大同定ニューロン(と動物では例えば軟体動物)、モータープールの分析は、細胞内の技術を使用して行われ 1,2,3,4。最近、我々は細胞外で個々の神経細胞を刺激し、記録する技術を開発アメフラシカリフォルニ 5。我々は今、一意に識別してモータープール内の運動ニューロンを特徴づけるためにこの手法を使用するためのプロトコルを記述します。
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大同定ニューロン(と動物では例えば軟体動物)、モータープールの分析は、細胞内の技術を使用して行われ 1,2,3,4。最近、我々は細胞外で個々の神経細胞を刺激し、記録する技術を開発アメフラシカリフォルニ 5。我々は今、一意に識別してモータープール内の運動ニューロンを特徴づけるためにこの手法を使用するためのプロトコルを記述します。
大同定ニューロン( 例えば軟体動物)、モータープールの分析と動物では細胞内のテクニックに1,2,3,4を使用して行われます。最近、我々は細胞外にアメフラシカリフォルニ 5で個々の神経細胞を刺激し、記録する技術を開発しました。我々は今、一意に識別してモータープール内の運動ニューロンを特徴づけるためにこの手法を使用するためのプロトコルを記述します。
この細胞外手法には利点があります。まず、細胞外電極は刺激し、記録ニューロンをシース5を通っているので、削除する必要はありませんすることができます。このように、神経細胞は、細胞内のものに比べて、細胞外の実験でより健康になります。ガングリオンは、シースのピンニング適切により回転される場合、第二に、細胞外電極は、より容易かつ効率的に同じ準備で複数のニューロンを識別できるようになり神経節、両側の神経細胞にアクセスすることができます。第三に、extracelluLAR電極が細胞に侵入する必要はありません、したがって、容易にそれらにあまりダメージを与え、ニューロン間で前後に移動することができます。一つはわずか数分持続することがある運動パターンを繰り返す中に複数のニューロンを記録しようとするときに特に便利です。第四に、細胞外電極は、筋肉の動きの間に細胞内のものよりもはるかに柔軟です。細胞内電極引き出し、筋肉の収縮時に神経細胞を損傷することがあります。細胞外電極は優しくニューロン上記シースに押し付けているのでこれとは対照的に、彼らは通常、筋肉の収縮時には、同じニューロン上に滞在し、したがってよりそのまま調剤で使用することができます。
ソーマのサイズや位置、軸索投射し、筋肉の神経支配4:一意細胞外電極を使用してモータープール(特に、 アメフラシでI1/I3筋肉)の運動ニューロンを同定するためには、基準のような細胞内の測定を必要としない機能を使用することができます、6,7。手法を説明するために使用される特定のモータープールのために、我々は軸索突起物を測定するために頬神経から2と3を記録し、個々の運動ニューロンのための筋の神経支配のパターンを決定するI1/I3筋肉の収縮力を測定した。
我々は、迅速な同定のために簡略化された診断法を作成し、運動パターンの間にそれらのタイミングを特徴付ける、筋の神経支配を用いた第1の識別運動神経の完全なプロセスを示しています。簡略化され、より迅速な診断方法は、一時停止頬マス準備8 または in vivo で 9 例より完全な準備のために優れています。このプロセスは、2,3,13,14 アメフラシや他の動物系で10,11,12他のモータープールに適用することができます。
1。録音皿の調製
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図4および図5は、2 I1/I3運動ニューロンを識別するために使用される代表的な結果を示している。 図4は egestive様およびingestive状のパターン( 図4C、4D)の間に大規模な運動ニューロン、B3のソーマの記録を示しています。 B3ソーマ記録の特異性はパターンの間に維持されたことソーマ·チャネル上の1対1対応するスパイクと同側のBN2チャネル( 図4E)ショー。 B3は、パターンの途中から後半トラクション段階に発光します。 図4およびその他の結果(図示せず)から、我々は、B3のBN2ユニットは常に最大のBN2ユニットであることがわかった。したがって、それはまた、BN2録音から直接検出することができます。
図5は egestive様およびingestive状のパターン( 図5C、5D)の間に、B.......
