本論文では、自己組織化の自発的プロセスによる高度に秩序ペプチドベースの構造の形成を説明しています。この方法は、市販のペプチドおよび共通実験装置を利用しています。この技術は、ペプチドの多種多様に適用することができる、新たなペプチドベースアセンブリの発見につながることができる。
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本論文では、自己組織化の自発的プロセスによる高度に秩序ペプチドベースの構造の形成を説明しています。この方法は、市販のペプチドおよび共通実験装置を利用しています。この技術は、ペプチドの多種多様に適用することができる、新たなペプチドベースアセンブリの発見につながることができる。
自然界では、複雑な機能的構造は、温和な条件下での生体分子の自己集合により形成される。自己組織化を制御する力を理解し、in vitroで 、このプロセスを模倣することは、材料科学、ナノテクノロジーの分野で大きな進歩をもたらす。それらはかなりの多様性を提示するように、利用可能な生物学的なビルディングブロックの中では、ペプチドは、大規模での合成が簡単であり、いくつかの利点を有し、それらは容易に生物学的および化学的実体1,2で修飾することができる。このような環状ペプチド、両親媒性ペプチドおよびペプチド結合体溶液中の秩序構造に自己組織化するよう設計されたペプチドのいくつかのクラス。ホモ芳香族ジペプチドは、例えば、ナノチューブ、球体及びフィブリル3-8のような秩序構造を形成するのに必要な全ての分子の情報を含むショート自己組織化ペプチドのクラスである。これらのペプチドの多種多様な市販されている。 。9ここに提示プロトコルが潜在的にできるペプチド又は生物学的なビルディング·ブロックの他のクラスに適合することができる新しいペプチドベースの構造の発見に、それらの集合体のよりよい制御につながる。
自然形態は、生体分子の自己組織化のプロセスによって秩序構造と機能。この自発的なプロセスを支配する力を理解することは、in vitroで自己組織化を模倣する能力、その結果、材料科学10,11の分野で大きな進歩をもたらす可能性がある。ペプチドは、具体的には、それらは大きな構造的多様性、化学合成の容易さを提供するため、生体分子の構成要素として大きな期待を保持し、容易に生物学的および化学的実体で官能化することができる。ペプチドの自己集合のフィールドがGhadiri及びD-及びL-アミノ酸12を交互に環状ペプチドによるペプチドナノチューブの自己集合を示した彼の同僚によって開拓された。ペプチド集合体の設計に他の成功したアプローチは、線形bolaamphiphileペプチド5、両親媒性物質(AP)6、非共役自己相補イオン性ペプチド13、界面活性剤様ペプチド、 4,14、およびジブロックコポリ15。
より最近のアプローチは短い芳香族ペプチドの自己組織化を必要とする、ホモ芳香族ジペプチドと呼ばれる。これらのペプチドは、芳香族の性質( 例えば、フェニルアラニン-フェニルアラニン、tert-ブチルジカーボネート(Boc)でのPhe-Pheを- )7,8,16-21のみで2つのアミノ酸を含む。これらのホモ芳香族ペプチドにより形成される構造は、管状構造、球状、板状集合体および繊維6,8,15,21-32が含まれています。いくつかのケースでは繊維がヒドロゲル33-37が得フィブリルメッシュを生成します。これらのアセンブリは、バイオセンシング、薬物送達、分子エレクトロニクスなどのアプリケーションのために利用されている。38〜45
本論文では、ホモ芳香族ペプチドの自発的な自己組織化を開始するために必要とされる実験的な手順について説明します。また、coassemblyペプチドのプロセスを示す。このプロセスは、ペプチドの複数のタイプの自己集合を含むモノマー。
ジフェニルアラニンペプチド(NH 2-Pheを-Pheを-COOH)とそのBocはアナログを保護された(のBoc-Pheを-Pheを-OH):私たちのデモでは、2つの市販のペプチドのcoassemblyが含まれています。溶剤7,17,46に応じて、球または繊維のいずれかにジフェニルアラニンペプチドの形の管状アセンブリおよびBoc-Pheを-Pheを-OHペプチド自己集合:超分子構造へのペプチドの自己集合のそれぞれ。我々は、一定の比率で二つのペプチドを配合し、電子顕微鏡、力顕微鏡法およびFT-IR分光法により得られたアセンブリを特徴とする。方法は、数百ナノメートル(〜300〜800ナノメートル)の直径を有する細長いアセンブリによって接続される数ミクロン(1-4ミクロン)の直径を有する球状の要素から構成されているペプチドベースの構造の形成を示した。球状構造がに螺ているように見えるようにアセンブリは、その形態にビーズの文字列に似ている細長いアセンブリ。そこで我々は、これらのアセンブリ「生体分子ネックレス」と呼ばれる。 「生体分子ネックレスは「薬物送達剤として、または電子的用途のための足場として、新しい生体材料となる恐れがあります。さらに、ペプチドの自己集合をもたらす手順は、ペプチド及び生体分子の他のクラスで利用されてもよい。これは、自己集合し、新しい秩序構造の形成に関与する力のよりよい理解につながる可能性がある。
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1。ホモ芳香族ジペプチドの自己組織化
2。二つのホモ芳香族ジペプチドのCoassembly
3。走査型電子顕微鏡(SEM)を用いて自己組織化構造のキャラクタリゼーション
4。透過型電子顕微鏡(TEM)を用いて自己組織化構造のキャラクタリゼーション
5。原子間力顕微鏡(AFM)によるアセンブリの三次元キャラ
6。 FT-IRによる二次構造のキャラクタリゼーション
