蛍光マクロコピーを使用したマウス脳における脳脊髄液輸送の in vivo イメージング

要約

出典: Sweeney, A. M., et al.蛍光マクロスコピーを用いた無傷のマウス頭蓋骨を通る脳脊髄液輸送のin vivoイメージングJ. Vis. Exp. (2019)

このビデオは、蛍光イメージングを使用してマウス脳内の脳脊髄液(CSF)の流れを視覚化するプロセスを示しています。蛍光トレーサーが大槽 (CM) に注入され、くも膜下腔および血管周囲腔を通して CSF によるその動きを追跡できるようになります。タイムラプス イメージングはトレーサーの移動を捉え、細動脈を介して脳組織へのトレーサーの分布を強調します。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1.シスターナマグナカニューレ、ヘッドプレート、ヘッドホルダーの準備

手術

1. 前にすべての手術器具とヘッドプレートを滅菌します。
   注:蛍光トレーサーは、シスターナマグナカニューレ挿入を介してCSFに直接送達されます。
2. 簡単に言えば、ニードルドライバーを使用して、30G x 12.7 mm(1/2インチ)の針の先端を3/4下に折り、針の鈍い端をポリエチレン10(PE10)チューブ(長さ約45cm)の一端に入れます。ベベルのみがPE10チューブの境界から突き出ていることを確認します。
3. 別の30G針の面取りされた端の1/4を折り、残りの針の鈍い端をPE10チューブのもう一方の端に置き、プラスチック製のルアーロックを取り付けたまま配置します。
4. 100 μLのガラスシリンジに滅菌人工CSF(aCSF:126 mM NaCl、2.5 mM KCl、1.25 mM NaH₂PO₄、2 mM MgSO₄、2 mM CaCl₂、10 mMグルコース、および26 mM NaHCO₃)を充填します。
5. シリンジをラインの端に取り付け、面取りされた針の先端に達するまで aCSF で満たします。空気柱は注入量が変化し....

結果

図 1.経頭蓋肉眼的イメージング(A)巨視的イメージングセットアップの概略図。(B)頭蓋骨上のヘッドプレートの位置の背側図。頭頂間骨と鼻骨、前頭骨、頭頂骨がすべて見えます。(C)CSFトレーサーが現れる前のイメージング中に露出したマウス頭蓋骨は、無傷の頭蓋骨のすべての頭蓋縫合糸を明確に示しています。スケールバー: 1 mm (D) 大槽 (CM.......

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
0.25% ブピバカイン HCl			University of Rochester Vivarium
100 μL ガス密シリンジ モデル 1710 TLL、PTFE ルアーロック	Hamilton Company	81020
A-M Systems 歯科用セメント粉末	フィッシャーサイエンティフィ	NC9991371
カルプロフェン			ロチェスター大学 ビバリウム
クロルヘキシジン	プレバンティクス	B10800
CMOS カメラ	浜松	ORCA フラッシュ 4.0
ヘッドプレート	ロチェスター大学	カタログなし #	ロチェスター大学の機械工場でカスタムメイド
高温焼灼	Bovie Medical Corporation	AA01
インスタセット加速器	Bob Smith Industries	BSI-151
イソフルラン - Fluriso	Vet One	502017	University of Rochester Vivarium
Ketamine			Strong Memorial Hospital Pharmacy
Krazy Glue	Elmer's Products, Inc	カタログ # はありません、コメントのリンクを参照してください	https://www.amazon.com/Krazy-Glue-KG48348MR-Advance-Multicolor/dp/B000BKO6DG
マイクロポア手術用テープ	フィッシャー サイエンティフィック	19-027-761
パラホルムアルデヒド	シグマ アルドリッチ	P6148
PE10 - ポリエチレン .011 インチ x 0.024 インチ/フィート、100 フィート連続	ブレインツリー サイエンティフィ	PE10 100 フィート
ポンプ 11 エリート インフュージョン オンリー デュアルシリンジ	ハーバード アパタタス	70-4501
PURALUBE VET OINTMENT	Dechra
PurSwab コットンチップ付きクリーニングスティック	フィッシャーサイエンティフィ	22-029-553
リサーチ マクロズーム顕微鏡	オリンパス	MVX10
シンプルヘッドホルダープレート(マウス用)	ナリシゲInternational USA Inc	MAG-1
シングルユース針、BD 医療用	VWR	BD305106
滅菌アルコール準備パッド	Fisher Scientific	22-363-750
チューナブル LED	PRIOR ルーメン 1600-LED
キシラジン			ロチェスター大学ビバリウム

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