中大脳動脈閉塞マウスモデルにおける試験化合物の神経保護効果の評価

要約

出典: Lee, SE, et al.一過性中大脳動脈閉塞マウスモデルを用いた甘草根根抽出物の神経保護効果の評価J. Vis. 経験。 (2018年)

このビデオは、中大脳動脈閉塞マウスモデルにおける試験化合物の神経保護効果を評価する手順を示しています。この化合物は脳に入り、神経細胞の死を防ぎ、梗塞量を減少させ、未治療のマウスと比較してその神経保護効果を確認しています。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 中大脳動脈閉塞症 (MCAO) のマウス モデル生

1. 後 6 週、体重 22-25 g の雄の C57BL/6 マウスを使用します。すべての動物に標準的な食事と水への自由なアクセスを提供し、温度 (22 ±1°C) と 12 時間の明暗サイクルを備えた環境に収容します。
   1. マウスをそれぞれ6匹のマウスのグループに分け、偽手術の正常、対照、および甘草根根(GRex)治療群で構成する必要があります。
   2. 実体顕微鏡を使用して、対照群と GRex 治療群で MCAO 手術を行います。
2. 70%亜酸化窒素(N₂O)および30%酸素(O₂)中の2%イソフルランを使用して、マウスに吸入麻酔を誘導します。マウスが尾に加えられた機械的刺激に反応しなくなった場合、麻酔で十分であると考えられます。体温計に接続された体温保持ブランケットを使用して、マウスの体温を36.5±0.5°Cに維持します。
3. マウスの胸と首の毛をすべて剃って取り除き、その後脱毛クリームを使用します。皮膚の手術部位をアルコールと交互にベタジンスクラブで2回消毒し、首の中央に手術刃で長さ約2cmの切開を行います。左総頸動脈(LCCA)、外頸動脈、および内頸動脈の枝を周囲の結合組織から慎重に隔離します。
4. 外科用縫合糸(4-0シルク縫合糸、ハーフヒッチノット)で外頸動脈と総頸動脈を結紮し、手術中に内頸動脈への血流を一時的に遮断します。
5. シリコンコーティングされたナイロン縫合糸(8-0モノフィラメント、長さ11 mm)を内頸動脈を通して左MCAの起点まで挿入します。フィラメントのシリコンコーティング部分の厚さを0.10〜0.12mmの範囲に調整します。
6. レーザードップラー流量計を使用して、MCA の相対脳血流量 (rCBF) の減少を測定します。MCAO は、虚血期間全体にわたって rCBF が安静状態値の 20% <維持されたときに確認されます。
7. 大脳動脈が閉塞している間に挿入されたフィラメントを血管に2時間固定し、フィラメントを慎重に引き抜いて血流を回復させ、22時間の再灌流を行います。5か所(3-0シルク縫合糸、2つのハーフヒッチノット)を縫い合わせて皮膚を縫合し、各マウスが麻酔から目覚めますようにします。

材料