ウランの酸化銅ナノ粒子による微量元素の除去その場での回復ブリード水と細胞生存率への影響

サマリー

Production bleed water(PBW)を酸化銅ナノ粒子(CuO-NPs)で処理し、培養ヒト細胞の細胞毒性を評価しました。このプロトコールの目標は、CuO-NP処理による毒性の変化を評価するために、天然の環境サンプルを細胞培養フォーマットに統合することでした。

要約

その場で回収 （ISR） では 、米国におけるウラン抽出の主な方法です。 ISRの間に、ウランが鉱体から浸出され、イオン交換により抽出しました。得られた生産ブリード水（PBW）は、ヒ素や他の重金属などの汚染物質が含まれています。アクティブISRウラン施設からPBWのサンプルを第二銅酸化物ナノ粒子（CuOを、NPS）で処理しました。 PBWのCuOを-NP処置はヒ素、セレン、ウラン、バナジウムを含む、優先汚染物質を減少させました。 PBWは、細胞増殖培地の液成分として使用し、生存率の変化はMTT（3-（4,5-ジメチルチアゾール-2-イル）-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロミド）によって決定された処理された未処理及びCuO-NPアッセイヒト胎児腎臓（HEK 293）およびヒト肝細胞癌（Hep細胞のG2）細胞です。のCuO-NP処理が改善されたHEKおよびHEP細胞生存率と関連していました。この方法の制限は、増殖培地成分によって、およびオスモル中PBWの希釈を含みますality調整だけでなく、必要に応じてpH調整。この方法は、希釈による効果とが伝統的にわずかに酸性であるPBWのpHの変化へのより広い文脈に限定されています。この方法は、より中立的な海域でのCuO-NPの治療を評価する広範な用途を持つことができます。

概要

米国電気供給の約20％は核エネルギーによって提供され、エネルギーの独立性を高めるために国のインセンティブに基づいている、米国の原子力容量が¹増加すると予想されます。核エネルギーの世界的な成長は、米国外で発生した²成長の大部分で、継続することが予想されます。 2013年の時点で、米国のウランの83％は輸入されたが、埋蔵量の952544トン、米国^3,4内に存在します。 2013年7新しい施設アプリケーションとワイオミング州、ニューメキシコ州、ネブラスカ⁵との間の14の再起動/拡張アプリケーションがありました。米国では、ウランは主に、その場の回復に （ISR）を介して抽出された^6を処理します。 ISRは、より少ない土地の破壊を引き起こし、環境汚染物質^7を解放することができテーリング杭の作成 ​​が回避されます。 ISRは、ウランを介して浸出液から抽出された後、地下の鉱体からウランを浸出する水ベー​​スの酸化·ソリューションを使用していますイオン交換法^8。鉱体における負の水分バランスを維持するために、生産ブリード水（PBW）と呼ばれる浸出水の一部は、抜き取られます。 PBWの部分は、逆浸透（RO）を使用して、汚染除去およびマイニングプロセスに再導入されたが、毒性汚染物質が表面のための状態の規制機関によって決定される許容可能なレベルまで低減することができればPBWはまた、有益な工業または農業用途を有することができるし、地下水^9。現在、ほとんどのISRウラン施設はPBWから汚染物質を除去するためにROを使用しています。しかし、RO処理は、エネルギー集約的であり、調整された処分を必要とする有害廃棄物の食塩水を生成します。

多くの水の浄化方法は吸着剤、膜およびイオン交換を含む、存在します。これらのうち、吸着は、最も一般的に使用され、ナノ粒子合成における最近の発展は、吸着剤ベースの水の汚染除去の機能^10の処理を強化しました。銅オキシ以前に広くウランISR PBWに研究されていなかったデ·ナノ粒子（CuOを-NPS）が、地下水からの汚染物除去の最近の研究では、CuOを-のNPは、前または後の水処理工程を必要としないなどのユニークな特性を、（持っていることが判明しました例えば 、pHまたは酸化還元電位）を調整し、異なるpH、塩濃度、または競合イオン^）11において、 例えば、（異なる水組成物でよく行います。また、CuOを、NPを、容易に再生のCuO-NPは再利用することができ、その後、水酸化ナトリウム（NaOH）を用いて浸出することにより再生されます。天然水からのCuO-NP微量金属フィルタリング機能の詳細は、先に^11-14を公開されています。

