70%エチルアルコールで消毒します。
   2. メスを使用して首の傍正中皮膚切開を行います。鉗子で軟部組織を鈍く解剖して血管を露出させます。露出した組織に生理食塩水を1滴加えて、水分を保ちます。
   眼科鉗子
   3. を使用して、周囲の組織と迷走神経から総頸動脈を解剖します。迷走神経を傷つけないように注意してください。総頸動脈が露出した後、首の皮膚をヨードフォアで再度消毒します。
   4. 総頸動脈の遠位端にマイクロセルクランプを配置し、近位端に6-0の絹縫合糸で死んだ結び目を作ります。クランプをできるだけ近位に配置して、その後の操作を行います。クランプとデッドノットの間の容器の長さは、その後の操作のためにできるだけ長くしてください。
   5. 緩い結び目を結んで、クランプの近位に一時的な縫合糸を作ります。モノフィラメントを挿入するために、2 つのノットの間に十分なスペースがあることを確認してください。
   6. マイクロ眼科用ハサミで2つの結び目の間に小さな縦方向の切開を行います。その後の手術のために、切開部がデッドノットにできるだけ近いことを確認してください。器を切らないように注意してください。
   7. 12 mmの先端鈍化モノフィラメントを切開部に挿入して動脈内腔に入り、数mm前進させます。モノフィラメントの先端の周りの緩い結び目を締めてから、クランプを取り外します。
   8. LDF ソフトウェアが血流の急激な減少 (ベースライン血流から >80% 減少) を示すまで、眼科鉗子を使用してフィラメントを内頸動脈 (中大脳動脈を閉塞するために 10 mm) に進めます。オクルージョンの開始時刻を記録します。
   9. 中大脳動脈を1時間閉塞します。LDFプローブを切断し、閉塞の間マウスを30°Cのインキュベーターに入れます。
2. 再灌流および酸性ポストコンディショニング(APC):
   1. 閉塞開始時間から55分後に、上記のようにイソフルランで動物を再麻酔します。マウスを仰臥位に置いて固定します。首の切開を開き、総頸動脈を再露出させます。
   2. 閉塞期間の後に眼科用鉗子でフィラメントをそっと引き抜き、再灌流を達成し、結び目を締めることで一時的な縫合糸を永久的な縫合糸に変えます。
   3. アシドーシス治療の場合は、再灌流後5分、50分、または100分で、ノーズコーンから吸入するガスを20%CO₂、20%O₂、および60%N₂を含むガスの混合物に5分間変更します。中断された外科的縫合糸で切開部を閉じます。
   4. マウスが意識を回復するまでマウスを30°Cのヒートケージに入れ、マウスを清潔な個々のケージに戻します。マウスに水と湿らせた餌のペトリ皿を提供します。手術後、過度の痛みや死がないかマウスを注意深く監視します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
レーザードップラー流量測定	Moor Instruments Ltd	アVMS-LDF2
エチルエーテル無水	シノファーム化学試薬株式会社	80059618
トリクロロアセトアルデヒクル水和物	シノファーム化学試薬株式会社	30037517

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