ラットモデルにおける急性電気けいれん発作の誘発

要約

出典: Jang, S., et al, Electroconvulsive Seizures in rats and fractionation of their Hippocampi to examine seizure-induced change in postsynaptic density proteins.J. Vis. 経験。(2017年)

このビデオは、発作誘発性神経可塑性を研究するために、ラットモデルにおける急性電気けいれん発作(ECS)の誘発を示しています。研究者らはイヤークリップ電極を介して電気刺激を加え、ニューロンの過興奮性とクローヌスを引き起こします。このモデルは、シナプス可塑性、発作メカニズム、電気けいれん療法 (ECT) 関連の治療効果の調査に役立ちます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1.急性ECSの誘導

注:図1B、トップパネルを参照してください。

1. イヤークリップを滅菌生理食塩水で濡らし、飽和させていることを確認します。
2. ネズミの耳を生理食塩水に浸したガーゼで包んで滅菌生理食塩水で濡らします。濡れたらガーゼを外します。
3. 耳片にクリップを1つ取り付け、主軟骨バンドの向こう側に配置します。
4. ECS マシンで真のループが確立されていることを確認します。確立されていない場合は、エラーメッセージまたは読み取り値 "1" がマシンに表示されます。
5. 厚手の非金属製の手袋を着用してください。手袋をはめた手でラットをそっと抱きしめながら、「SHOCK」ボタンを数秒間押し、ゆっくりとラットのグリップを放して発作を観察します。偽の「発作なし」(NS)コントロールの場合、ラットを同じように扱いますが、電流を供給しないでください。
6. クローヌスが始まるとイヤークリップを外し、「口と顔の動き」(ステージ1)、「頭のうなずき」(ステージ2)、「前肢クローヌス」(ステージ3)、「前肢クローヌスでの育成」(ステージ4)、「前肢クローヌスでの起上げと転倒」(ステージ5)を含む改訂されたラシーンスケールに従って発作行動を記録します。発作は約10秒続くはずです。タイマーを使用して発作期間を記録します。
7. 発作終了後、ラットをホームケージに戻します。ラットをさらに5分間監視して、発作からのラットの回復を確認します。ケージに単独で保管し、ケージを回復室に戻します。
8. 次のラットでECS誘導を繰り返します。
実験
9. のために安楽死させるまで、その日の残りの時間、および少なくとも午前中に1回、翌日の午後に1回ラットを監視します。
   注:ECS誘導法は、偶発的な副作用として臨床徴候を引き起こす可能性があり、注意が必要です。たとえば、ECS誘導プロトコルは、15秒以上続く発作を誘発し、ラットに不必要な苦痛を引き起こす可能性があります。この場合、ジアゼパム(10 mg / kg、i.p.)またはペントバルビタール(25〜30 mg / kg、i.p.)を使用して発作を終了します。発作停止後にラットが呼吸困難または重度の行動異常を発症した場合は、二酸化炭素吸入とその後の斬首によって安楽死させます。

結果

図1:急性ECSおよび慢性ECSの導入のスキーマ。 (A)ラットをイヤークリップ電極を介してパルス発生器に接続し、電気ショック(55 mA、100パルス/ s、0.5秒)を加えて、ステージ4〜5の強直間代発作を誘発しました。(B) 急性 ECS は 1 回の電気ショックによって誘発されました。慢性ECSは、7日間連続して1日1回の電気ショックによって誘発されました。示されている時点は、急性 ECS の導入後の期...

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
Sprague-Dawley rat	Charles River Laboratories		ECS supplies
A pulse generator	Ugo Bsile, Comerio, Italy	57800	ECS supplies