臨床および前臨床研究用途のための半自動循環腫瘍細胞（CTC）アッセイの適応

サマリー

循環腫瘍細胞（CTCの）は、いくつかの転移性癌において予後である。この原稿は、ゴールドスタンダードCellSearchシステム（CSS）CTC列挙プラットフォームについて説明し、一般的な誤分類のエラーを強調しています。さらに、2つの適合プロトコルはこの技術を用いた転移の前臨床マウスモデルでのCTCおよびCTC列挙のユーザ定義のマーカーの特徴付けのために記載されている。

要約

癌関連死の大半は、転移性疾患の発症に続いて起こる。この非常に致命的な病気のステージは循環腫瘍細胞（CTCの）の存在と関連している。これらの稀な細胞は、転移性乳癌、前立腺癌、および結腸直腸癌における臨床的に重要であることが実証されている。臨床のCTC検出および計数の現在のゴールドスタンダードは、FDA-クリアCellSearchシステム（CSS）である。この原稿は、標準を使用して、このプラットフォームが利用する標準プロトコルだけでなく、タンパク質の患者CTCの特性評価およびCTCは、血液の非常に低いボリュームをキャプチャするための比較可能なプロトコルのためのユーザー定義のマーカーの最適化の詳細な処理を記述する二つの追加適応のプロトコルの概要を説明転移のin vivoでの前臨床マウスモデルで研究するためのCSSの試薬 ​​。また、健康なドナーの血液との間のCTCの品質の違いは、患者の血液SAMPに対する組織培養由来の細胞をスパイクレスが強調表示されます。最後に、CTCの誤分類エラーにつながることができるいくつかの一般的な矛盾の項目が概説されている。まとめると、これらのプロトコルは、転移およびCTCのに関する前臨床および臨床研究に興味を持って、このプラットフォームのユーザーにとって有益なリソースを提供します。

概要

2013年には580350人々が癌で死亡すると推定されており、この病気のこと1660290新しい例は、一人で¹米国で診 ​​断されます。これらの死亡の大半は転移性疾患²の開発に続いて起こる。転移および転移カスケードの限られた理解の治療に有効な治療法の現在の不足は、病気のこの段階は非常に致命的なことができます。血流内の腫瘍細胞（CTCの）の循環の存在は、転移性疾患³と相関することが実証されている。これらの細胞は非常にまれであり、その検出は、転移性乳癌^4、前立腺⁵で全生存期間を示すものであり、大腸癌^6。少ないまたはSAMにおいて検出のCTCを有する患者と比較した場合、これらの患者では、血液7.5mlの中≥5（乳癌および前立腺）の存在下または≥3（大腸）のCTCは、予後不良の指標であるEの血液量。また、治療的介入の間または後のCTC数の変化は、しばしば、より早く現在利用技術^7-10よりも、治療応答の予測因子として有用であることが実証されている。

それは、転移癌患者において、CTCのは10 ^{5〜10 7}血単核細胞当たり約1 CTCの頻度で発生し、限局性疾患を有する患者において、この周波数は（1〜10 ⁸で〜）であっても低くてもよい、と推定されている。これらの細胞のまれな性質は、それが困難で正確かつ確実¹¹のCTC ^を検出し、分析することができる。 （以前は^12〜14日）のいくつかの方法は、血液成分を囲むと区別する特性を利用することにより、これらの細胞を濃縮し、検出するために利用されてきた。一般的には、CTCの列挙は、濃縮工程と検出工程の両方を必要とする2段階のプロセスである。伝統的に、濃縮のステップは、物理の違いに依存しているCTCの（細胞の大きさ、密度、変形能）またはタンパク質マーカー発現に対する（ すなわち、上皮細胞接着分子[EpCAMの】サイトケラチン[CK]）のiCalの特性。濃縮後、CTCの検出は、核酸に基づくアッセイおよび/またはフローサイトメトリーアプローチである最も一般的なものは、異なる多くの方法で行うことができる。これらの戦略はそれぞれ異なる利点と欠点を持つが、それらすべてが標準化を欠いている、ユニークである。臨床現場への進入のための必要性。 CellSearchシステム（CSS）は、したがって、蛍光顕微鏡および抗体ベースの技術^4-6を用いて、ヒト血液中の希少なCTCの検出および計数のための標準化された方法を提供することを目的に開発されました。このプラットフォームは現在、CTCの列挙型のゴールドスタンダードとみなされ、診療所¹⁵で使用するために米国食品医薬品局（FDA）によって承認された唯一の技術です。

