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それぞれの製造者および/またはベンダーと一緒に*すべての材料は、プロトコルの下に表示されます。
1。インプラントの組み立て
- 樹脂1gに硬化剤100 mgを追加することで、熱硬化性光ファイバエポキシの混合物を準備します。
- メジャーとくさび先端カーバイドスクでそれを得点に100μmコアを持つ光ファイバ125μmファイバーの約35mmを切った。単一、単方向の動きで光ファイバーとスコアにスクライブ垂直に置きます。繊維を切断して完全に光ファイバのコアにダメージを与えます。
- バイスに穴127μmのフェルールのLCセラミックを挿入し、凸側がダウンして指摘した。
- フェルールに光ファイバを挿入します。光ファイバーはスムーズにスライドし、わずかにフェルール（ 図1a）の凸端を越えて突出する必要があります。
- エポキシが黒くなるまで、ヒートガンで平らな端と熱に熱硬化性のエポキシ樹脂の光ファイバの1滴を適用します。エポキシべきそれを加熱して硬化される前にフェルールを埋める。エポキシは、一定の熱アプリケーションの〜1分以内に治す必要があります。
- それはカプラとのインタフェース邪魔になるため、フェルールの側面に沿って任意のエポキシを拭き取ります。
- 研磨パッド上に酸化アルミニウム研磨シート（ 図1b）でLC光ファイバ研磨ディスク（FOPD）を使用して、フェルールの凸端を磨く。円形の回転パターンを作成し、次の順序で4つのグレードに磨く：5、3、10.3μmのグリット。
- それは関心領域を対象としているような適切な長さに平らな端で光ファイバをカットします。長さは脳地図を用いて決定することができる。
- 後述のカプラーコードを介してレーザーに接続することによってインプラントをテストします。インプラントの研磨端は、カプラのスリーブ内に挿入され、対向するフェルールとの直接の接触を行う必要があります。インプラントは番目の先端で測定、光出力10 mWを維持することができるはずeのインプラント繊維。悪いインプラントは、光ファイバの先端付近の弱い焦点を持つことになります。
- 使用するまで泡の完成インプラント（ 図1c）を格納します。
2。光ファイバカプラのコードのアセンブリ
- 上記のような熱硬化性光ファイバエポキシの混合物を準備します。
- くさび先端カーバイドスクでそれを得点に200μmコアを持つ光ファイバ220μmファイバーの適切な長さを測定し、カット。繊維の長さは、マウスが住宅の周りを自由に移動することができますが、マウスがファイバを通じてかむを許すべきではない。
- 光ファイバの長さよりわずかに長い根分岐部のチューブの長さに光ファイバーを挿入します。チューブは光ファイバーよりもわずかに大きい内径を有するべきである。
- ストリップ〜止まるまで230μmのボアと光ファイバの一端に25mmとマルチモードのFC MMの金属端に挿入し、アセンブリをフェルール。光ファイバーはferru通って固執する必要がありますル·エンド（ 図2a）。
- 金属の終わりに（スーパー接着剤）シアノアクリレートとの接続を固定します。コネクタのブーツとの接続をカバーするとFC FOPDとフェルール端面を研磨する。 5、3、1、0.3μmのグリット（ 図2b）は、次の順序で4学年上の円形の回転パターンとポリッシュを行います。
- 遠凸端を有するLCセラミックフェルール（230μmのIDボア）に光ファイバのもう一方の端を取り除き、挿入します。硬化するまで平らな端および熱に対するエポキシのドロップを適用します。
- 上記のように酸化アルミニウムの研磨シートでFC FOPDを使用して、フェルールの凸端を磨く。
- スリーブの中点までフェルールの端の上に凸のLCフェルールスリーブをスライドさせます。
- 場所、熱収縮チューブと分岐接続（ 図2c）を確保し、保護するスリーブと熱上のチューブを。
- レーザ光源に接続し、光OUTPを測定することによりカプラをテスト分光光度計を用いてカプラを介してUT。レーザー出力と測定されたカプラ出力との間の光損失は30％を超えてはならない。
3。外科的移植
*これはヒントのみの手順です。 Instrumentsは、滅菌されているが、手袋は器具および装置との間に一定の操作に起因している必要はありません。
- 30ゲージの針を用いてそれぞれ腹腔内注射をケタミン/キシラジン混合物100及び10 mg / kgでマウスを麻酔。
- バリカンで頭皮を剃る。 Betasept続いて70％イソプロピルアルコールで頭皮を拭い回繰り返し、2分間（4％クロルヘキシジン溶液）を拭きます。
- sterotaxicリグにマウスを置き、頭部を固定し、頭蓋骨が水平であることを保証します。乾燥や術後の痛みを防ぐために、目に眼軟膏を適用します。畝の生理状態に応じて酸素で希釈揮発イソフルラン（1〜3％を使用して麻酔を維持連続テールピンチへの応答）によって監視されるべきであるSE、。
- ラムダにある目の軌道から頭蓋を露出させ、頭皮の正中線を通って切り込みを入れる。必要に応じて結合組織を押し退ける。
- 肌を抑えて頭蓋（ 図3a）へのアクセスを維持しセラフィン·クランプを使用しています。
- デンタルピックと頭蓋の表面全体にエッチ市松模様。滅菌生理食塩水を離れて破片を洗ってください。徹底的に乾燥させます。
