方法論記事

オリゴデンドロサイトダイナミクスと髄鞘形成を研究するための器官型スライス培養

DOI：

10.3791/51835

⸱

2014年8月25日

 ,  ,  , 
1Department of Physiology and Neurobiology, University of Connecticut, 2Stem Cell Institute, University of Connecticut, 3Department of Neurology, Yale University School of Medicine

この記事について

サマリー

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

前脳と小脳のスライス培養システムを使用してNG2細胞とオリゴデンドロサイトを研究する技術が説明されています。 この方法により、オリゴデンドロサイト系統内の細胞の増殖と分化のダイナミクスを調べることができ、組織の細胞構造を維持しながら細胞外環境を容易に操作できます。

要約

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

NG2を発現する細胞（polydendrocytes、オリゴデンドロサイト前駆細胞）は、中枢神経系における第四の主要なグリア細胞集団である。胚および生後発育の間、彼らは積極的に増殖し、ミエリンオリゴデンドロサイトを生成します。これらの細胞は、一般的に、一次解離し文化、ニューロン共培養において、および固定された組織で研究されてきた。新たに利用可能なトランスジェニックマウス系統は、培養系をスライス使用すると、前脳および小脳の両方の灰白質と白質領域においてオリゴデンドロサイト系譜細胞の増殖および分化を調査するために使用することができる。スライス培養は、生後初期のマウスから調製され、最大1ヶ月間培養物中で維持される。これらのスライスは、細胞の挙動および相互作用を調査するために、培養期間にわたって複数回撮像することができる。この方法は、NG2細胞分裂の可視化との詳細な分析を可能にしながら、オリゴデンドロサイト分化を導くステップ地域に依存可能にするカミカゼNG2細胞とオリゴデンドロサイトの機能異質。これは、密接にインビボで見出さことに似ている細胞環境において経時的にこれらの細胞に影響を与える内因性および外因性のシグナルを調査するために使用することができる強力な技術である。

概要

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

4 -中枢神経系のOrganoytpicスライス培養はsemiintactシステム1において、ニューロンおよびグリア細胞生物学を研究するために極めて有用であることが証明されている。 9 -これらの培養物を採用し、そのような細胞外環境の操作を繰り返し、長期生細胞イメージングのための容易なアクセスおよび電気生理学的記録5と、一次解離細胞培養の多くの利点を保持することは比較的簡単である。また、スライス培養は、3次元組織細胞構築、地域の神経接続を維持し、ほとんどの主要な細胞型がシステムに存在している。これらの特性は、これらの培養ユニークで便利なシステムは、セルラーと環境の相互作用を持つ単一細胞の挙動や生理学を調査することにします。

NG2細胞は増殖およびmを生成し続ける、哺乳動物の中枢神経系におけるグリア細胞の集団である胚および生後発育10の間にオリゴデンドロサイトをyelinating。それらは、広範囲に解離した初代細胞培養物において研究されており、蛍光タンパク質のNG2細胞特異的発現を有するトランスジェニックマウス系統の最近の開発は、急性スライス標本におけるインビボでの運命マッピングおよび電気生理学的記録に容易になった。でも、これらの研究で、少しはNG2細胞の増殖およびオリゴデンドロサイト分化の時間的なダイナミクスについてはほとんど知られていない。解離した細胞培養が広く薬理学的および遺伝的操作の相対的機能のために使用されるが、それは細胞の微小環境のコンテキストを維持することが望ましい場合に特に異なる脳領域におけるこれらの細胞の機能的な違いを問い合わせるには適していない。スライス培養は、細胞の薬理学的操作に適しているとオリゴデンドロサイトミエリン形成11,12を調査するために使用されている単純な代替物を提供する（LPC）をリゾレシチンまたは抗体誘発性脱髄13,14、および薬理学的治療15を介して再ミエリンの誘導後ウラル応答。

前脳および小脳の両方から採取した器官型スライス培養におけるNG2細胞増殖およびオリゴデンドロサイト分化の分析をライブイメージングし、固定組織（または後固定）を調査し、実行するための方法が記載されている。これは、分割後に単16 NG2細胞の細胞運命を研究するために、成長因子誘導されるNG2細胞増殖の17地域および年齢依存性の違いを発見するために使用できる強力な方法である。この比較的単純な技術はさらに、これらのグリア細胞の生理学および神経活動またはミエリン損傷への応答を調節する細胞内因性および/または環境のメカニズムを調査する、広くアクセス可能です。

