マウスモデルにおける腸由来微生物代謝産物の頭蓋内注射

要約

出典: Liou, C. et al.自由に動くマウスにおける腸由来微生物代謝産物の脳室内送達J. Vis. 経験。(2022)。

このビデオでは、自由に動くマウスに短鎖脂肪酸(SCFA)を頭蓋内注射して、脳を介した行動に対する短鎖脂肪酸(SCFA)の影響を研究する方法を紹介します。マウスの脳に埋め込まれたガイドカニューレにインジェクターカニューレを挿入します。回復後、マウスは新しいケージに慣れます。次に、SCFA が投与され、自発運動行動が記録されます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 実験動物の準備

1. 6〜8週齢の野生型C57BL/6JNarl雄マウスをベンダーから入手します。
2. マウスを標準的なマウスケージに、標準的なマウスチャウと滅菌水を自由に収容します。
   注:実験動物センターの飼育条件は、温度22±1°C、湿度55%±10%、明暗サイクル13時間/11時間です。

2.定位固定

手術定位固定装置

1. 、手術器具、および関連アイテムを準備して滅菌します。
   注:感染を避けるために、手術部位に直接接触するすべてのアイテムを滅菌する必要があります。
2. マウスを酸素中の1%〜5%イソフルランを含むプレキシガラスケージに入れて麻酔します。
   注:マウスを注意深く観察して、呼吸数が毎秒約1呼吸に維持されていることを確認します。
3. マウスを麻酔室から取り出します。ペットトリマーで手術部位(マウスの頭)を剃ります。定位固定切歯ホルダーの切歯バーにマウス切歯を固定して、マウスを定位固定フレームに置きます。ノーズコーンマスクで鼻を覆います。
4. 定位固定手術中は、酸素中の1%〜2.5%イソフルランでマウスを....

結果

図1:マウスへの市販のガイドカニューレの移植。(A)市販のガイドカニューレ、ダミー、インジェクターの代表的な画像。(B)歯科用アクリルで固定してマウスの脳に埋め込まれた市販のガイドカニューレとダミーの代表像。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
材料
Advil Liqui-gels 可溶化イブプロフェン A2:D41	ファイザー	n/a
ボトルトップ真空フィルター、500 mL、0.22 μm、PES、滅菌	NEST	121921LA01
CaCl₂	Sigma-Aldrich	C1016	ACSF: 0.14 g/L
クロルヘキシジン スクラブ 2%	Phoenix	NDC 57319-611-09
クロルヘキシジン溶液	Phoenix	NDC 57319-599-09
市販のダミー	RWD ライフ サイエンス	62004	Single_OD 0.20 mm/M3.5/G = 0.5 mm
販のガイド カニューレ	RWD ライフサイエンス	62104	Single_OD 0.41 mm-27G/ M3.5/C = 2.5 mm
商用インジェクター	RWD ライフサイエンス	62204	Single_OD 0.21 mm-33G/ M3.5/C = 3.5 mm/G = 0.5 mm
D-(+)-グルコース	シグマ アルドリッチ	G8270	ACSF: 0.61 g/L
歯科用アクリル	HYGENIC	n/a
固定ネジ	RWD ライフ サイエンス	62521
馬血清	ThermoFisher Scientific	16050130
インスリン注射器	BBraun	XG-LBB-9151133S-1BX	1 mL
イソフルラン	パニオン & BF バイオテック	DG-4900-250D
KCl	Sigma-Aldrich	P3911	ACSF: 0.19 g/L
ケトプロフェン スイス	薬	n/a
リドカイン	アストラゼネカ	n/a
低融点 アガロー	ス Invitrogen	16520
MgCl₂	Sigma-Aldrich	M8266	ACSF: 0.19 g/L
顕微鏡スライド	ThermoFisher Scientific	4951PLUS-001E
鉱物油ライト、白色 NF	Macron ファインケミカル	MA-6358-04
NaCl	シグマ アルドリッチ	S9888	ACSF: 7.46 g/L
NaH₂PO₄	シグマ アルドリッチ	S8282	ACSF: 0.18 g/L
NaHCO₃	シグマ アルドリッチ	S5761	ACSF: 1.76 g/L
n-ブチルシアノアクリレート接着剤 (組織接着剤)	3M	1469SB	3M Vetbond
ニューラルトレーサー	サンタクルーズ	SC-358883	フルオロゴールド
パラホルムアルデヒド	シグマ・アルドリッチ	P6148
ポリエチレン管	RWD ライフサイエンス	62329	外径 1.50、内径 0.50 mm および外径 1.09、内径 0.38 mm
プラルーブ獣医 (眼) 軟膏	デクラ	12920060
酢酸ナトリウム	シグマ・アルドリッチ	S2889	SCFA: 13.5 mM
アジ化ナトリウム	シグマ・アルドリッチ	S2002
酪酸ナトリウム	シグマ・アルドリッチ	B5887	SCFA: 8 mM
プロピオン酸ナトリウム	シグマ・アルドリッチ	P1880	SCFA: 5.18 mM
ステンレスガイドカニューレ	Chun Ta ステンレススチールエンタープライズ株式会社	該当なし	外径 0.63 mm;地元ベンダー
ステンレスインジェクターChun	Taステンレス鋼企業株式会社	該当なし	外径 0.3 mm; ダミーはインジェクターから作られています。地元のベンダー
スーパーグルー	Krazy Glue	KG94548R
Triton X-100	Merck	1.08603.1000
機器
カニューレホルダー	RWD ライフサイエン	B485-68217
シーリングカメラ	FOSCAM	R2
デジタル定位固定装置	Stoelting	51730D
解剖顕微鏡	INNOVIEW	SEM-HT/TW
ガラスビーズ滅菌器	RWD ライフサイエンス	RS1501
加熱パッド	Stoelting	53800M
マイクロ解剖鉗子	ROBOZ	RS-5136	鋸歯状のわずかな曲線。非常にデリケート。0.5mmの先端幅;4インチ長さ
解剖はさみ	ROBOZ	RS-5918	4.5インチアングルシャープ
マイクロインジェクションコントローラー	World Precision Instruments (WPI)	MICRO2T	SMARTouch コントローラー
インジェクションシリンジポンプ	World Precision Instruments (WPI)UMP3T-1		UltraMicroPump3
リットルシリンジ	Hamilton	80014	10 μL
ダブルファイバーステップ付き光ファイバーコールドライト		LGY-150	ローカルベンダー
ペットトリマー	WAHL	09962-2018
ソフトウェア
動物行動ビデオ追跡ソフトウェア	Noldus	EthoVision	バージョン: 15.0.1416

市製ス マイクロマイクロマイクロ