モーターエンドプレートに沿って筋肉内注射を行い、トレーサーをラットの運動ニューロンに直接シャトルします

要約

出典: Mohan, R., et al. 運動終板に沿った筋肉内注射: トレーサーを運動ニューロンに直接シャトルするための低侵襲アプローチ。J. Vis. 経験。(2015年)

このビデオは、運動終板 (MEP) への筋肉内注射を介して、運動ニューロンへの蛍光ニューロン トレーサーの標的送達を示します。ラットの準備、トレーサーの注射、および神経治療の可能性について標識された運動ニューロンの評価に関連する手順の概要を概説します。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1.モーターエンドプレートでの筋肉内注射

1. マイクロピペットプーラーでガラスマイクロピペットを引っ張ります(プランジャー付きの段階的なマイクロピペットの使用をお勧めします)。解剖顕微鏡を使用して、マイクロピペットの内腔の内径が約0.5 mmになるように、一対の鉗子でマイクロピペットの先端を壊します。
2. 使用するすべての手術器具がオートクレーブ滅菌されたばかりであること、および手術領域が無菌であることを確認してください。
3. マイクロピペットにフルオロ金(蒸留水中5%)を充填します。
4. 誘導チャンバーでイソフルラン(O₂中の4%)を使用して動物に麻酔を誘導します。誘導チャンバーから取り出す前に、正転反射をチェックし、それがないことを確認します。ラットの鼻の上にノーズコーンを固定し、麻酔を維持するためにイソフルラン(O₂中の2%)を送達します。動物のつま先をつまんで動物の目にそっと触れて、ペダルの引き抜きと角膜反射の両方がないことを確認します。
   注:ケタミンとキシラジンの混合物も使用できます(それぞれ80および10 mg / kg、腹腔内投与)。ケタミンはスケジュール 8 (「管理対象」) の薬物であり、薬物の購入、使用、保管、廃棄に関連する必要なプロトコルを遵守する必要があります。
5. 処置中の目の乾燥を防ぐために、目の潤滑剤を塗布してください。
6. 対象となる手足を剃り、ガーゼを使用してクロルヘキシジンと70%アルコールの3回の交互のスクラブで剃った部分を拭きます。動物を手術部位に移します。
7. 動物を清潔なアンダーパッドの上に置き、対象の筋肉に良好にアクセスできるように適切に配置します。
8. 歯のグリップ付きの鉗子を使用して、標的の筋肉の上の皮膚を下にある筋肉組織から持ち上げ、外科用ハサミで皮膚を切開します。切開部が目的の筋肉を完全に露出するのに十分な大きさであることを確認してください。筋膜への混乱が最小限に抑えられるようにしてください。
9. モーターエンドプレート(MEP)の写真を使用して、MEP領域の位置と形状を精神的に筋肉に転置します。
   注:細かいフェルトマーカーは、写真から目的の筋肉にMEP領域を再現するのに役立ちます。
10. MEP領域の全長に沿って複数回の注入を実行します(フルオロゴールドの場合、それぞれ1〜2 μlの3〜4回の注入で十分です)。筋肉を優しく拭いて浸透を取り除きます。
11. 切開した皮膚の両端を鈍い鉗子で近づけ、外科用クリップで傷を閉じます。0.1mlのブピバカイン(水中0.5%)(または他の局所麻酔薬)を創傷の全範囲に沿って浸潤させます。
12. 麻酔器の電源を切り、麻酔から完全に回復するまで動物を監視します。
13. 筋肉内注射の投与と動物の灌流の間に14日間待ちます。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
Fluoro-Gold	Fluorochrome, LLC	Nil	釈 5% ドラ
モンド PCR マイクロピペット 1-10 μl	Drummond Scientific	5-000-1001-X10	ジャー付き
Isothesia	Provet	ISOF00	1000 mg/g イソフルラン吸入蒸気
オートクリップ 9 mm 巻クリップ	テキサス サイエンティフィック インスツルメンツ、LLC	205016

希 プラン