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

プロトコル

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

注：すべての動物の手順は、ガイドラインに従っているとコネチカット大学の施設内動物管理使用委員会（IACUC）によって承認されている。

注：それぞれ用いたYFPレポーター20（JAX＃006148）ライン：これらの実験のために、構成NG2cre 18（JAX番号008533）および誘導性NG2creER 16（JAX番号008538）トランスジェニックマウスは、Z / EG 19（JAX＃003920）またはgtRosa26交配画像NG2細胞とその子孫。画像成熟したオリゴデンドロサイトには、21を使用したトランスジェニックマウスをPLPDsRed。一貫性の生存のために、スライスは、アップ前脳と小脳の両方から生後10日目にマウスから単離することができる。

1スライスの準備

  1. 培養フード中で、6ウェルプレート中で組織培養インサートを配置し、1mlのスライス培養培地（試薬セクションのレシピ）を加える。解剖の前に、5％CO 2を少なくとも2時間、37℃で細胞培養インキュベーターでプレートを置きます。
  2. 70％エタノールですべてのツールと​​組織チョッパーを滅菌する。
  3. 解剖の前の開始に少なくとも15分間、氷上で95％O 2、5％CO 2をバブル解剖バッファー（試薬セクションのレシピ）。
  4. 承認された動物プロトコールに従って5〜10分間氷上に置くことにより仔マウスを麻酔。マウスは尾とつま先のピンチに応答しないことを確認することにより麻酔の適切な深さを確かめる。
  5. 動物プロトコールに従って鋭いハサミを使って動物を首を切る。すぐに滅菌ツールを使用して、第一横切開に続いて矢状カットを行うことで、前脳および小脳の上の頭蓋骨を削除します。慎重に側に組織を圧延することにより、脳と小脳の腹側表面から脳神経をカットします。
  6. 氷のように冷たい酸素添加解剖バッファーを含む滅菌35mmの皿に組織を置きます。
  7. カミソリの刃を使用して、小脳および前脳を切断。その後半ば矢状カットのthroを作る前脳および小脳ぐふ、半球を分離する。
  8. 手動の組織チョッパーで前脳と小脳の300μmの厚さの冠状および矢状断面をカットします。注：手動の組織チョッパーをアガロース包埋を必要とせずに培養インキュベーション解剖からの迅速な処理を可能にする。以前に説明したように9ビブラトームを使用することもできる。
  9. 氷の上に新鮮に泡立て冷たい解剖バッファーに分けスライスを転送します。
  10. 各部を分離し、培養インサートで6ウェル皿をプレインキュベートするためにそれらを転送するために、小さな解剖や計量へらを使用してください。
  11. 使い捨てトランスファーピペットまたはP 200ピペットチップを用いて培養インサートの表面から余分な解剖バッファを削除します。 2〜3前脳または三小脳スライスが1つの培養インサート上に配置することができる。
    注：前脳文化と一貫性のある結果のためには、脳梁の前三分の一にまたがるスライスを取ることが理想的である（ 図1A）は、同じスライス内の両方の灰白質と白質の領域を研究するためである。各動物は、通常6前脳スライスと6小脳スライスが得られます。
  12. インキュベーター中で6ウェルプレートを置き、スライス固定されるまで一日おきに、次にスライス標本後にスライス培地1ml 1日とスライス培地を交換し。
  13. 実験によっては、培養中の5-7日後にスライスを使用。最初の数日後に透明になるだけのスライスを使用し、不均一な不透明領域を有するものを捨てる​​。注：スライス内の不透明な領域は、目で表示され、位相差の下で暗い細胞の塊として表示されます。技術が習得された後、死んで不透明なスライスはスライス未満の1〜5％で、めったに起こらない。

2 NG2細胞分裂のタイムラプスイメージングおよびオリゴデンドロサイト分化

注：私たちはNG2creを使用NG2細胞の増殖および分化のタイムラプスイメージングを実行するには：ZEGマウス16NG2細胞およびそれらの子孫（ 図1C-E）でEGFPを発現する。この行のレポーター発現は、直ちに少なくとも4週間の期間にセクショニングの後のスライスでGFP +細胞のライブ画像を得るために十分に堅牢である。鮮明な画像を、培養の最初の3〜5日間で発生したスライスの初期間伐期間後に得られる。