CSSは、2コンポーネントのプラットフォームconsistinですgの、ヒト血液試料の調製を自動化（1）CellTracksオートプレップシステム（以下、製造装置ともいう）と、これらをスキャンし、（2）CellTracksアナライザーII（以下、分析装置と称す）調製後のサンプル。準備器具白血球を汚染するのCTCを区別することは、抗体媒介性、磁性流体ベースの磁気分離手法及び示差的な蛍光染色を使用する。最初に、システムは、鉄ナノ粒子にコンジュゲート抗EpCAM抗体を使用したCTCを標識する。次いで、試料を磁場中でインキュベートされ、全ての未標識細胞が吸引される。選択された腫瘍細胞は、蛍光標識抗体と核染色試薬からなる差動蛍光染色に再懸濁し、インキュベートする。最後に、試料を、磁気カートリッジに移し（以下、磁気装置ともいう）と呼ばれるMagNest、およびscさ分析機器を用いてanned。

分析装置は、10X対物レンズを用いて、異なる蛍光フィルターを用いて調製されたサンプルは、適切な蛍光体粒子に最適化された各々をスキャンするために使用される。 CTCのは、抗EpCAM、抗パン-CK-フィコエリスリン（PE）が結合する細胞（CK8、18、および19）、および核染色4 '、6 - ジアミジノ-2 - フェニルインドール（DAPI）として識別される。逆に、混入白血球を、抗CD45-アロフィコシアニン（APC）およびDAPIが結合する細胞として同定される。走査に続いて、コンピュータで定義された潜在的な腫瘍細胞がユーザに提示される。これらの画像から、ユーザは、CTCのあるイベントを決定するために、上記の定義されたパラメータと差動染色を用いて定性分析を採用する必要があります。

CTCの計数のために標準化された方法を提供することに加えて、CSSは、目的のタンパク質マーカーに基づいて、CTCの分子特徴づけを可能にする。この呼び掛けCCTCの同定¹⁶には必要ないフルオレセインイソチオシアネート（FITC）蛍光チャンネルを使用して、単一細胞レベルで実行することができる。このプラットフォームは、分子特性解析のための能力を提供するが、プロトコル開発および最適化の詳細な処理は、明確に定義されていない。 3種の市販のマーカーは、上皮成長因子受容体（EGFR）、ヒト上皮成長因子受容体2（HER2）、およびインスリン様成長因子1受容体（IGF-1R）を含む、CSSでの使用のために製造業者によって開発されている。 HER2分析は、CSSと組み合わせて、臨床意思決定を通知するために、潜在的に既存の治療ガイドラインを変更するCTCの特徴づけの可能性を例示するためにいくつかのグループによって利用されてきた。例えば、Fehm ら ^{は、HER2-17}原発腫瘍を有する乳癌患者の約3分の1は、HER2 ⁺のCTCを有していたことを実証した。また、Liu ら。18は最近、HER ⁺転移性乳癌患者の最大50％が^HER2陽性のCTCを持っていなかったことを報告した。ハーセプチン、大幅に腫瘍がHER2の十分なレベルを発現^、HER2陽性原発腫瘍^19〜21の患者さんのために一般的に利用され、治療された患者に利益をもたらすことが実証モノクローナル抗体を妨害HER2受容体。しかしながら、これらの研究は、ハーセプチンは、サブ最適に利用し、CTCの特徴づけは、治療応答の予測を助けることができることであることができることを示唆している。最終的に、CTCの特徴づけは、パーソナライズされたケアを改善する可能性を有していてもよい。

