方法論記事

同種免疫により誘導される血管拒絶反応および移植動脈硬化症のマウスモデル

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DOI：

10.3791/52800

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2015年5月17日

 ,  , 
1Department of Molecular Biology and Biochemistry, Simon Fraser University

この記事について

サマリー

マウスにおける大動脈介在グラフトのプロトコルを記述します。このプロトコルの目標は、動脈の同種免疫反応とその結果として臓器移植の失敗に寄与する動脈変化に関連する病理学的プロセスと治療戦略を研究するためのモデルを提供することです。

要約

移植動脈硬化症(TA)につながる血管拒絶反応は、

慢性心移植不全の主要な表現です。TAでは、レシピエントの免疫系が動脈壁の損傷を引き起こし、内皮細胞や平滑筋細胞の機能不全を引き起こします。これは、内膜の肥厚と管腔閉塞を特徴とする病理学的修復反応を引き起こします。免疫系が血管系拒絶反応とTAを引き起こすメカニズムを理解することは、移植片の失敗を管理するための新しい方法の開発に役立つ可能性があります。ここでは、血管拒絶反応とTAの病原性メカニズムを研究するために使用できるマウス大動脈介在モデルについて説明します。このモデルには、ドナー動物から同種レシピエントへの大動脈セグメントの移植が含まれます。動脈セグメントの拒絶反応には同種免疫反応が関与し、血管拒絶反応に似た動脈変化がもたらされます。ここで説明する基本的な技術的アプローチは、血管拒絶反応とTAに関連する特定の質問に答えるために、さまざまなマウス系統や的を絞った介入で使用できます。

概要

過去30年以上にわたり、免疫抑制剤の進歩は、急性拒絶反応に移植片拒絶反応を減少しているが、慢性拒絶反応は、主な課題のままです。慢性心臓移植拒絶反応の主な症状は、移植動脈硬化（TA）1,2です。この状態は、同種移植片の動脈の内膜過形成および血管運動機能障害を特徴とし、レシピエントの免疫系による内皮および平滑筋細胞の免疫学的標的化の結果として発生されます。ホスト容器3を温存しつつ、外来ペプチド主要組織適合遺伝子複合体（MHC）の認識にグラフト血管系の特定の標的化は、排他的に移植動脈におけるTAの開発によって強調表示されます。これを踏まえて、レシピエントがドナー場合や、受信者は、T細胞とB細胞4を欠くと遺伝的に同一である場合にTAが実験的に発生しない観察です。免疫媒介血管損傷とdysfunctionがTA 5に、内膜肥厚や線維症の発症、ならびに脂質およびECMタンパク質の異常な蓄積を引き起こします。内膜肥厚は、全動脈樹の4-6を通して同心になる傾向があります。移植片喪失と死は通常、同種移植片の動脈4の管腔閉塞に起因する進行性虚血の結果として発生します。

1991年には、Mennander ら 7は、TAをモデル化するために、ラットにおいて大動脈介在モデルを開拓してきました。いくつかのグループが、その後、マウスで使用するために、この手順を適応しています。このモデルでは、同種移植片の大動脈セグメントは、臨床移植において観察されたTAと同等の機能を持っている病変を発症します。これは、平滑筋様細胞とレシピエントの白血球7の蓄積を特徴と内膜肥厚が含まれています。過去20年にわたり、このモデルは、血管損傷、拒絶反応及びTAのメカニズムに重要な洞察を生成するために使用されてきました。それは私たちすることができますEDは動脈病態中の免疫および血管応答に関連した質問を調べました。抗原のミスマッチの影響の選択適切にこれらの質問に対処する能力。