  1. 実験の間、37℃で細胞培養インキュベーター内のスライスを維持し、時間の短い期間だけ除去（スライスあたり15分未満）、6ウェルプレートに蓋をしながら撮影を維持する。
  2. デジタルカメラを備えた倒立蛍光顕微鏡を用いて、10×対物レンズを用いて第1の時点の画像を取り込む。注記：ファーストタイムポイントは、実験によって異なりますし、後の切片を調製した日またはどの時点であってもよい。
  3. スライスの両方グレーと白質領域に時点1での複数の領域から画像をキャプチャします。目に注意してくださいE領域は、スライス内の特定のランドマークによって、後続のイメージングセッションのために使用することができ、回路図に画像の位置をマッピングすることによって画像化した。有用なランドマークは白質路のスライスおよび/または方向のエッジを含むことができる。画像各時点における各スライス上の四から八箇所。
  4. NG2細胞の分裂とオリゴデンドロサイト分化を調べる場合には、理想的には上の5-7日、4〜6時間の間隔で次の画像をキャプチャします。
  5. すべての地域の最終的な画像をキャプチャし、すぐにスライスを修正します。その後のスライスの上に別の1ミリリットルを追加し、カルチャーインサートの底まで（0.1M L-リジン0.01Mのメタ過ヨウ素酸ナトリウムを用いて4％PFA）固定液1ミリリットルを加える。それが膜から切り離すことができますように、スライスの上に直接固定液を噴出しないように注意してください。 30分間、組織を固定し、4章で説明したように発達段階特異的マーカーを用いた免疫組織化学を進める。
  6. 0.2 Mリン酸ナトリウム緩衝液3×10 mを有する洗浄スライスインチ1-3日間、0.2 Mリン酸ナトリウム緩衝液中に4℃で必要に応じて、店舗のスライス24時間以内に染色を行う理想的に免疫染色が、前に。 4章で後述のように、オリゴデンドロサイト（ 図2D-F）に分化した細胞の割合を決定するために、免疫組織化学を続行します。

スライス培養で誘導レポータートランスジェニックマウスを使用したNG2細胞子孫の3運命のマッピング

注：培養物中の特定の時点からNG2細胞の運命を追跡するために、誘導性NG2creER：YFPトランスジェニックマウスを使用することができる。

  1. 培養培地に、エタノールに溶解した100nMの4OHTを追加することによって、Cre組換えおよびレポーター発現を誘導する。注：レポーター陽性細胞は〜20〜25％YFP + NG2 + / NG2 +細胞の誘導効率で1〜2日以内に表示されますと、この時点ですべてのNG2細胞段階における細胞（ 図2A〜C）になります
  2. スライスを修正し、洗う異なる時点での、さまざまな操作をした後に（セクション2.5および2.6に記載されている）。

4。スライス免疫組織化学

  1. メスを用いて、インサートの外に取り付けられたスライスを有する膜をカット。
  2. 膜をピックアップする際のスライスの組成を破壊しないように注意しながら、ピンセットのセットを用いてリン酸緩衝生理食塩水（PBS）を含有する24ウェルプレートの各ウェルにスライスを転送する。
  3. 1時間PBS中の5％正常ヤギ血清（NGS）および0.1％トリトン-X100を含有するブロッキング溶液で24ウェルプレートにスライスを転送する。
  4. 4℃で、PBS中の5％NGS中の一次抗体でO / N内のスライスをインキュベートする。 NG2細胞段階における細胞を同定するために、NG2およびPDGFRαに対する抗体を使用しています。分化したオリゴデンドロサイトを識別するための、大腸腺腫性ポリポーシス抗原に対する抗体を使用する（APC;クローンCC1）を。
  5. PBS 3×15分で二日目の洗浄スライス上で、その後二次antiboでインキュベート室温で1時間、PBS中の5％NGSで死ぬ。 PBS 3×15分でスライスを洗浄し、スライド上にマウントします。膜は客観的かつ組織との間にされないようにスライドが直面しているスライスアップと膜とのマウント。

