近赤外蛍光イメージングを用いたマウス脳血栓の可視化

動物サンプルを含むすべての手順は、適切な動物倫理審査委員会によって審査され、承認されています。

1. 脳組織の Ex Vivo 近赤外蛍光 (NIRF) 血栓イメージング

1. 首後、頭皮を取り除き、はさみで頭蓋骨を大孔から矢状縫合糸に向かって切ります。下にある脳への損傷を避けながら、切開した頭蓋骨の端をハサミで慎重に持ち上げて頭蓋円蓋を除去し、半球をむき出し
にします。
2. 近赤外蛍光(NIRF)イメージングで視覚化する必要があるウィリス動脈(COW)の円と重なる可能性があるため、脳基部の視神経をできるだけ脳表面に近づけて切り取ります。次に、NIRF血栓イメージング用のY字型の「中大脳動脈(MCA)/前大脳動脈(ACA)/遠位内頸動脈(ICA)」を視覚化するために、小脳基部を穏やかに圧迫して切断点を露出させた後、脳表面に遠位ICAをできるだけ切り取ります(図1A)。
3. 除去した脳組織のNIRFイメージング(励起/放出、675 / 690 nm、1秒露光)を基部を上に向けて実行し(図1B、C)、COWの動脈内の蛍光標識血栓塞栓を視覚化します(図1D)。次に、脳の頂点を上に向けて追加のイメージングを実行し、皮質血栓塞栓症を視覚化します。組織に生理食塩水を数滴垂らして脳を乾燥させないようにしてください。

図1:脳血栓塞栓症のEx Viv o 近赤外蛍光(NIRF)イメージングの概要。 (AとB)血栓塞栓性脳卒中のマウスから代表的な脳組織を摘出した。脳を切除するときは、遠位内頸動脈の中大脳動脈 (MCA) – 前大脳動脈 (ACA) 分岐領域 (ICA、青い矢印) の血栓塞栓 (赤い矢印) を失わないように注意してください。(CおよびD)生体外NIRF血栓イメージング脳組織は、MCA-ACA分岐領域の塞栓閉塞の前に、シアニン5.5(Cy5.5)蛍光マーカーC15で事前に標識された血栓(Dの赤い矢印)を視覚化するために、NIRFイメージャー(C)の遮光チャンバー内に配置されます。