それは主にベッドサイド·ツー·ベンチトップアプローチを利用しているという点で、CTCの研究がユニークです。この方法は、多くの場合、患者のケアに影響を与えるには何年もかかることができ、ベンチトップ·ツー·ベッドサイドの研究とは異なり、臨床現場へのCTCクイック入力を可能にした。しかし、医師は患者の治療の意思決定MAKで、CTCの分析の結果を使用して躊躇しているそれらの基礎となる生物学の理解の不足のためにING。したがって、転移および相補CTC分析技術の適切な前臨床マウスモデルが、これらの未解決の疑問を調査するために利用されなければならない。一般的には、転移カスケードのすべてのステップの研究を可能にする転移カスケードを研究するために使用される前臨床モデルの2つのタイプ、（1）自然転移モデルは、存在のみを可能にする（2）実験的転移モデルこのような血管外漏出と二次腫瘍形成²²として、転移プロセスの後の段階の研究。自然転移モデル（前立腺癌の研究のための前立腺に前立腺癌細胞の例えば、注射）の適切な位置に同所性腫瘍細胞の注射を伴う。次いで、細胞を、原発腫瘍を形成し、自発的に、骨、肺、およびリンパ節などの二次部位に転移する時間が与えられる。でこれに対し、実験的転移モデルは、（特定の場所に細胞を標的とする尾静脈や心臓内注射を介してなどして ）血流への腫瘍細胞の直接注入を含んでいるため、二次的な器官²²に血管内および普及の初期段階をスキップします。これまでのin vivoモデル系においてCTC解析の大部分は、フローサイトメトリーベース²³又はヒト適合CTCベースの技術（ 例えば ^{AdnaTest）24}のいずれかを用いて行われた。有用ではあるが、これらの技術はいずれも、適切にゴールドスタンダードのCSSを使用して、CTCの列挙を反映していない。結果は、匹敵するであろうように、臨床承認、標準化された性質、及びCSSの広範な使用に基づいて、 インビボためのCTC捕捉および検出技術の開発が同等の試料調製、処理、および識別基準を利用してモデリングが有利で ​​あろう患者試料から得られた。しかしながら、ボリュームREQに準備器具のuirementsは、この自動化されたプラットフォームを使用して少量の血液を処理することは不可能である。イリアーヌらのほかに、これまでの研究^25は、マウス上皮細胞の試料の汚染（標準、CTCの定義を満たす[のEpCAM ⁺ CK ⁺ DAPI ⁺ CD45が^- ]）ことを実証しています。、マウス扁平上皮細胞の誤分類につながる可能性CTCの。これらの問題のマニュアルを単離操作と組み合わせたCSSのCTCキット試薬​​の利用が開発されたことができようになった技術に対処するために。アッセイのFITC標識ヒト白血球抗原（HLA）抗体の添加は、ヒト腫瘍細胞がマウス扁平上皮細胞と区別することを可能にする。

この原稿がdiscrepan含め遭遇する可能性がある患者の血液サンプルと共通の落とし穴を、処理するための商業的に開発された標準、および最適化されたCSSのプロトコルを記述CTCの誤分類エラーが発生する可能性のT項目。また、収集したCTCのユーザ定義のタンパク質の特性を調べるためのCSSアッセイのカスタマイズおよび転移の前臨床マウスモデルにおいて少量の血液からのCTCの濃縮および検出を可能に匹敵するように適合CSS技術が記載されている。

プロトコル

本稿で説明したすべてのヒトでの研究は、ウェスタン大学の人間研究倫理委員会によって承認されたプロトコルの下で実施した。すべての動物実験は、ウェスタン大学の動物への使用小委員会によって承認されたプロトコルの下で、動物ケアカナダ評議会の勧告に従って行った。

1。 CSSを使用して患者血液サンプルから標準、CTC列挙

1。準備インストゥルメントの処理のための人間の血液サンプル採取と準備

1. 標準的な無菌瀉血技法を使用して、エチレンジアミン四酢酸（EDTA）および独自の細胞保存剤を含有する（以下、CTC防腐チューブともいう）を、10ml CellSaveチューブにヒト血液8.0mlの最小を描く。血液の凝固を防ぐために、チューブの5倍を反転します。サンプルはすぐに処理されるか、最大96時間室温で保存することができる。
2. リムーバブル冷蔵庫から電子のCSS試薬およびそれらを使用する前に室温に温める。
3. 使い捨ての10ミリリットルピペットや自動分注器を使用して、CTCの防腐管からの血液7.5ミリリットルを収集し、徐々に適切にラベル作成機器の処理チューブに血液を分注する。
4. 各サンプルに希釈緩衝液6.5ミリリットルを追加します。サンプル5X転倒混和する。 「オフ」の位置にブレーキをかけながら10分間800×gで遠心分離サンプル。処理のためにシステムにすべての患者サンプルをロードするための準備機器で画面上の指示に従ってください。サンプルは、準備の1時間以内に処理されなければならない。

