中枢神経系疾患を治療するためのマウスモデルにおけるウイルスのくも膜下腔内送達

要約

出典: Li, D., et al.成体マウスにおける組換アデノ随伴ウイルスの直接髄腔内注射J. Vis. 経験。 (2019年)

このビデオは、覚醒マウスの脳脊髄液(CSF)にアデノ随伴ウイルス(AAV)を髄腔内注射する手順を示し、注射器の準備、脊椎のアライメント、および正確な針の挿入をカバーしています。この方法は標的遺伝子送達を検証し、CNS 治療の可能性をサポートします。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 20% 塩酸リドカイン原液の調製

塩酸リ

1. ドカイン 2 g を量ります。5〜6 mLの滅菌水を加え、穏やかにボルテックスします。滅菌水で容量を10mLに増やします。
2. 1.2 原液を 0.2 ミクロンのフィルターでろ過します。ストック溶液を1.5 mLマイクロ遠心チューブあたり1 mLずつ分注し、シーリングフィルムで密封します。4°Cで保存してください。

2. 覚醒マウスにおける直接髄腔内 AAV 送達

1. 70% エタノールを含む滅菌ガーゼを使用して作業領域を拭き、必要な消耗品を準備します。
2. 滅菌200 μL微量遠心チューブに95 μLのrAAVrh10ストック溶液(5 x 10¹²ゲノムコピー/ mL)を加え、5 μLの20%塩酸リドカインストック溶液を加えて、100 μLのAAVrh.10 / 1%塩酸リドカインストック溶液を調製します。上下にピペッティングしてよく混ぜます。次に、ウイルス溶液を氷上(4°C)に保存します。
   注:マウスあたり8 μLが使用されます。
3. 注射用のAAV溶液でシリンジを準備する

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
FVB/NJ マウス	Charles River Laboratories China
Lidocaine hydrochloride monohydrate	HEOWNS	73-78-9
AAV	Viral Vector Core of the Gene Therapy Center at University of University of University of Gene Therapy Centerマサチューセッツ医科大学
25μL ハミルトン注射器/27-30g 針	GASTIGHT	1702
70% エタノール	WEN ZHI
ガーゼ	Wei AN	5171112	8cm*10cm*12cm