完全なMHCバリヤーを横切る移植は、臓器移植拒絶反応に関与することが知られている免疫応答の総合的な評価を可能にします。これは、移植片由来の細胞によって提示直接CD4とCD8 T細胞認識と外国ペプチドMHCの標的を含み、間接的CD4（および場合によってはCD8）T細胞認識および細胞を提示レシピエント抗原によって提示された移植片由来のアロ抗原の標的化、および抗体血管細胞表面8上の同種抗原の媒介認識。しかし、完全MHC不適合実験における損傷に対する血管反応は、臨床的に観察されるものとは異なる場合があります。ジョンソンら 9は示したが、その中で最も完全なMHCミスマッチ関門を移植大動脈介在移植片、内新生内膜細胞は、レシピエント由来ではなく、ドナー由来のものです。これは、ほとんどの内膜平滑筋細胞がドナー由来9,10であるヒト移植において観察されるものとは異なります。この制限を考慮するために、マイナー組織適合抗原不一致を横断グラフト伴う代替の実験モデルは、より密接に臨床移植11で観察されるものに似ている血管の応答を誘発するように開発されてきました。これらの代替モデルは重要な結論を可能にしながら、TA、完全に臨床設定で発生するものを再降伏しないマイナー組織適合抗原不一致の移植片における血管拒絶反応を引き起こす免疫学的プロセスの開発を推進血管応答について行われます。例えば、マイナー組織適合性抗原は、グラフト反応する抗体12によって不十分認識されています。上記の注意事項を考えると、それは病的クエスティを考慮することが重要です大動脈介在モデルで使用する抗原のミスマッチの種類を選択する際には、検査されています。ここでは、マウスの大動脈介在移植のための詳細なプロトコルを記述します。我々は完全MHC不適合マウスが、同じプロトコルが他の抗原不一致のマウス系統全体でグラフト化のために使用されている間の介在移植について説明します。

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プロトコル

この研究におけるすべてのプロトコルを見直し、サイモンフレーザー大学の動物のケア倫理委員会によって承認されました。使用したBalb / cYJ（H2 d）はドナーマウス及びC57BL / 6（H2 b）はレシピエントマウスは、同種の反応を調べました。マウスは、8〜12週齢の間で実験に使用されています。女性または男性のいずれかのマウスを使用してください。同系のコントロールは、C57BL / 6レシピエントにC57BL / 6ドナーからの大動脈のセグメントで構成されています。

1.ドナーとレシピエントの準備

注：ドナーとレシピエントの両方を麻酔し、移植片の虚血を最小にするために手術前に用意されています。注射用麻酔薬は、吸入麻酔薬の送達のために必要な機器によって、動物の閉塞を防止するためのプロトコルで使用されています。しかし、所望ならば、吸入麻酔薬は、適切な代替手段です。麻酔薬の最初の注射から、全体の手順が完了するのに約90分かかります。移植片の虚血性時間が少ない股関節ですnは30分。

  1. ケタミンの腹腔内注射でマウス麻酔た（100mg / kgで、10 mg / mlで）およびキシラジン（10mg / kgの、1 mg / mlで）。マウスは、10〜15分以内に鎮静剤を投与されます。動物フットパッドの脂肪部分をつまんで麻酔の深さを評価します。必要に応じて、動物が引っ込め反射を示さなくなるまで、麻酔薬カクテルの元の量の1/3を管理します。すべてのカクテルを投与された後に密接に呼吸速度を監視します。手術中に、ピンセットで前腹壁をつまんで麻酔のレベルを15分ごとに評価します。マウスは、60〜90分間、深く麻酔をかけままにしてください。
  2. 麻酔下ながら乾燥を防ぐために、眼軟膏とマウスの目に注油してください。
  3. 恥骨に半ば胸部から腹部腹側領域上にできるだけ皮膚に近い髪を剃ります。任意の皮膚ではないニックに特に注意してください。それは私に吸収することができるので、脱毛クリームを使用しないでください皮膚NTOおよび炎症性である可能性があります。
  4. 加熱テーブルまたはパッド上記のタオルの上に仰臥位で動物を置きます。
  5. 2％クロルヘキシジンを用いた予備スクラブで手術部位を清掃してください。手術野を最大化するために大規模な作業領域を準備します。手術部位の中心にスクラブ起動し、直鎖状または環状に外側に移動します。ガーゼを処分。この手順を少なくとも5回以上繰り返します。同じ領域にアルコール準備パッドを適用します。アルコールが乾燥した後、滅菌ガーゼでベタジン溶液とドレープで清潔な場所を準備します。

