CD4 +ミルテニーMACS精製を使用してマウスのリンパ節からT細胞の分離

サマリー

ミルテニーMACのキットを用いてリンパ球の分離は、全体のリンパ組織のホモジネートから細胞を浄化するために信頼性の高い方法です。国内でのみ有効のシステムを使用して精製した細胞は通常、≥96パーセント純粋です。ここで、我々は、CD4 + T細胞、ミルテニーが提供する多くのキットのいずれかを特定するために行った手順を示します。

要約

一次ソースからの細胞の分離には多くの複雑なプロトコルにするために必要なステップです。ミルテニーは、ヒト、非ヒト霊長類、ラットと、我々がここで説明するように、マウスを含め、いくつかの生物から細胞を単離するキットを提供しています。磁気ビーズをベースの細胞分離には、ポジティブ選択（または細胞の枯渇）と同様に負の選択のどちらかが可能になります。ここで、我々はそのまままたはNA VEのCD4 +ヘルパーT細胞の負の選択を示しています。この標準プロトコルを使用して、我々は通常、≥96パーセント純粋なCD4 + / CD3 +である細胞を精製する。このプロトコルは、プロトコルの解剖と養子のイメージングを目的として転送するT細胞と他の細胞型の浄化のために、Joveの第7号に掲載されたマウスの末梢リンパ節の2光子イメージングと組み合わせて使用​​されます。我々はこのプロトコルのビデオでFACS分析を示すしなかったが、それは非常にFACSを経由して適切な抗体を用いて単離された細胞の全体的な純度をチェックすることをお勧めします。さらに、我々はT細胞の分離の非滅菌方法を示しています。無菌細胞が特定のエンドユーザーのアプリケーションに必要な場合は、標準的な無菌条件下で組織培養フードに示した手順のすべてを行ってください。独自の実験を見て、幸運をありがとう！

プロトコル

で国内でのみ有効キットまたはオンラインに含まれるプロトコル読み、その指示に従ってくださいhttp://www.miltenyibiotec.com/を 。

ディスカッション

一次ソースからの細胞の分離には多くの複雑なプロトコルにするために必要なステップです。ミルテニーは、ヒト、非ヒト霊長類、ラットと、我々がここで説明するように、マウスを含め、いくつかの生物から細胞を単離するキットを提供しています。磁気ビーズをベースの細胞分離には、ポジティブ選択（または細胞の枯渇）と同様に負の選択のどちらかが可能になります。ここで、我々はそのまままたはNA VEのCD4 +ヘルパーT細胞の負の選択を示しています。この標準プロトコルを使用して、我々は通常、≥96パーセント純粋なCD4 + / CD3 +である細胞を精製する。我々はこのプロトコルのビデオでFACS分析を示すしなかったが、それは非常にFACSを経由して適切な抗体を用いて単離された細胞の全体的な純度をチェックすることをお勧めします。さらに、我々はT細胞の分離の非滅菌方法を示しています。無菌細胞が特定のエンドユーザーのアプリケーションに必要な場合は、標準的な無菌条件下で組織培養フードに示した手順のすべてを行ってください。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
MACSバッファー	試薬	なし	なし	Miltenyi社の指示通りに調製すること。
CD4+ T細胞分離キット：Untouched Isolation	試薬	Miltenyi Biotec	130-090-860	Miltenyiシステムで使用。
滅菌リン酸緩衝生理食塩水 (PBS)	試薬			MACSバッファーの調製に使用。
Corning 35mm 非TC処理培養ディッシュ	その他	Corning	430588	単一細胞懸濁液の調製に使用。
70 µm セルストレーナー	器具	BD Biosciences	352350	単一細胞懸濁液の調製に使用。
6 mL シリンジ	器具	Tyco Healthcare, Covidien	8881516051	単一細胞懸濁液の調製に使用。
10x Dulbecco’s リン酸緩衝生理食塩水 (DPBS)	試薬	Invitrogen	14200-075	赤血球溶血に使用。
滅菌水	試薬	Sigma-Aldrich	W4502	赤血球溶血に使用。