水処理のために有用であるが、金属酸化物ナノ粒子は、生物に対して毒性であり得るが、毒性の程度は、ナノ粒子の特性および成分^10,15,16に部分的に依存します。したがって、simultを勉強することが重要ですフィールドアプリケーション前aneous汚染物質除去とナノ粒子の毒性。現在の研究では（ヒ素、セレン、バナジウム及びウランを含む）PBW優先汚染物質を除去するためのCuO-NPの能力を決定し、PBW細胞毒性でのCuO-NPの治療の効果を評価しました。

PBWは、アクティブなISRウラン施設から収集し、優先度の汚染物質の除去にCuOを-NPの治療の有効性を決定するために利用されました。のCuO-NPの治療前後PBW細胞毒性も評価しました。 PBWは、複雑な地質（環境/産業用）の混合物であり、有害物質のための環境健康科学（NIEHS）と機関の研究所＆疾病登録（ASTDR）の両方が混合物を含め、環境に関連する混合物の毒性の研究に重点を置いています彼らは自然や産業環境に存在し、ならびにin vivoでのさらなる試験のための化学物質の優先順位を決定するためにin vitro試験で推進として^17-19。低用量混合物への慢性暴露は、少なくともではない、ほとんどの実験室での研究の短い時間枠内で、明らかな効果を生じないため、慢性の研究は、低用量の混合物のエクスポージャーは、困難です。同様に、化学物質の混合物のインビトロ試験でほとんどが2以上の金属^20,21の定義されたラボ製の混合物に細胞を公開します。これらの研究は、ベースライン情報を提供するが、簡略化された混合物は、混合物成分の全範囲が存在しているネイティブ、環境試料、で発生する可能性があり、複雑な拮抗との相乗的相互作用を複製しません。

本研究の目的は、PBWの代替汚染物除去プロセスを調べるために、培養ヒト細胞を用いた細胞毒性にPBW（のCuO-NP）の治療の効果を評価することでした。結果は、汚染物質を除去するための、より効率的で環境に優しい方法の開発を通じてウラン産業の利益を得ることができます。本研究では、提供します最初の証拠のCuO-NPSがPBWの重点汚染物質の削減は、哺乳動物細胞²²に細胞毒性を減少させます。

プロトコル

すべてのサンプルは、ワイオミング州のウランISR施設のウラン液処理建屋で収集しました。

1.生産ブリード水（PBW）

1. ISRウラン施設から水サンプルの2種類を収集：PBWと浸透（RO）水を逆にします。イオン交換処理後の監視タップからではなく、逆浸透除染の前にPBWを収集します。 PBWは、逆浸透処理によって除染された後、ROのサンプルを収集します。
   注：浸出剤は、それがカラムに回収し、イオン交換のために準備されたウランの液処理建物に複数のウェルのフィールドのパイプラインで輸送されます。イオン交換後の浸出剤の約1~3％が回路から除去され、生産ブリード水（PBW）と呼ばれます。 PBWマイニングプロセスで再使用されるか、またはRO濾過して脱塩/除染されます。
2. 高密度ポリエチレンゼロヘッドスペースと（HDPE）ボトル応じに水サンプルを収集環境品質のワイオミング州省^{（WYDEQ）23}のサンプル収集と分析のための標準的な操作手順に。
3. クールなそれらを保つためにオンサイト氷上および輸送試料温度およびpHを測定します。
4. 4℃で保存PBW。以下のプロトコルに指示されるように、メディアの準備中に添加される濃縮されたイーグル最小必須培地（EMEM-10X）後までクールPBWソリューションをしてください。
   注：PBWがフリーズすることができたり、室温に加温した場合に析出する酸化ソリューションです。希釈した後PBW溶液が十分に加熱されたとき、それが細胞に、インキュベーション中にアプリケーションの前に37℃に沈殿しないことを希薄です。