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

結果

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ZEG、NG2creER：YFP及びPLPDsRedトランスジェニックマウス系統の代表的なデータの例は、P8 NG2creの前脳および小脳の両方からスライス培養を用いて得られたその下に示す。 NG2細胞は、前脳および小脳切片における日間（ 図1B-D、ビデオ1）の上に画像化することができ、これらの細胞の表現型は、固定およびNG2およびCC1抗体による免疫染色（ 図1E）後に決定することができる。リアルタイム画像に加えて、細胞増殖はまた、Ki67に（ 図1F）のような細胞増殖マーカーについて免疫組織化学的染色を用いて評価することができる。これらのデータは、個別のセル単位でNG2の細胞分裂後のオリゴデンドロサイト分化の時間的な動力学の詳細な分析を可能にする。 YFPマウス（ 図2）：NG2細胞の運命マッピングはNG2creERで4OHTでスライスにおけるCre組換えの誘導後に行うことができる。 YFPレポーター発現NG2 +の細胞は、foをした二日間の培養培地（ 図2A）...

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

ディスカッション

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

中枢神経系の髄鞘形成は、効率的な神経細胞のコミュニケーションと軸索の生存22に不可欠である。 25 -ほとんどの脳領域16,23における居住人口を維持しながら、NG2細胞は、継続的に大人になってミエリンオリゴデンドロサイトを生成します。これらの細胞の分化を調節するいくつかの遺伝的および分子メカニズムを説明してきたが、多くは発見されていない。器官型スライス培養は、これらの解剖学的領域を維持することの彼らのユニークな特性のためのメカニズム、細胞外環境の容易な操作、堅牢髄鞘、すべての主要な細胞型の存在を調査するための便利なツールです。これらの特性は、NG2細胞、オリゴデンドロサイトおよび軸索11,26間の短期および長期的な相互作用の研究を促進する。さらに、細胞移植は、実行するのが比較的容易であり、領域依存dは調査するために使用することができ細胞の挙動17にifferences。さらに、薬理学的治療は、正常17,27,28にNG2細胞の増殖および/ ​​または分化に影響する分子機構および脱髄培養物15,2...

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

開示事項

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

著者らは、競合する金銭的利益はないと宣言している

謝辞

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

この研究は、全米多発性硬化症協会（RG4179からA.N.へ)、国立衛生研究所（NIH R01NS073425およびR01NS074870からA.N.へ）および国立科学財団）からの助成金によって資金提供されました。 Frank Kirchhoff博士(ザールラント大学、ホンブルク、ドイツ)にPLPDsRedトランスジェニックマウスを提供していただいたことに感謝します。トランスジェニックマウスコロニーの維持に協力してくれたYoufen Sunに感謝します。

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
Slice Culture Medium
Minimum Essential MediumInvitrogen1109050%
Hank'S Balanced Salt SolutionInvitrogen1417525%
HEPESSigma-AldrichH-403425mM
L-GlutamineInvitrogen250301mM
インスリンSigma-AldrichI66341mg/L
アスコルビン酸Sigma-AldrichA-02780.4mM
馬血清HycloneSH30074.0325%
NaOHでpH 7.22に滴定し、ボトルトップフィルターでフィルターし、摂氏
Dissection Buffer
NaCl Sigma-AldrichS3014124mM
KClSigma-AldrichP54053.004mM
KH2PO4Sigma-AldrichP56551.25mM
MgSO4 (無水)Sigma-AldrichM75064.004mM
CaCl2 2H2OSigma-AldrichC79022mM
NaHCO3Sigma-AldrichS576126mM
D-(+)-グルコースSigma-AldrichG702110mM
アスコルビン酸Sigma-AldrichA-02782.0mM
アデノシンSigma-AldrichA40360.075mM
Filter ボトルトップフィルター付きで、摂氏4度で保存し、95%O25%CO2で酸素化します
Other Reagents and Supplies
4-hydroxy tamoxifen (4OHT)Sigma-AldrichH7904100nM
パラホルムアルデヒド (PFA)EM Sciences192004%
L-リジンSigma-AldrichL-60270.1M
メタ過ヨウ素酸ナトリウムSigma-AldrichS-18780.01M
ウサギ抗NG2抗体Chemicon (Millipore)AB53201:500
Mouse anti CC1 antibodyCalbiochem (Millipore)OP801:200
マウス抗Ki67抗体Vision BiosystemsNCL-Ki67-MM11:300
マウス抗NeuN抗体Chemicon (Millipore)MAB3771:500
種特異的二次抗体Jackson Immunoresearch
Normal Goat Serum (NGS)5%
Triton X-1000.10%
封入剤DAPIVector LabsH-1200
ミリセル培養メンブレンインサート付き 0.45μm 細孔径フィッシャー・サイエンティフィックPICM03050
ボトルトップフィルターフィッシャー・サイエンティフィック09-740-25E
エタノール
95% O2 5% CO2 ガスミックス
リン酸緩衝生理食塩水 (PBS)
滅菌 6 ウェルプレート
解剖(海馬)または計量ヘ
手動または自動ティッシュチョッパー
カミソリの刃
使い捨てトランスファーピペット
35mmおよび60mmの滅菌ペトリ皿
立体顕微鏡
逆位相顕微鏡
層流、フード
組織培養インキュベーター
倒立、蛍光、マイクロコープ
4度で保存ラ、、、