2。準備インストゥルメントの処理のための制御の準備

1. 優しくコントロールバイアルをボルテックスし、混合することが5倍に反転。
2. 慎重にコントロールバイアルからキャップを外し、キャップを外し、バイアルの上に反転準備計器処理チューブを配置します。 1迅速な運動では、反転バイアルを制御し、処理チューブに内容物を注ぐ。反転しながら、ゆっくりと残りの内容物を放出するために、制御バイアルの側面をフリック。
3. 慎重に、処理チューブから反転制御バイアルを取り外し、液体が失われないことを保証し、脇に置きます。千μLピペットを用いて、処理チューブにバイアル蓋と静かにピペットから、残りの内容を収集します。
4. 処理のためのシステムにコントロールをロードするための準備機器で画面上の指示に従ってください。

3。分析計測器上のサンプルのスキャン

1. システムからすべてのサンプルをアンロードする準備機器で画面上の指示に従ってください。ゆるく各磁気デバイスカートリッジにキャップをし、カートリッジの端に貼り付けられている任意の泡を解放するために手や実験台を用いた磁気デバイスをタップします。すべての気泡が除去されていると、しっかりと私は、カートリッジにキャップを平らな磁気デバイスを置き、室温で少なくとも20分間、暗所ncubate。サンプルは準備の24時間以内にスキャンする必要があります。
2. 分析装置の電源を入れ、ランプを初期化します。一回（15分〜）温め、分析機器へのシステム検証カートリッジをロードし、QCテスト ] タブを選択します。必要な品質管理対策を行うために、画面上の指示に従ってください。
3. 分析装置にサンプルをロードして、 患者のテスト ] タブを選択します。製造器具からすべての保存された情報が表示されます。サンプルのスキャンを初期化するために、開始をクリックします。システムは、磁気デバイスカートリッジに粗い焦点およびエッジ検出を実行する。
4. 方向キーを使用して、必要に応じてすべてのエッジを調整します。選択して受け入れます 。システムは、ファインフォーカスを実行し、サンプルのスキャンを開始します。
5. 結果をスキャンし、以下のような制御は、高（CK ⁺ DAでスパイク細胞について定義された基準を使用して検証する必要がありますPI ⁺ CD45 ^- APC ^+）、低（CK ⁺ DAPI ⁺ CD45 ^- FITC ^+）濃度。結果をスキャンして、次の患者のサンプルは、定義されたCTCの基準（CK ⁺ DAPI ⁺ CD45 ^{- ）}を使用して収集したCTCのために見直すべきである。

2。 CSSを使用してユーザー定義マーカーのCTC特性評価

1。ユーザー定義のマーカーとインストゥルメントの初期化の準備

1. 作業濃度は、試料に加えた後、抗体の濃度であり、ストック濃度は、抗体の濃度である以下の式を用いて、標識試薬カップに所望の濃度にボンド一次抗体希釈液を用いて目的の抗体を希釈試薬カップ。複数のサンプルについては、 表1に記載したように、抗体のボリュームを調整する。試薬カートリッジとLの位置1に標識試薬カップを置くCSSにカートリッジをOAD。
   ストック濃度=（作用濃度X 850μL）/ 150μL
   
2. 、採血試料を作製し、CSSのプロトコルを使用して患者血液サンプルから標準、CTC列挙上記で説明したように、準備測定器をロードします。準備機器によって要求されたら、カスタムマーカー追加を有効にするには、[ユーザーは、アッセイを定義しました 。入力マーカー名および[保存]を選択します。サンプルは、機器にロードされるように、オペレータは、必要に応じていいえを選択するかによって、カスタムマーカーを受け取るべきかを示すプロンプトが表示されます。

2。分析計測器上のユーザー定義マーカーのサンプルスキャン

1. CSSを使用して患者血液サンプルから標準のCTC列挙の3.2節で説明したように、分析装置の電源を入れ、ランプを初期化し、品質管理とシステム検証を実行プロトコル。
2. 分析装置にサンプルをロードし、[セットアップ ] タブを選択します。 FITCチャンネルを初期化するには、 試験プロトコル]セクションの下にキットのIDとしてCellSearch CTCを選択します。このメニューから、CTCの研究を選択し、[編集]ボタンをクリックし、必要に応じて露光時間を設定します。これは、CTCの識別に利用される他の蛍光チャンネルにブリードスルーを増やすことができますように、CSSのCTCキットを使用する際に1.0秒の露光時間を超えないことをお勧めします。

