落射蛍光顕微鏡を使用した膝状神経節ニューロン応答の in vivo イメージング

要約

出典: Fowler, B. E., et al.味覚刺激に対するマウス膝状神経節ニューロン応答のin vivoカルシウムイメージングJ. Vis. 経験。(2021年)

このビデオは、麻酔をかけたマウスで外科的に露出した膝状神経節に味覚剤を送達し、落射蛍光顕微鏡でGCaMP蛍光を使用してリアルタイムのニューロン応答を視覚化し、末梢味覚シグナル処理の研究を支援するプロトコルを示しています。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. tastant panel
   を使用して、
   1. 膝状動物から液体を取り除きます。オプションで吸収ポイントを配置して、浸透を軽減し、顕微鏡のナビゲーションを助けます。
   2. 動物を顕微鏡下の吸収パッドの上に置きます。膝状神経節を見つける:有用なランドマークには、水疱に残された穴、側頭骨の穴、および第7神経が含まれます。落射蛍光スコープのFITC/GFP(フルオレセインイソチオシアネート/緑色蛍光タンパク質)フィルターを使用して、個々のGCaMP発現膝状神経節ニューロンをチェックします。10倍の対物レンズ(作動距離10 mm)は、個々の細胞の活動を追跡するのに十分な解像度を提供しますが、20倍の対物レンズ(作動距離12 mm)を使用することもできます。
   3. テイスタントライン用の分注針を動物の口にしっかりと入れます。動物の口の下にペトリ皿を置き、液体をキャッチします。
   4. カメラが顕微鏡の視野を表示していることを確認してください。ビデオ録画の開始とテイスタントプレゼンテーションの開始を同期させます。
   5. 録画中は、ライブ フィードで応答、ドリフト、浸透を確認します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
1ml ルアーロック付きシリンジ	Fisher Scientific	14-823-30
27 ゲージ ブラント ディスペンシング ニードル	Fisher Scientific	NC1372532
吸収ポイント	Fisher Scientific	50-930-668
アセスルファム K	フィッシャー サイエンティフィ	A149025G
BD アレルギー専門トレイ、ニードル 恒久的に取り付けられた	フィッシャー サイエンティフィック	14-829-6D
ブラント リトラクター	FST	18200-09
ブレッドボード	Thor Labs	MB8
カスタム ヘッド ポスト ホルダー	eMachineShop		添付ファイル202410.emsを参照
カスタムメタルヘッドポスト	eMachineShop		添付ファイルを参照 202406.ems
DC温度コントローラー	FHC	40-90-8D
デジタルカメラ、sCMOS OrcaFlash4顕微鏡搭載	浜松	C13440
解剖スコープ	ライカ	M80
LED冷光源	ライカ マクロシステム	KL300LED
ルアーロック 1/16 インチチューブアダプター	フィッシャー	01-000-116
顕微鏡	オリンパス	BX51WI
ミニシリーズ 光学ポスト	Thorlabs	MS2R
ペトリ皿	フィッシャーサイエンティフィ	FB0875713A
加圧空気	Airgas	AI Z300
セルフスティックラベリングテープ	フィッシャー サイエンティフィ	159015R
シリコン ピンチ バルブ チューブ 1/32 インチ x 1/16 インチ外径 (1 フィートあたり)	オートメーション サイエンティフィック	05-14
スナップ25-2A-GCaMP6s-D	JAX	25111
学生用ファイン ハサミ	イン サイエンス ツール	91460-11
サージカル プローブ	ロボズ サージカル ストア	RS-6067
サージカルプローブホルダー	Roboz Surgical Store	RS-6061
BD イントラメディックチューブ	Fisher Scientific	22-046941
2段ガスレギュレーター	Airgas	Y12FM244B580-AG
Tygon ビニールチューブ - 1/16 インチ	オートメーション Scientific	05-11
Valvelink8.2 デジタル/マニュアルコントローラー	オートメーションScientific	01-18
Valvelink8.2 ピンチバルブ灌流システム	自動化	Scientific 17-pp-54
キシラジン	Anased	NADA# 139-236

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