ハイドロゲルベースのマイクロカラムを用いたマイクロ組織工学ニューラルネットワークの開発

Abstract

出典: Struzyna, L. A. et al., 神経系の再構築、変調、モデリングのための解剖学的にインスピレーションを得た 3 次元微小組織工学ニューラル ネットワーク。J. Vis. 経験。(2017年)

このビデオでは、細胞外マトリックスコアを備えたハイドロゲルマイクロカラムを使用したマイクロ組織工学ニューラルネットワークの開発を示します。播種されたニューロン集合体は接着し、投影を拡張し、構造化されたニューラルネットワークを形成し、神経発達と神経治療研究の進歩に貢献します。

Protocol

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. アガロースヒドロゲル(マイクロ組織工学ニューラルネットワーク(micro-TENNs)の無細胞成分)の開発)

1. アガロース溶液の調製
   1. バイオセーフティキャビネット内で、20 mLのダルベッコリン酸緩衝生理食塩水(DPBS)を2つの10 cmペトリ皿のそれぞれに移して、マイクロカラム用のリザーバーを調製します。細い鉗子やマイクロメスは、ホットビーズ滅菌器で滅菌します。
   2. 3 gのアガロースを重さを量り、バイオセーフティキャビネット内の滅菌ビーカーに移します。100 mLのDPBSを加えて、最終濃度を3%の重量/体積(w/v)にします。清潔な磁気バーを同梱し、ビーカーをアルミホイルで覆います。
   3. ホットプレート/スターラーを使用して、ビーカーを100°Cで温め、120〜200 rpmで攪拌してアガロースを完全に溶解します(溶液は濁った状態から透明に変わります)。ゲル化を防ぐために加熱と攪拌を維持し、アガロースの燃焼を避けるために必要に応じて加熱温度を変更します。
      注:レーザー切断装置と毛細管の両方を使用した製造は、それぞれ以下のサブセクション1.2および1.3に示されています。いずれかのサブセクションで説明されている手順を完了したら、サブセクション1....

Results

図1:レーザーカットマイクロカラム製造装置と細胞凝集用の3Dプリントピラミッド型マイクロウェルモールドの設計図。(A)-(B)ヒドロゲルマイクロカラムの製造に使用された、それぞれ円筒形チャネルアレイの下半分と上半分の設計図と画像。(C)デバイスを固定するために使用されるキャップの設計図と画像。前部と後部の両方の部分が同じ寸法を共有します。(D)マイクロカラムの製造に必要な組み立てられたデバイスの画像。2つのキャップと下半分のみが、下の2つの位置合わせ穴(左)にネジで固定されています。破線は、各キャップの5.......

Materials