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そのような軟体動物(例えば、Lymnaea、らせん 、とアメフラシ )、モータープールの分析などの大型同定ニューロンを持つ動物では、通常、細胞内記録1,2,3,4を使用して行われます。このプロトコルでは、我々は独自に外技術を使用してモータープールのための運動ニューロンを同定する方法を説明します。我々は、このプロセスの実例として力の測定値を使用していました。一つは、筋肉の神経支配を測定する筋電図を使用することができます。簡単に言えば、これを行うには、プロトコルは、EMGのレコーディングにI1/I3筋肉の異なる領域にフック電極を取り付けるように変更する必要があります。
細胞外の技術は既に上述してきたそのうちのいくつかは細胞内の技術上のいくつかの利点があります。まず、細胞外の手法は、実験のために神経を準備するより少ない時間と労力を必要とし、ニューロンへのダメージが少なくなります。通常、それはBUCを準備するために20〜30分かかります外実験や細胞内の実験のために頬のマスに接続されている頬神経を準備するには、約.......
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我々は、開示することは何もない。
この研究は、NIHの助成金NS047073とNSFの助成DMS1010434によってサポートされていました。
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| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | 注釈 |
| 塩化ナトリウム | フィッシャー·サイエンティフィック | S671 | 生物学、認定 |
| 塩化カリウム | フィッシャー·サイエンティフィック | P217 | 認定のACS |
| 塩化マグネシウム六水和物 | アクロスオーガニック | 19753 | 99パーセント |
| 硫酸マグネシウム·7水和物 | フィッシャー·サイエンティフィック | M63 | 認定のACS |
| 塩化カルシウム二水和物 | フィッシャーScientifc | C79 | 認定のACS |
| グルコース(ブドウ糖) | シグマアルドリッチ | G7528 | BioXtra |
| MOPSはbuffeR | アクロスオーガニック | 17263 | 99パーセント |
| カルバコール | アクロスオーガニック | 10824 | 99パーセント |
| 水酸化ナトリウム | フィッシャー·サイエンティフィック | SS255 | 認定された |
| 塩酸 | フィッシャー·サイエンティフィック | SA49 | 認定された |
| 単銃身のガラスキャピラリー | AMシステム | 6150 | |
| フレイミング·ブラウンマイクロピペットプラーモデルP-80/PC | サターインスツルメンツ | フィラメント使用:FT345B | |
| エナメルコーティングされたステンレス鋼線 | カリフォルニアファインワイヤー | 0.001D、コーティング時間 | |
| 家庭用シリコーン二グルー | GE | ||
| デュロクイックジェル瞬間接着剤 | ヘンケル社。 | ||
| AMのシステムモデル1700アンプ | AMシステム | フィルタ設定:I2神経/筋肉のための10から500 Hzであり、他のすべての神経のための300から500 Hzの | |
| Pulsemasterマルチチャンネルミュレータ | ワールド·精密機器 | A300 | |
| 刺激アイソレータ | ワールド·精密機器 | A360 | |
| AxoGraph X | AxoGraph科学 | 録音用のソフトウェア | |
| 金色のコネクタピン | 丸型 | SA3148 / 1 | |
| ゴールドコネクタソケット | 丸型 | SA3149 / 1 | |
| シルガード184シリコーンエラストマー | ダウコーニング | ||
| 100×15ミリメートルCrystalizingディッシュ | パイレックス | ||
| 高真空用グリース | ダウコーニング | ||
| ピペットチップ | フィッシャー·サイエンティフィック | 21-375D | |
| Minutienピン | ファイン科学ツール | 26002から10 | |
| モデリングクレイ | サージェントアート | 22から4400 | |
| エアーポンプをささやく | テトラ | 77849 | |
| 水族館チューブ | EHEIM | 7783 | 12月16日mm |
| エリートAirstone | ハーゲン | A962 | |
| Vannas春はさみ | ファイン科学ツール | 15000から08 | |
| デュモン5位ファイン鉗子 | ファイン医学工学総合研究電子ツール | 11254から20 | |
| キムワイプ | キンバリークラーク | 34155 |
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