ドーパミン負荷エクソソームキャリアシステムの定式化

要約

出典: Yavuz, B., et al.エクソソームベースのドーパミンキャリアシステムの定式化と特性化J. Vis. 経験。(2022年)

このビデオでは、エクソソーム内のドーパミンカプセル化を強化するためのサポニン誘発膜透過処理に焦点を当てて、ドーパミン負荷エキソソームの製剤

化を示します。

プロトコル

1.エクソソームへのドーパミン負荷

注:ウォートンゼリー間葉系幹細胞(WJ-MSCs)エクソソームの特性評価が完了した後、ドーパミン負荷エクソソームをドラッグデリバリーシステムとして得ました。エクソソームへの薬物ローディングは、インキュベーション法を使用して行われます。

1. 3 mLのリン酸緩衝生理食塩水(PBS)をエクソソーム懸濁液に加えます。0.22 μmフィルターを使用したろ過により、希釈した懸濁液を滅菌します。滅菌したエクソソーム懸濁液500 μLを別のチューブに移します。
2. ドーパミン溶液(0.5 mg / mL)を蒸留水で調製します。エクソソームを含むチューブに500 μLのドーパミン溶液を加えます。
3. ステップ1.2の懸濁液にサポニンを加えます。調製したエキソソーム-ドーパミン懸濁液を37°Cで24時間インキュベートします。注:サポニン濃度は、全溶液の0.002%を超えてはなりません。
4. 懸濁液を90,000 × gで70分間超遠心分離し、培地から遊離ドーパミンとサポニンを除去します。単離されたエクソソームは、さらなる分析に使用するまで-20°Cで保存します。手記：調製したドーパミン溶液の安定性のために0.02%アスコルビン酸を加えます。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
0.22 μm メンブレンフィルター	Aisimo		滅菌プロセスに使用
15 mL Falcon tube	Nest		細胞培養ステップで使用
50 mL Falcon tube	Nest		細胞で使用培養ステップ
遠心日	立	CF16RN	エクソソーム単離ステップで使用
ドーパミン塩酸塩 H8502-10G	シグマ	H8502-10G	エクソソームドーパミンローディングに使用
Optima XPN-100 超遠心分離機	ベックマンコールター		エクソソーム単離ステップで使用
PBS 錠剤	Biomatik	43602	PBS 溶液の調製に
サポニン	シグマ	47036-50G-F	クソソームドーパミンローディング過程で全溶液に添加して使用した。
ウォートンゼリー間葉系幹細胞	ATCC

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