のCuOナノ粒子の調製（CuOを-NPS）

1. 0.2 MのCuCl _{2•2H 2} O 250mlの0.4 Mの水酸化ナトリウム（NaOH）、及び5gのポリエチレングリコール（P 250 mlを含有する純粋なエタノール溶液を合わせ6ミリメートルホウケイ酸ガラス球を備えた丸底フラスコ中のEG）。
2. 修正された電子レンジで溶液を配置し、それが20％の電力（上の6秒間隔、24秒オフ）で10分間、大気圧で還流下で反応させます。
3. ガラス球を残し、その後50mlコニカルチューブにデカントし、室温（20℃）に溶液を冷却します。
4. 遠心分離機デカント30分間、1,000×gで50ミリリットルコニカルチューブ内の溶液、その後は300ミリリットルの熱水（60〜65℃）、エタノール100mlの配列とのCuO-のNPを洗浄し、アセトン100ml。
5. 50mlコニカルチューブ中で室温（20℃）でのCuOを-NPを乾燥させます。
6. 乳鉢に、そのチューブのうちのCuO-NPをこすり。スズ箔でのCuO-のNPをカバーし、残りの液体を除去するためにオーブンで110℃までのCuO-NPを加熱します。 1バッチにCuOを-のNPを組み合わせ及びCuO-NPの重量を量ります。
   注：のCuO-NPの準備とPBWのCuOを-NP処理は水QUALで実施されました生態系の科学と管理、ワイオミング大学の性研究所。のCuO-NP合成はマーティンソンとレディ^（2009）11の手順に従いました。

のCuO-のNPとPBW 3.治療

1. PBW 50mlを、続いて50mlコニカルチューブへのCuO-NPの50mgの（1mg / ml）を加えます。チューブを密封し、250rpmでベンチトップオービタルシェーカーで30分間反応させました。
2. 遠心分離試料管30分間250×gで、その後は、0.45μmのシリンジフィルターを用いて上清を濾過します。遠心分離速度を変化させ、時間のCuO-NPは遠心管中で小型化を保証するために、ナノ粒子に依存することができます。

4.元素分析

1. 次のように元素分析のために未処理（対照）及びCuO-NP処理したPBWのサンプルを準備します。
2. 2.0のpHに微量金属グレードの硝酸でのCuO-NP-処理および未処理PBWのアリコート（40ml）で酸性化します。誘導couplによって陽イオンのための酸性化PBWのアリコートを分析レディ及びロス^（2012）13に記載されるようにプラズマ質量分析（ICP-MS）を編
3. のCuO-NP-処理および未処理PBWのunacidifiedアリコート（20ミリリットル）を準備し、レディとロス^（2012）13に記載されているようにイオンクロマトグラフィー（IC）によりアニオンためunacidifiedアリコートを分析します。
   注：アリコートをララミーWY 82070.は^{13（2012）、IC}とICPMS手順の説明はレディとロスで見つけることができ、農業分析サービスのワイオミング州省で分析しました。