3。前臨床マウスモデルで使用するための標準CSSProtocolの適応

** Veridexマウス/ラットCellCaptureキットからの適用（もはや商業的に入手可能）

1。マウス採血および保管

1. 採血前、0.5M EDTAを30μlのは、ハブ中のEDTA、少量を残して、前後に22 G針を通して〜を実行します。
2. 以前同所、尾静脈、または心臓内経路を介してヒト腫瘍細胞を注射したマウスからマウスの血液を50μlの最小値を収集します。 （シリアルCTC分析用）伏在静脈から、または（端末のCTC分析用）心臓穿刺により血液を収集します。針を外し、1ミリリットルのEDTAマイクロテイ採血管に血液を分注する。血液の凝固を防ぐために、反転やそっとフリックチューブで混ぜる。血液はCytoChexセルラ防腐剤、等量の添加直後に処理されるか、最大48時間室温で保存することができる。

2。 CTCの濃縮

1. 冷蔵庫からCSSの試薬を除去し、それらを使用する前に室温に加温することができます。
2. 12ミリメートル×75ミリメートル、フローサイトメトリーチューブに全血50μlのと同等のものを転送します。チューブの両側に残っているいずれかの血液を下洗い、各サンプルに希釈緩衝液500μlを追加します。必要に応じて、短い遠心スピン残りの血液を採取するために使用することができる。
3. 優しく抗EpCAM磁性流体を渦を直接試料にピペットの先端を配置することによって、各サンプルに25μlを加える。穏やかに混合するキャプチャ強化試薬と渦の25を添加する。 15分間、室温でサンプルをインキュベートする。
4. 磁石へのサンプルチューブをセットし、10分間インキュベートする。サンプルチューブを磁石に残っている間に、慎重に次の磁石にチューブの壁に触れることなく残留液を吸引し、廃棄するようにガラスピペットを使用しています。

3。 CTC染色

1. 核酸染料、染色試薬、抗マウスCD45-APC、抗ヒトHLA-アレクサフルーア488、および透過100μlを5.0μLの1.5μlを50μlを50μlの磁石を再懸濁からサンプルチューブを取り外す試薬。複数の試料については、これらの試薬は、予め混合してもよいし、混合物の206.5μlを各チューブに添加してもよい。穏やかに混合する渦暗所で室温で20分間インキュベートする。
2. 希釈緩衝液500μlを加え、ボルテックス優しく、磁石への場所のサンプルチューブを、そして10分間インキュベートする。サンプルチューブを磁石に残っている間に、慎重に次の磁石にチューブの壁に触れることなく残留液を吸引し、廃棄するようにガラスピペットを使用しています。磁石からサンプルチューブを取り外し、希釈緩衝液350μlに懸濁します。渦を静かに混合する。

4。磁気デバイスのロード

1. ゲルローディングチップを使用して、慎重に磁気デバイス内のカートリッジにサンプルチューブからボリューム全体を転送します。カートリッジの下部に起動し、サンプルが分配されるように、ゆっくりと先端を引き出す。
2. サンプル全体が転送されると、緩く磁気デバイスカートリッジにキャップをし、切開の説明に従って、カートリッジの端に貼り付けられている任意の泡を解放するために手や実験台を用いた磁気デバイスをタップしますN CSSを使用して患者血液サンプルから標準のCTC列挙の3.1。
3. ベベルとカートリッジの縁との間に、それらを捕捉することによって、滅菌22 G針を使用して、任意の気泡をポップします。すべての気泡が除去されていると、しっかりと、カートリッジにキャップを平らな磁気デバイスを置き、少なくとも10分間、暗所でインキュベートする。サンプルは準備の24時間以内にスキャンする必要があります。