参考文献

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Stoppini, L., Buchs, P. A., Muller, D. A simple method for organotypic cultures of nervous tissue. Journal of Neuroscience Methods. 37 (2), (1991).
  2. Gogolla, N., Galimberti, I., DePaola, V., Caroni, P. Preparation of organotypic hippocampal slice cultures for long-term live imaging. Nature Protocols. 1 (3), 1165-1171 (2006).
  3. Gähwiler, B. H., Capogna, M., Debanne, D., McKinney, R. A., Thompson, S. M. Organotypic slice cultures: a technique has come of age. Trends in Neurosciences. 20 (10), 471-477 (1997).
  4. Yamamoto, N., Kurotani, T., Toyama, K. Neural connections between the lateral geniculate nucleus and visual cortex in vitro. Science. 245 (4914), 192-194 (1989).
  5. Bahr, B. A., Kessler, M., et al. Stable maintenance of glutamate receptors and other synaptic components in long-term hippocampal slices. Hippocampus. 5 (5), 425-439 (1995).
  6. Noctor, S. C., Flint, A. C., Weissman, T. A., Dammerman, R. S., Kriegstein, A. R. Neurons derived from radial glial cells establish radial units in neocortex. Nature. 409 (6821), 714-720 (2001).
  7. Noctor, S. C., Martínez-Cerdeño, V., Ivic, L., Kriegstein, A. R. Cortical neurons arise in symmetric and asymmetric division zones and migrate through specific phases. Nature Neuroscience. 7 (2), (2004).
  8. Kapfhammer, J. P., Gugger, O. S. The analysis of purkinje cell dendritic morphology in organotypic slice cultures. Journal of Visualized Experiments JoVE. (61), (2012).
  9. Elias, L., Kriegstein, A. Organotypic slice culture of E18 rat brains. Journal of Visualized Experiments JoVE. (6), e235(2007).
  10. Nishiyama, A., Komitova, M., Suzuki, R., Zhu, X. Polydendrocytes (NG2 cells): multifunctional cells with lineage plasticity. Nature Reviews Neuroscience. 10 (1), 9-22 (2009).
  11. Haber, M., Vautrin, S., Fry, E. J., Murai, K. K. Subtype-specific oligodendrocyte dynamics in organotypic culture. Glia. 57 (9), 1000-1013 (2009).
  12. Bin, J. M., Leong, S. Y., Bull, S. -J., Antel, J. P., Kennedy, T. E. Oligodendrocyte precursor cell transplantation into organotypic cerebellar shiverer slices: a model to study myelination and myelin maintenance. PloS one. 7 (7), (2012).
  13. Birgbauer, E., Rao, T. S., Webb, M. Lysolecithin induces demyelination in vitro in a cerebellar slice culture system. Journal of Neuroscience Research. 78 (2), 157-166 (2004).
  14. Harrer, M. D., von Budingen, H. C., et al. Live imaging of remyelination after antibody-mediated demyelination in an ex model for immune mediated CNS damage. Experimental Neurology. 216 (2), 431-438 (2009).
  15. Fancy, S. P. J., Harrington, E. P., et al. Axin2 as regulatory and therapeutic target in newborn brain injury and remyelination. Nature Neuroscience. 14 (8), 1009-1016 (2011).
  16. Zhu, X., Hill, R. A., Dietrich, D., Komitova, M., Suzuki, R., Nishiyama, A. Age-dependent fate and lineage restriction of single NG2 cells. Development. 138 (4), 745-753 (2011).
  17. Hill, R. A., Patel, K. D., Medved, J., Reiss, A. M., Nishiyama, A. NG2 Cells in White Matter But Not Gray Matter Proliferate in Response to PDGF. Journal of Neuroscience. 33 (36), 14558-14566 (2013).
  18. Zhu, X., Bergles, D. E., Nishiyama, A. NG2 cells generate both oligodendrocytes and gray matter astrocytes. Development. 135 (1), 145-157 (2008).
  19. Novak, A., Guo, C., Yang, W., Nagy, A., Lobe, C. G. Z/EG, a double reporter mouse line that expresses enhanced green fluorescent protein upon Cre-mediated excision. Genesis. 28 (3-4), 147-155 (2000).
