グルコース欠乏神経芽細胞腫細胞における大気圧血漿治療の評価

要約

出典: Yan, X., et al., SH-SY5Y 細胞のグルコース欠乏誘発性損傷に対する神経保護剤としての大気圧プラズマジェットの新しい応用。J. Vis. 経験。(2017年)

このビデオは、酸化ストレスを調節し、細胞生存率を高めることにより、グルコース欠乏神経芽細胞腫細胞における低線量大気圧プラズマ処理の神経保護活性を示しています。

プロトコル

1. SH-SY5YのAPPJ(大気圧プラズマジェット)処理

1. 石英管のノズルと96ウェルプレートを配置するプラットフォームの間の距離を3cmに調整します。ビームが培地の表面に触れることができることを確認してください。
   注:プレートの底からの距離は測定されません。まず、石英管のノズルと96ウェルプレートを配置するために使用されるプラットフォームとの間に3cmの間隔を調整します。
2. APPJ(大気圧プラズマジェット)処理の前に、コントロールウェルを除く各ウェルの培地をグルコース培地なしのRPMI1640に変更します。
3. プレートをAPPJノズルの下に置き、ジェットが各ウェルに垂直に発射できることを確認します。
4. 別々のウェルで細胞をAPPJで0秒、1秒、2秒、4秒、8秒、および12秒処理します。
   注:APPJはヘリウムをイオン化することによって生成されます(図1)。グルコース欠乏によって損傷した細胞は、細胞に対するヘリウムの影響を排除するために、4秒と8秒のヘリウム流によって処理されます。すべての治療は3回に分けて行う必要があります。

2. 細胞生存率アッセイ

注:このステップでは培地を変更しないでください。

1. APPJ処理後、細胞インキュベーターで細胞を1時間インキュベートします。
2. 各ウェルに10 μLのCell Counting Kit-8(CCK-8)溶液を加えます。
3. 細胞を37°Cで4時間インキュベートします。
   注:SH-SY5Y細胞株は、グルコース欠乏条件に敏感です。細胞生存率は、薬力学研究に最適な細胞生存率条件であるグルコース欠乏の1時間後にほぼ50%に低下します。CCK-8は細胞に対する細胞毒性がなく、細胞はAPPJ処理後のグルコース欠乏条件でCCK-8試薬とさらに4時間インキュベートされ、細胞の生存率がチェックされます。グルコース欠乏とAPPJ治療の8時間後、グルコース欠乏の長期化がSH-SY5Y細胞に深刻な損傷をもたらしたため、APPJの保護効果は有意に低下しました。24時間のグルコース欠乏後の生細胞の証拠はありませんでした。
4. マイクロプレートリーダーで450 nmの吸光度を測定します。

結果

図1:APPJ(大気圧プラズマジェット)放出における典型的なRNS(活性窒素種)およびROS(活性酸素種)反応。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
SH-SY5Y細胞株	タイプ培養コレクションセンター	3111C0001CCC000026
RPMI 1640 培地	Thermo Scientific	21875091	4 °C で保存
RPMI 1640 培地 グルコースなし	Thermo科学	11879020	4 °Cで保存
牛胎児血清	Thermo Scientific	16000044	-20 °Cで保存
96ウェルプレート	corning	3599
Cell Counting Kit-8 (CCK-8)	Dojindo Laboratories	CK04	4 °Cで保存
マイクロプレートリーダー	Tecan	M200 Pro	450 nmでの吸光度測定用
高電圧パワーアンプ	Trek	PD06087	パワー増幅用
機能信号発生器	MaZe Electronics Science&Technology	AT30120	特定の信号を提供するため
高電圧プローブ	テクトロニクス	P6015A	高電圧
デジタルオシロスコープ	テクトロニクス	DPO4104B	信号表示用

中国 子検出用