PBWを用いた細胞培養培地の5準備

1. 2コントロール（EMEM-1XとRO +メディア）と8つのPBWテストメディアソリューション生存率研究において（各未処理PBW及びCuO-NP処理されたメディアの4つの濃度）を使用します。次のようにソリューションの概要は以下のとおりです。
   1. EMEM-1X制御のために、L-グルタミンおよび炭酸水素ナトリウムが既に追加でイーグル最小必須培地（EMEM-1X）を購入。ウシ胎児血清（FBSを追加）と製造者の指示に従って、抗生物質。
      NOTE：EMEM-1Xは、細胞増殖のために適切な濃度に希釈し、L-グルタミンおよび重炭酸ナトリウムを含む購入します。 EMEM-1Xは、ウシ胎児血清（FBS）およびペニシリンおよびストレプトマイシンの抗生物質ミックス（50 IU / mlのペニシリンおよび50μg/ mlストレプトマイシン）を追加する必要があります。これは本研究で用いた両方の細胞タイプについて、製造業者の推奨する増殖培地であるため、EMEM-1Xは、制御媒体として使用されます。濃縮EMEM-10Xは、試験溶液を生成するために、施設または未処理またはCuOを-NP処置PBWからRO水で希釈します。濃縮されたEMEM-10X購入したとき、これらはウシ胎児血清（FBS）およびペニシリンおよびストレプトマイシンの抗生物質ミックスに加えて、追加されるように、L-グルタミン、または炭酸水素ナトリウムが含まれていません。
   2. ISR施設から収集RO対照溶液用RO水について。 PBWのテストメディアにのみ100％ROワットを置き換えると同じプロトコルを使用してくださいPBWの代わりにISR施設から小胞体。研究室からの未処理及びCuO-NP処理液の使用ROまたは超純水を希釈します。
   3. 細胞培養培地の成分と混合する前に、4つの試験濃度に未処理のPBWを希釈します。以下の組み合わせで（実験室）からRO未処理PBWを混合することにより、未処理PBWソリューション4つの異なる濃度を準備します。100％（純粋PBW +なしRO水）、75％（PBW + 62.5ミリリットルのRO水187.5ミリリットル）、 50％または25％（PBWのRO水+ 187.5ミリリットルの62.5ミリリットル）（PBWのRO水+ 125ミリリットルの125ミリリットル）。
   4. 細胞培養培地の成分と混合する前に、4つの試験濃度へのCuO-NP処置PBWを希釈します。以下の組み合わせでRO（実験室）を用いたPBW（30分間1 mg / mlのCuOを-NPで前処理）を混合することにより、CuOを-NP処理したPBWソリューション4つの異なる濃度を準備します。100％（純粋CuO- NP処理したPBW +なしRO水）+ 62.5ミリリットルRO水のCuO-NP処理したPBWの75％（187.5ミリリットル）、50％（125のCuO-NP処理したPBW + RO水の125​​ミリリットル）または25％（のCuO-NP処理したPBW + RO水の187.5ミリリットルの62.5ミリリットル）のミリリットル。
2. 100％ROの190ミリリットルと100％、75％、50％以上に濃縮されたEMEM-10Xの25ミリリットルを追加することにより、RO +メディア、未処理PBW +メディア及びCuO-NP処理したPBW +メディア濃度の250ミリリットルを準備ステップ6.1.3と6.1.4で作成された既成の未処理またはCuOを-NP処理したPBW濃度の25％。
3. NaOHまたはHClを用いて7.4に各溶液のpHを調整します。
4. 25ミリリットル（10％）ウシ胎児血清（FBS）、2.5ミリリットルのL-グルタミン、0.55グラムのNaHCO ₃および1.25ミリリットルペン：以下の標準コンポーネントとそれぞれ未処理及びCuO-NP処理したPBWの濃度だけでなく、RO +メディアを補完/連鎖球菌（50 IU / mlのペニシリンおよび50μg/ mlストレプトマイシン）。
5. 未処理PBW +メディアの各濃度の浸透圧を調整し、RO水を追加し、メジャー浸透圧計を使用しては290〜310mOsm / kgのPBW +メディアとRO +メディアのCuO-NPは、処理しました。
6. 使用して各溶液を濾過0.22μmの真空フィルターユニット、および4℃で保存します。
   注：未処理のPBW +メディア濃度56％、44％で、29％及び16.5％及びCuO-NP-で5％の範囲内の最終培地濃度を変化させる、浸透圧を調節するために使用されるRO水の量のわずかな変化に起因し53％、45％、30％および17％でPBW +媒体濃度で処理しました。

6.細胞生存率

注：腎臓および肝臓は、培養ヒト胎児腎臓（HEK293）細胞（HEK）およびヒト肝細胞癌細胞（HepG2）細胞（HEP）の試験方法を採用^24-26、重金属毒性の標的臓器であることを考えます。

