神経膠芽腫に対する免疫担当マウスモデルの生物発光イメージング

要約

出典: Clark, AJ, et al. 神経膠芽腫に対する免疫担当動物モデルの生物ルミネセンスイメージングJ. Vis. 経験。(2016年)

このビデオでは、ルシフェラーゼ発現腫瘍細胞とルシフェリンを使用して腫瘍増殖を非侵襲的に定量化し、免疫担当マウスモデルで神経膠芽腫の進行を追跡するための生物発光イメージングを示します。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. GL261 腫瘍増殖の生物発光イメージング

1. 清潔なペーパータオルに消毒剤 (0.05% 塩化ジメチルアンモニウム溶液) をたっぷりとスプレーします。消毒剤を染み込ませたペーパータオルを使用して、動物がデバイスと接触するイメージングチャンバー内の黒いシート、ノーズコーン、仕切りを完全に拭きます。清潔で乾いたペーパータオルですべての表面をよく拭きます。これをもう一度繰り返し、5分間待ちます。
2. イメージングステーションを初期化します。
3. 200 μlのケタミン/キシラジンおよび100 μlのルシフェリン(D-ルシフェリンカリウム塩、150 mg/kg)を含む300 μlの混合物でマウスを腹腔内注射により麻酔します。
4. 注射後10分待って、尾をつまんでマウスが完全に麻酔下にあるかどうかを確認します。イメージングシステムを設定するには、「発光」、「自動」露光時間、「中」ビニングを選択します。マウスをイメージングステーションに置き、「取得」ボタンをクリックして画像を開始します。注射後の時間が各イメージングセッションと一致していることを確認してください。
5. 画像が正常に取得されると、画像ウィンドウとツールパレットが表示されます。関心領域(ROI)または「ROIツール」をクリックし、円のアイコンから「自動」を選択します。ROIを定義するには、画像上の信号の領域を囲み、ROIを光子/秒/sr/cm2の単位で測定します。
6. マウスをイメージングチャンバーから取り出し、歩行可能になり、通常の活動を維持するまで監視します。通常、回復時間は約 15 分です。マウスが麻酔から完全に回復するまで、マウスを他の動物と一緒にケージに戻さないでください。
7. 動物が次の症状を示すまで、週に2回生物発光イメージングによって腫瘍の成長を監視します:体重減少(着床前の体重と比較して20%以上の減少)、食欲不振(24時間の完全な食欲不振)、および穏やかな刺激に対する持続的な意図的な反応の欠如(起き上がろうとする弱い試み)、その時点で安楽死させる必要があります。
8. 生物発光イメージングの初日に得られた対応する測定値に対して、各日の発光値を正規化します(図1A)。
9. 統計分析では、カプラン・マイヤー推定量を使用して生存曲線を生成し、ログランク検定を使用して生存曲線間の差を比較します。

結果

図 1.ルシフェラーゼ発現は、in vivo 腫瘍の増殖と動物の生存に影響を与えません。(A)生物発光モニタリングは、頭蓋内GL261の進行性成長を示しています。C57BL/6マウスにおけるLuc(ルシフェラーゼを発現するGL261神経膠芽腫細胞)腫よう(B)Kaplan-Meier生存分析は、GL261(実線)またはGL261のいずれかを頭蓋内に移植したマウスの全生存期間に差は示されない。リュックセル(破線)。

材料