  20. Soriano, P. Generalized lacZ expression with the ROSA26 Cre reporter strain. Nature Genetics. 21 (1), 70-71 (1999).
  21. Hirrlinger, P. G., Scheller, A., et al. Expression of reef coral fluorescent proteins in the central nervous system of transgenic mice. Molecular and Cellular Neuroscience. 30 (3), 291-303 (2005).
  22. Nave, K. -A. Myelination and support of axonal integrity by glia. Nature. 468 (7321), 244-252 (2010).
  23. Rivers, L. E., Young, K. M., et al. PDGFRA/NG2 glia generate myelinating oligodendrocytes and piriform projection neurons in adult mice. Nature Neuroscience. 11 (12), 1392-1401 (2008).
  24. Dimou, L., Simon, C., Kirchhoff, F., Takebayashi, H., Gotz, M. Progeny of Olig2-expressing progenitors in the gray and white matter of the adult mouse cerebral cortex. The Journal of Neuroscience. 28 (41), 10434-10442 (2008).
  25. Kang, S. H., Fukaya, M., Yang, J. K., Rothstein, J. D., Bergles, D. E. NG2+ CNS glial progenitors remain committed to the oligodendrocyte lineage in postnatal life and following neurodegeneration. Neuron. 68 (4), 668-681 (2010).
  26. Ioannidou, K., Anderson, K. I., Strachan, D., Edgar, J. M., Barnett, S. C. Time-lapse imaging of the dynamics of CNS glial-axonal interactions in vitro and ex vivo. PloS one. 7 (1), e30775(2012).
  27. Ghoumari, A. M., Baulieu, E. E., Schumacher, M. Progesterone increases oligodendroglial cell proliferation in rat cerebellar slice cultures. Neuroscience. 135 (1), 47-58 (2005).
  28. Azim, K., Butt, A. M. GSK3β negatively regulates oligodendrocyte differentiation and myelination in vivo. Glia. 59 (4), 540-553 (2011).
  29. Hussain, R., El-Etr, M., et al. Progesterone and nestorone facilitate axon remyelination: a role for progesterone receptors. Endocrinology. 152 (10), 3820-3831 (2011).
  30. Pampaloni, F., Reynaud, E. G., Stelzer, E. H. K. The third dimension bridges the gap between cell culture and live tissue. Nature Reviews. Molecular Cell Biology. 8 (10), 839-845 (2007).
  31. Lubetzki, C., Demerens, C., et al. Even in culture, oligodendrocytes myelinate solely axons. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 90 (14), 6820-6824 (1993).
  32. Demerens, C., Stankoff, B., et al. Induction of myelination in the central nervous system by electrical activity. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93 (18), 9887-9892 (1996).
  33. Wood, P. M., Bunge, R. P. Evidence that sensory axons are mitogenic for Schwann cells. Nature. 256 (5519), 662-664 (1975).
  34. Stevens, B., Tanner, S., Fields, R. D. Control of myelination by specific patterns of neural impulses. The Journal of Neuroscience. 18 (22), 9303-9311 (1998).
  35. Stevens, B., Porta, S., Haak, L. L., Gallo, V., Fields, R. D. Adenosine: a neuron-glial transmitter promoting myelination in the CNS in response to action potentials. Neuron. 36 (5), 855-868 (2002).
  36. Wake, H., Lee, P. R., Fields, R. D. Control of local protein synthesis and initial events in myelination by action potentials. Science. 333 (6049), New York, N.Y 1647-1651 (2011).
  37. Rosenberg, S. S., Kelland, E. E., Tokar, E., De la Torre, A. R., Chan, J. R. The geometric and spatial constraints of the microenvironment induce oligodendrocyte differentiation. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (38), 14662-14667 (2008).

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

再版と許可

このJoVE記事のテキストまたは図の再利用許可をリクエスト

許可をリクエスト

タグ

NG2

関連記事