1. 2〜3日製造者の指示に従って実験に用いた96ウェルプレートをメッキする前に、HEKとHEP細胞の培養を準備します。
2. 3- [4、5-ジメチルチアゾール-2-イル] -2、5-​​ジフェニルブロミド（MTT）アッセイを用いて細胞生存率を測定します。
   注：MTTアッセイプロトコルはミーから変更されましたrloo ら^{。（2011）27。}
   1. 粉末状でMTTを取得します。 50 mg / mlのストック濃度を補うために、リン酸緩衝生理食塩水（PBS）を追加します。 2時間溶液を撹拌した後、1.5ミリリットル冷凍庫安全チューブに0.45μmのシリンジフィルター、アリコートを使用してフィルタリング。 4℃で光とストアからチューブを保護します。
3. 、トリプシンを使用して培養皿からHEKとHEP細胞を除去し、5分間1,000×gで遠心分離し、トリプシンをデカント。 5mlのPBSを追加し、単一細胞溶液を得るために、細胞を混合します。その後、溶液1ミリリットル当たりの細胞数を得るために、血球計数器に単一細胞溶液20μlを加えます。 5分間1000×gで再び細胞を遠心し、PBSで細胞をリンスするために使用デカント。 500細胞への細胞の濃度を調整するEMEM-1Xの適切な量を追加/ 100μL（100μl/ウェル）。
4. 蒸発を制御するために、200μlのPBSでプレートの周囲の井戸を埋めます。
5. 種子細胞500細胞/ウェル（細胞でメッキされていない）周囲ウェル以外の各ウェルに100μlの添加の密度での。
   注：HEKとHEP細胞のための播種密度は、成長のピークは日4-5の周囲に発生することを可能にする実験的な成長曲線に基づいています。全ての細胞株は、播種密度を推定するための成長曲線を準備します。
6. それらは、細胞密度のベースラインMTTの読み取りを行う前に（プレートの形タイト癒着）を回収することができ、37℃で24時間、細胞をインキュベートします。
7. （周囲を含まない）、最初の列からの播種培地を除去し、1時間、ウェルにMTT（培地中5mg / ml）の100μlを加えることにより、細胞密​​度のベースラインMTT読み取りを実行します。
8. 1時間後、MTTを除去し、生存細胞（20分）によって産生されるMTTホルマザンを溶解するためにジメチルスルホキシド（DMSO）の100μLを加えます。
9. 塩基を得るために570nmでの吸収波長の第1列の光学密度（OD）を読みます。行の読み取り。
   1. すべてのプレートが正しく播種し、細胞がプレートの間に一貫して増加していることを確認するために、ベースラインされた測定値を使用します。次の24時間のインキュベーションの前にテストされているカラムからDMSOを除去。
      注：DMSOをプレートに残っている場合は、一晩、それがメディアボリュームの減少を引き起こし、隣接する列から水分を引きます。
10. 試験溶液を温め（ すなわち 、EMEM-1X、RO、未処理のPBW及びCuO-NP処置PBWメディアソリューション）水浴中で37℃です。
11. メディア、未処理PBW +メディア濃度またはCuOを-NP +（周囲またはベースラインの読み取りに使用された最初の列を含まない）、プレートの残りの部分から播種メディアを取り出して、EMEM-1X100μlで置き換え、RO - 処​​理PBW +メディア濃度（プレート当たり1溶液）。 7日（日2-8）の合計のために彼らの試験濃度や制御ソリューションで細胞をインキュベートします。
    注：総あり10プレート：1 EMEM-1倍、1 RO +メディア、それぞれの未処理PBWの1 +メディア濃度（56％、44％、29％および16.5％）と、それぞれのCuO-NP処理したPBW +メディア濃度（53％、45％の一方のプレート、細胞株あたり1実験あたり30％＆17％）。
12. ベースラインのMTT読み取り、次のそれぞれの日には、それぞれのプレートの次の列から（6.11の下にノートに記載された）対照および試験ソリューションを削除する（ 例えば、2日目試験および対照培地を、ウェルBG行3から削除され、3日目：行を4、ウェルBG 等 ）、上記の手順6.7から6.9に記載されているようにMTTプロトコルを繰り返します。
13. 7日間毎日のプロトコルを繰り返します。各列（6ウェル）のためにOD結果を平均し、7日間の成長曲線を生成するために時間に対して報告しました。
14. のCuO-NP処理したPBW +培地で細胞生存率に対する銅キレート化の効果を評価するには、それぞれのプレートにソリューションを追加する前に、ソリューションを制御し、テストするためにD-ペニシラミンの100μMを追加する以外は、上記と同じ手順に従ってください。データ肛門を行います科学的なグラフ作成ソフトウェアを使用してysis。

7.地球化学モデル

1. 次のWebサイトからのVisual MINTEQバージョン3.0 / 3.1のフリーウェアをダウンロードしてくださいhttp://www2.lwr.kth.se/English/Oursoftware/vminteq/ 。
   注：Visual MINTEQは、金属分化、溶解度平衡、天然水のための収着などの計算のためのフリーウェアの化学平衡モデルです。加えて、イオン分化、イオン活性、イオン錯体及び要素の除去²⁸の可能なメカニズムを調べるために、治療前後の元素の濃度（質量分析の結果）と比較される飽和指数を予測するために使用されます。
2. プログラムに、pHは、アルカリ度と異なる元素の濃度を含む、ステップ4からプログラムと入力質量分析データを開きます。
   注：地下水がその場 urani に中に酸化されていることを考えるとUM抽出プロセスは、入力のためにヒ素、バナジウム、及びウランの酸化種を使用しています。

8.阻害濃度50（IC _50）

1. 最初の3つの別々の実験の5日目の生存率（ODの平均値）を平均化することにより、未処理及びCuO-NP処理したPBW +メディア濃度のIC _50を計算します。
2. EMEM-1Xの5日目の生存率の平均値からの未処理及びCuO-NP処理したPBW +メディア濃度の減算5日目の生存率の平均値は、生存率の差を計算します。そしてEMEMで5日目の平均生存能力による生存率の差を分割し、阻害パーセントを取得するために100を掛けます。
3. 各未処理及びCuO-NP処理したPBW +メディアの集中のための生存率パーセントを取得するには100（EMEM-1Xの生存率）から阻害パーセントを引きます。
4. 1の濃度と100の生存率パーセントでEMEM-1Xを設定することにより、科学的なグラフ作成ソフトに入力。ログにすべての濃度を変換しますスケール（X =ログ（X））と最小二乗適合分析を非線形回帰を行います。