- 微細孔を作成するために〜2-3秒間綿棒で露出した頭蓋に過酸化水素（3％）を適用します。複数回洗い、よく乾かします。スパルタらで説明したように別の方法として、アンカーは、頭蓋にねじ込むこともできます。 （2012）。
- 繰り返しになりますが、歯のピックと頭蓋全体に市松模様のエッチングと食塩水で残骸を洗い流す。徹底的に乾燥させます。
- 回転工具を用いて、滅菌ドリルビット小さな穿頭孔開頭術（直径<1 mm）を作る（オートクレーブ）関心領域の上に、ブレグマとラムダに校正脳地図によって決定されます。硬膜を壊すか、または任意の組織に損傷を与えないように注意してください。破片を離れて洗い、よく乾かします。
- プローブホルダーに光ファイバーフェルール（インプラント）を挿入し、定位アームに接続します。
- 直接定位アーム（ 図3b）を使用して、関心領域の上に所定の位置にインプラントを置きます。脳組織内の光ファイバを挿入した場合、繊維は約2 mm / minの速度でゆっくりと進めなければならない。フェルールは、残りの頭蓋上にくるようにします。
- 歯科用セメントの混合物を準備します。混合物は容易に頭蓋全体に適用されるのに十分低い粘度を持っている必要があります。混合物は2-4分間使用可能になります。
- 滅菌つまようじを使用して、頭蓋全体およびインプラントの下部への歯科用セメントの薄い均一な層を適用します。として歯科用セメントのベース層は、頭蓋にできるだけ多くの表面積をカバーすべきである可能。歯科用セメントは、マウスの皮膚に接触させないでください。これは、増加した縫合の難しさだけでなく、マウスへの刺激につながる。歯科用セメントが皮膚に接触しない場合、それは部分的にセメントのレイヤー全体が設定する前に剥離することができるように乾燥することができます。
- それが完全に乾燥することができます。
- それぞれの層は（ 図3c）完全に乾燥させ、頭蓋の上、インプラントの周りの小さなマウンドを形成するために、歯科用セメントの偶数層を適用します。滑らかで、遮るもののない接続を可能にするためにセメントのきれいなフェルールの凸端の約3〜5 mmのままにしておきます。
- 歯科用セメントのマウンドの上およびC22針付き滅菌の単回使用絹編組縫合糸（6-0）を使用して、インプラントの周りに頭皮を縫合。 7日後に削除します。オプション：縫合した後、追加のバインドに使用獣医ボンド。最小限の獣医ボンドを必ず使用してください。過剰は引っかき傷に起因する重篤な皮膚の損傷につながることができます。
- Immediatel手術後のY、マウスの皮下術後疼痛を減少させるためにKetprophen（5 mg / kgの）を注射しなければならない。これは24時間後に繰り返されるべきである。縫合し、皮膚への局所鎮痛薬（Bupivicaine）と抗生物質（ネオスポリン）を適用して、インプラントの根元。
- 麻酔からの回復のための毛布の上にケージにマウスを置きます。滅菌し、術後の回復ケージにマウスを置きます。回復ケージには温度を維持し、窒息を避けるために、どんな寝具を含むべきではありません。マウスは、元のケージまたは一回目が覚めて、新しいケージに戻すことができます。
光源と関心領域内の光ファイバーの端部との間の最小の光子損失の光ファイバインプラントとカプラ結果の適切な組み立て。洗練された光ファイバーは同心円（ 図2d）、均一に光を透過する必要があります。慎重に注入し、縫合では、インプラントは、には目に見える刺激を起こさないマウスや光ファイバーまたは透過する光の量の有意な低下させることなく、長期的な研究（ 図3d、> 1ヶ月、未発表の観察）のための場所に留まることができる。不適切な注入や縫合は炎症を引き起こすことができ、その頭皮を通してスクラッチマウスになる可能性があり、歯科用セメントを露出したり、永続的な操作に起因する歯科用セメントからフェルールの破損。組み立てられたシステムの概略図を図4に示します。
図1：植込み型光ファイバーの組立。 （a）は、光ファイバはわずかに矢印で示す凸端を越えて突出、フェルールに挿入されます。 （b）のフェルールの凸端は、研磨シートの徐々に細かいグレードにFOPDを用いて研磨されています。 （c）に完成した植込み型繊維のオプトインIC。 拡大図を表示するには、ここをクリックしてください 。
図2：光ファイバカプラの組立は、インプラントにテザーへの光ファイバーロータリージョイントを使用していました。フェルールアセンブリから（a）の光ファイバスティッキング。 （b）は、アセンブリのフェルール側は研磨紙の使用FOPDと洗練徐々に細かいグレードに挿入されます。 （c）のフェルール、フェルールスリーブの上に取り付けられ、熱収縮チューブで固定されています。 （d）を終え、光ファイバカプラは、最小限の光子損失と同心光を生成する必要があります。
図3：外科的移植光ファイバー。 craniuの（a）の全面メートルが露出していると結合組織はクリアされます。 （b）は光ファイバインプラントは、定位固定アーム付き位置に保持されている。 （C）歯科用セメントは、頭蓋に光ファイバを固定するインプラントが適用されます。 （d）は移植後> 1ヶ月、皮膚がインプラントの周囲に治癒したと刺激の兆候はありません。
図4機能的なシステムの概略図