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本稿では、ペプチドの自己組織化によるナノおよびマイクロメートルスケールでの秩序構造を形成するための方法を説明します。我々が存在し、この単純なプロセスを示し、2の単純な芳香族ペプチドのcoassembly( 図1)を特徴づけるために。ペプチドの一つは、ナノメートル寸法7を備えた中空の管状構造に水溶液中で自己集合することができ、NH 2-Pheを-Pheを-OH(ジフェニルアラニン)ペプチドである。他のペプチドは、そのBocで保護されたアナログ、のBoc-Pheを-Pheを-OHである。このペプチドは、エタノール17,46水性溶液および球状アセンブリ内の線維状構造を形成することができる。私たちは、これらのペプチドが上記の2つの要素を組み合わせた構造にcoassembleあると想定しています。 SEM分析を用いて、ブレンドのペプチドは、いくつかのhundrの直径を有する細長い構造で接続された数ミクロンの直径を有する球状の組立体の構造を形成していることがわかっEDのナノメートル( 図2)。原因ビーズの文字列への形...
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要約すると、本論文では、ペプチドベースのアセンブリはインビトロで形成することができる容易さを示しています。プロセスは、市販のペプチドおよび溶媒を伴い、それは試験管に極性溶媒を添加すると、周囲条件下で自発的に起こる。それは、他の有機溶媒にペプチドの溶解度が低いため、ペプチドの溶媒としてHFPを使用することが重要です。また、HFPの高い揮発性のために、各実験のために新鮮なストック溶液を調製する必要がある。また、原液の量は10μLを超えると極性溶媒(水)中に溶解したペプチドの移動が迅速に行われるべきである必要があります。
これは、ペプチドの溶媒和および自己集合のためのこの方法は、典型的には、これらの芳香族ペプチドを用い、一つの可能なアプローチであることに留意すべきである。他のアプローチは、しかしながら、可能である。また、在庫のsolutを濃度 HFP中のペプチドのイオンは、最終溶液中のHFPの濃度を最小限にするために、これらの実験における高い。
この原稿はまた、AFM、TEM、SEM、およびFT-I...
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著者は、彼らが競合する経済的利益を持っていないことを宣言します。
この作品は、マリー·キュリー国際社会復帰グラントにより、ドイツ語·イスラエル財団によってサポートされていました。私たちは、AFM分析のために氏YAIR Razvagを認める。
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| Name | Company | Catalog Number | Comments |
|---|---|---|---|
| NH2-Phe-Phe-OH | Bachem | G-2925.0001 | |
| Boc-Phe-Phe-OH | Bachem | A-3205.0005 | |
| 1,1,1,3,3,3,3,3-ヘキサフルオロ-2-プロパノール | Sigma-Aldrich | 52512-100ML | |
| エタノール絶対(脱水)AR滅菌バイオ | ラボ株式会社 | 52555 | 50%溶液の調製のためのTDWとのブレンド |
| 酸ウラニル | Sigma-Aldrich | 73943 | ネガティブ染色用。それがなくても作業することは可能です。 |
| ガラスカバースリップ | マリエンフェルド研究所 ガラス製品 | 110590 | |
| TEM グリッド | 電子顕微鏡科学 | FCF200-Cu-50 | Formvar/Carbon 200 メッシュ、Cu |
| 定量的濾紙 | Whatman | 1001055 | |
| 酸化重水素 (D2O) | Sigma-Aldrich | 151882-100G | 99.9 原子 % D |
| CaF2ウィンドウ | PIKE Technologies | 160-1212 | 25 mm x 2 mm ウィンドウ。FT-IR測定用 |
| AFMチップ | NanoScience Instruments | CFMR | Aspireプローブ、CFMR-25シリーズ |
| フィルターユニット | Millipore | SLGV033RS | Millex-GV, 0.22 μm、PVDF、33 mm、ガンマ線滅菌 |
| SEM | FEI | Quanta 200 ESEM | |
| TEM | FEI | Tecnai T12 G2 Spirit | |
| AFM | JPK Instruments | A JPK NanoWizard3 | |
| FT-IR | Thermo Fisher Scientific | Nicolet 6700 高度な金分光計 | |
| FT-IR パージ | パーカー | BALSTON FT-IR パージガス発生器 モデル 75-52 | |
| OMNIC(ニコレット)ソフトウェア | サーモニコレット株式会社 | FT-IRスペクトル分析用 | |
| ボルテックスミキサー | Wisd実験装置 | ViseMix VM | |
| 重量 | メトラー・トレド | NewClassic MS | |
| スパッタコーター | ポーラロン | SC7640 スパッタコーター |
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