9.データ解析

1. 両側検定、対になった、スチューデントt検定を用いて、未処理及びCuO-NP処理したPBWにおける元素の濃度を比較します。
2. 7日間にわたって収集成長曲線のデータを用いて、曲線（AUC）下の面積を計算し、反復測定分散分析（ANOVA）を用いて分散分析、全ての群の間でTukeyの事後比較に続いた（n = 3）。
3. （上述の）未処理及びCuO-NP処置PBW +メディアソリューションの両方の成長曲線の5日目からのデータを使用してIC _50を計算する。<0.05のP値は有意であると考えています。
   注：統計分析の目的のために、半分検出限界の質量分析値はその制限値²⁹を下回るイオン濃度レベルに割り当てられていました。

結果

未処理及びCuO-NP処理したPBWでPBWの成分濃度、pHを表1に報告されている。マーティンとレディ（2009）は、CuOを-NPのゼロ電荷点が9.4±0.4と推定されていることを報告しました。これらの条件では、PBWのpHは7.2〜7.4であったことを考えると、水がナノ粒子表面が負に帯電した種の吸着を可能に課金させる、のCuO-のNPにプロトンを寄付しています。ヒ素、セレン、ウラン、バナジウム（ 表1）を含むPBWからのCuO-NP治療除去優先汚染物質。平均ヒ素濃度は[0.002 mg / Lで（両側検定対応のあるt検定、P <0.0001）に0.0175から] 87％減少しました。のCuO-NPの治療も著しく低減セレン（30％）、ウラニウム（78％）、バナジウム（92％）、およびリン酸（85％）（p <0.05）。

スペシエーションモデリングの結果、 表2に報告、分析結果をサポートしていますの99％PBWにヒ素を溶解TALはHA...

ディスカッション

以前の研究では、CuOを-NPは地下水^11,13,30,31からヒ素を除去することを報告しました。本研究では、これらの以前の知見をサポートし、また、CuOを-NPはPBWから追加の汚染物質を除去することを報告しています。この研究はまた、他の汚染物質および潜在的な競合するイオン¹¹の存在にもかかわらず、CuOを-NPは、ヒ素の除去に有効であることを以前のレポートを確認します。分化モデリングはCuOを-NPのへの吸着を可能にする、PBWにおけるバナジウム種の97％が負に帯電していることを予測して、バッチ処理は、バナジウムの92％が除去されました。

これはCuOの-NPを使用してPBWから特定の汚染物質を除去の影響を調査し、その後除去に関連細胞毒性の変化を評価した最初の研究です。結果は、in vitroアプローチを使用して複雑な混合物の細胞傷害性の変化を調査することが可能であることを実証するが、これらの方法には、制限がないわけではありません。 PBWがfを使用することができませんでした細胞のULL強度、生き残るためにあるため、...

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
CuCl2	Sigma	203149
ホウケイ酸ガラス球	VWR	26396-639	6 mm
硝酸	フィッシャー	A509-P500	微量金属グレード
0.45 μm シリンジフィルター		Fisher SLHA 033S S
10x EMEM	Fisher	BW12-684F
ウシ胎児血清	ATCC	30-2020
L-グルタミン		Fisher BP379-100
NaHCO3	Sigma	S5761
ペニシリン/ストレプトマイシン	ATCC	30-2300
0.22 μm 真空フィルターユニット	フィッシャー	09-740-28C
HEK293	ATCC	CRL-1573
HEPG2	ATCC	HB-8065
トリプシン	シグ	マ SV3003101
MTT	シグマ	M2128
D-ペニシラミン	フィッシャー	ICN15180680
96 ウェルプレート	フィッシャー	07-200-92
DMSO	Fisher	D12814
Spectra Max 190	Molecular Devices
Visual MINTEQ version 3.0	KTH Royal Institute of Technology
ICP-MS	Agilent		装置、モデル、検出限界の詳細は、Reddy et al., 2013に掲載されました。
IC DIONEX DX 500	Dionex		装置、モデル、検出限界の詳細は、Reddy et al., 2013に掲載されました。
VWRインキュベーター	VWR