5。分析計測器で手動で分離されたサンプルのスキャン

1. 、分析装置の電源を入れ、ランプを初期化して、CSSのプロトコルを使用して患者血液サンプルから標準のCTC列挙の3.2節で説明したように、品質管理とシステムの検証を行う。
2. 分析装置にサンプルをロードし、[セットアップ ] タブを選択します。 フォーマットのサンプルボタンをクリックすることにより、磁気デバイスのデータボタン上の既存のデータをクリアします。 FITCチャンネルAを使用可能にCSSを使用してユーザー定義のマーカーについて、CTCの特徴付けのセクション2.2で説明したようにND 1.0秒の露光時間を設定します。
3. 患者の試験タブをクリックして入力するサンプル情報を編集]を選択します。 試験プロトコルとしてキットIDとCellSearch CTCとCTCの研究を選択します。入力アスタリスクとして示されているように、残りの必要な情報。サンプル情報を保存し、[開始]をクリックします。

結果

標準CTC列挙アッセイ

CSSの感度および特異性は、文献に記載されている。しかし、同等のCTCの回収を検証するために、スパイク（1,000たLNCaPヒト前立腺癌細胞）および健常ドナー由来のスパイクしていないヒトの血液サンプルは、標準的なCSSCTCプロトコルを使用して、CSSで処理した。予想されるように、スパイクしていないサンプルは、0.00±0.00％CTCの自由だった、とCTCの回収は、添加サンプル（図1A）のために86.9±4.71パーセントであることが実証された。スパイクサンプルから得られたCSSのギャラリー画像が最適な品質のものであり、CTCのは、非のCTCとの鑑別が容易であった。癌患者から得られた試料を処理する際しかしながら、CTCの同定は、多くの細胞のサイズが小さく現れると非CTCを（図1B）から容易に区別未満であると、わずかにより困難である。また、イベントの患者サンプルをレビュー6カテゴリが識別する、だった一般的にレビュー（図1C）との間に矛盾項目だったエド。これらの6...

ディスカッション

2004年には、CSSが導入されて以来、多くの新しいCTC技術の開発にもかかわらず、この技術は、現在も市場で唯一の臨床的に承認の技術であるため、それは、CTCの検出および計数のための現在のゴールドスタンダードと考えられている。この原稿は、CSSが厳格な品質管理基準を有しているが、それが解釈バイアスの対象とし、患者サンプル中のCTC識別が添加サンプルの身分と大きく異なっていることができることを実証しました。一般的に矛盾した項目の6つのカテゴリーは、CTCの誤分類が発生する可能性がありますが同定された。これらの矛盾の項目は、本機で処理された各患者の試料に複数のレビューの必要性を強調している。また、CTCのを得られた患者に対してスパイクで観察された差異は、スパイクと患者の両方のサンプルで検証する、新しいCTCの技術の必要性があることを実証している。また、これらの新技術は、aがbなければならないEスパイクサンプルからの効率的なCTCキャプチャのみ必ずしも患者サンプル中のCTC捕獲効率を反映していないとしても、スパイクと患者サンプルの分割サンプルテストを使用して、ゴールドスタンダードのCSSに比べて。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
0.5 M EDTA
抗ヒト CD44-FITC	BD ファーミゲン 555478
抗ヒト CD44-PE	BD ファーミゲン	555479
抗ヒト HLA-Alexa Fluor 488	BioLegend	311415
抗マウス CD45-APC	eBioscience	17-0451-82
結合一次抗体希釈剤	ライカ	AR9352
CellSave Preservative Tubes	Veridex	952820 (20 pack) 79100005 (100 pack)
CellSearch CTC Control Kit	Veridex	7900003
CellSearch CXC Control Kit	Veridex	7900018RUO
CellSearch CXC Kit	Veridex	7900017RUO
Instrument Buffer	Veridex	7901003
Streck Cell Preservative (aka CytoChex)	Streck	213350
1 ml シリンジ
10 ml 血清ピペット
1,000 µlピペット
1,000µl ピペットチップ
12 mm x 75 mm フローチューブ
200 & マイクロ;l ゲルローディングチップ
200 & マイクロ;l ピペット
22 G 針
5 3/4 in 使い捨てパスツールピペット	VWR	14672-200
5 ml 血清ピペット
自動ピペット
毛細血管採血管 (EDTA)	BD Microtainer	365974
CellSearch Analyzer II	Veridex	9555	マグネストと検証軟骨を含む
CellSearch AutoPrep System	Veridex	9541
Centrifuge
MagCellect Magnet	R&Dシステム	ズMAG997
小型ラテックス電球	VWR82024-550
ボルテックス

CellSearch CTC Kit Veridex 7900001