神経保護のためのラットモデルにおける非侵襲的四肢虚血プレコンディショニング

要約

出典: Brandli, A. 遠隔肢虚血性プレコンディショニング: げっ歯類における神経保護技術。J. Vis. 経験。(2015年)

このビデオは、全身神経保護を誘導するためのラットの非侵襲的四肢虚血プレコンディショニングプロトコルを示しています。この手順には、制御された動脈閉塞と再灌流が含まれ、保護因子を放出する細胞ストレス経路がトリガーされます。これらの要因は、脳や網膜などの遠隔臓器の虚血性および代謝性損傷に対する抵抗力を高めます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1.動物の準備

注:軽い損傷を受ける動物は、遠隔虚血の前夜に暗い適応を必要とします。軽い損傷を受けている動物は、暗い飼育が必要です(12時間の光:暗いサイクル、5ルクス)

覚

1. 醒しているげっ歯類または麻酔をかけたげっ歯類で遠隔虚血を実行します。動物が健康な筋肉の緊張を持っていることを確認してください。後肢の上肢をつまんで、十分な筋肉があることを確認して、これを確認します。軽傷に対するRIP誘発性保護は、生後6か月までの座りがちなラットでテストされています。
2. 遠隔虚血プレコンディショニング(RIP)の麻酔準備
   1. ラットに60 mg / kgのケタミンと5 mg / kgキシラジンの腹腔内注射を注射します。脚を伸ばし、足の下側の皮膚をつまんで麻酔の深さを確認します。動物は深く麻酔されている場合、反射がありません。麻酔下で角膜の乾燥を避けるために人工涙液を塗布します。
   2. ラットを加熱パッドまたは循環給湯器チューブの上に置き、体温を37.5°Cに一定に保ちます。下肢のフットパッドを上に向けて、ラットを腹臥位に置きます。右肢または左肢のいずれかが遠隔虚血を起こす可能性があります。

2. 皮膚温度プローブの適用

1. 虚血を起こすラットの脚を伸ばし、皮膚プローブをフットパッドに置きます。温度プローブと皮膚の接触を最大化するように皮膚プローブを配置します。プローブをフットパッドにしっかりと押し込み、プローブを紙テープで貼り付けます。
2. 温度記録ソフトウェアで温度を追跡して、スキンプローブの配置を確認します。皮膚温度が30〜34°Cで、安定していることを確認してください。皮膚温度を1〜2分間追跡します。温度が不安定または30°C未満の場合は、スキンプローブを調整します。

3. 遠隔虚血

1. カフを収縮させ、空気圧バルブが閉じていることを確認します。脚を伸ばし、後肢上部の袖口をゆるく囲みます。人差し指と親指を使って脚を伸ばし、下の指を使って緩んだ袖口を所定の位置に保ちます。
2. 麻酔した動物のカフ圧を160mmHgに上げ、覚醒している動物ではカフ圧を180mmHgに上げます。
   注:ラットの麻酔血圧は120〜140mmHgの範囲で、意識があると160mmHgに上昇します。正しい圧力に達したら、タイマーと足の温度の記録を開始します。
   注: 足の温度は、2分間の一定圧力の後、5°C低下するはずです。
3. 虚血中、動物の「膝」の上のカフの位置を維持します。カフの圧力は、数分後、またはラットの手足が動いている場合に低下し始めます。
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4. 張バルブを短いバーストで繰り返しポンピングして、希望のカフ圧力を維持します ポンプの短いバーストを繰り返し
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5. 遠隔虚血は、5〜15分間連続して送達することができます。虚血再灌流プロトコルには、5 分間の虚血と 5 分間の再灌流が介在する 2 つの期間が含まれます。
6. 空気圧バルブを緩めてカフ圧を収縮させます。虚血プロトコルの過程での温度変化を確認します。カフを放します。
7. 怪我の実験を続けます。麻酔の影響下にある動物は、ヒートパッドの上に置く必要があります。歩行可能になるまで動物を監視し続けます。動物は歩くまで住居に戻すことはできません。

材料