2.エンドツーエンドの吻合手順

  1. ドナー操作
    1. 操作を通して無菌技術を維持します。使用前に0.5％に加速過酸化水素溶液とのすべてのカウンターと手術台の表面を清掃してください。使用前にすべての手術器具、ガーゼ、ドレープやガウンを包み、オートクレーブ。スチームで楽器の無菌性を確認各パックに入れ滅菌インジケータストリップ。無菌手術用手袋を使用し、手術の間の配置されています。複数の手術のために、高温のガラスビーズ滅菌器での使用の間に手術器具を滅菌します。
    2. 8-30Xの倍率で手術用顕微鏡下で滅菌ドレープで包み、きれいな薄いプレキシガラスボード上の仰臥位でドナーマウスを置きます。
    3. セクション1.1に概説されるように、適切な外科的麻酔を確認した後、手術を続行します。
    4. 滅菌はさみを使用して、恥骨から剣状突起に、単一正中線下縦腹部切開を行います。
    5. 小さなリトラクタを使用して、空洞を露出するために腹壁を開きます。
    6. 滅菌綿を使用すると、静かに、動物の左に上方腸を撤回し、生理食塩水で湿らせたガーゼでカバーし、アプリケーターをひっくり返しました。下方生殖器官を移動し、腎臓下の大動脈と下大静脈（IVC）を見つけます。 Moisの定期的に生理食塩水で10露出した組織。
    7. 医療号5鉗子を使用して、分岐部に左腎動脈のレベルから、IVCから大動脈を分離します。大動脈近くの小さな枝を結紮する10-0ポリアミドモノフィラメント縫合糸を使用してください。
    8. ドナーの大動脈は、IVCから分離された後、湿らせたガーゼで露出キャビティを覆い、無菌領域に別にドナーセット、生理食塩水で容器を飽和させます。ドナー（呼吸と心臓血管機能、および麻酔深度）15分毎の状態を確認してください。 （ステップ2.2.7へ2.2.1）以下に説明するように、大動脈を単離し、レシピエントで動作を開始します。
    9. 受信者の大動脈は、IVCから分離し、別に設定された後、顕微鏡下でドナーを返します。 2つの4ミリの微小血管クランプで約5mmのクロスクランプ（興味のあるセグメントの近位および遠位）ドナー大動脈、。
    10. Vannas-テュービンゲンmicroscissorsを使用して、腹部大動脈の小さなグラフトセグメント（長さ3〜4ミリメートル）を横断します。
    11. 注射器に取り付けられた25 G 5/8針を用いて、ヘパリン化（100 U / ml）で切除された大動脈をフラッシュ食塩水。針の先端が血管に接触しないことを確認してください。
    12. 氷上ヘパリン化に入れ大動脈（100 U / ml）を生理食塩水、脇に置きます。まだ深い麻酔下で、微小血管クランプを解除している間。瀉血によってドナーを安楽死させます。
    13. 切除の30分以内にドナー血管を移植します。それは大動脈の大きい長さを切り出すことにより、複数の受信者のための1つのドナー容器を使用することも可能ですが、30分未満に虚血時間を保ちます。
  2. 受信者の操作
    1. ドナー動作と同様に、操作全体で無菌技術を維持します。
    2. 8-30Xの倍率で手術用顕微鏡下で滅菌ドレープで包まれ薄いプレキシグラスボード上の仰臥位でレシピエントマウスを置きます。
    3. AF動物が引っ込め反射を示さないときに、十分な麻酔を確保terを、手術を進めます。
    4. 滅菌はさみを使用して、恥骨から剣状突起に、単一正中線下縦腹部切開を行います。
    5. 小さなリトラクタを使用して、空洞を露出するために腹壁を開きます。
    6. 滅菌綿を使用すると、静かに、動物の左に上方腸を撤回し、生理食塩水で湿らせたガーゼでカバーし、アプリケーターをひっくり返しました。下方生殖器官を移動し、腎臓下の大動脈とIVCを探します。食塩水で定期的に露出した組織を湿ら。
    7. 分岐部に左腎動脈のレベルから、IVCから大動脈を分離します。必要に応じて、大動脈近くの小さな枝を結紮する10-0ポリアミドモノフィラメント縫合糸を使用しています。
    8. 2つの4ミリの微小血管クランプで約5mmのクロスクランプ（興味のあるセグメントの近位および遠位）大動脈、。
    9. Vannas-テュービンゲンmicroscissorsを使用して、単一の水平大動脈切開を行い、ドナー大動脈移植片を収容するために腹部大動脈の小セグメント（0.5mm以下）を切除します。
    10. ヘパリン化（100 U / ml）を生理食塩水で摘出した大動脈をフラッシュします。ドナー大動脈移植片は、受信者の横切大動脈端部を接続するために適切な長さのものであるべきです。
    11. 同所の位置にドナー大動脈移植片を配置し、受信者のそれとのそれぞれの移植片の解剖学的向きに一致する、受信者の最後に、ドナーの移植片の端を吻合。
    12. 静かに容器の外膜をつかみ、少し医学5番の鉗子を使用してそれを裏返します。ピンセットを使用して、受信者の切除容器にドナー大動脈グラフトを確保するために、血管壁の全厚を通して10-0ポリアミドモノフィラメント縫合糸に取り付けられた針を駆動します。容器の開口部がオフによるT閉じられていないことを確認するために注意してください容器の後壁のO不注意ステッチ。
    13. 連続ステッチのために、移植片の上端と下端の両方で9時位置にステー縫合糸を配置します。 3時からの移植片の上端から開始し、2ランニング縫合糸で切除端を吻合し、ステー縫合糸に縫合糸を固定します。
      1. 以上の移植片を裏返して、容器の一部を背ために実行している縫合糸を続け、原点ステー縫合糸を満たします。容器に多くの圧力を適用せずに固定します。下の吻合のための縫合を繰り返します。
        注：結節縫合容器に、ステー縫合糸の間に3つの分離されたステッチと吻合していることを除いて連続縫合と同じように起動します。吻合時間は通常20分です。
    14. 吻合が完了すると、逆行性血が流れ、吻合部位の漏れをチェックできるようにするために、遠位微小血管クランプを解放します。漏れがある場合、immediatelyは欠陥部位を閉じるためにステッチを配置します。部位で出血がない場合は、近位クランプを解放。
    15. 移植を調べて、移植片には、血液障害、および受信者の血管の近位および遠位部分がないことを確認してください。ドナーのと受信者の両方の容器内の積極的なパルスパターンは、血液が自由に流れていることが主な指標です。ピンセットを使用して、穏やかにステー縫合糸の一端を把持し、少し容器の後壁を検査するための容器を裏返します。
      注：吻合部位の両端に血管壁のないパッカリングがあってはなりません。クランプの除去後の貧しい血流が血栓症の兆候です。
    16. 綿先端のアプリケーターを用いて、腹腔内に腸を返します。
    17. Castroviejo針ホルダとグレーフェの鉗子で、連続縫いを使用して5-0ポリプロピレン縫合糸で腹壁を閉じます。同じでスキン層を閉じます皮内クロージャを使用して、縫合糸。
    18. 移植が完了するとすぐにTorbugesic（1ミリグラム/ kg）の筋肉を管理します。
    19. ためには、すぐに与え、アチパメゾール（1mgの/ kg）を、ケトプロフェン（5mg / kg）および乳酸リンゲル液を皮下に温めました。
    20. 手術直後に、水ブランケット一晩（12時間）下で加熱し、ケージにマウスを置きます。麻酔回復期間中は、清潔で乾燥した障害物のない領域に一人で動物を配置します。清潔なペーパータオルでラインケージ（オートクレーブ処理）と約20℃から22℃まで水ブランケットの温度を調整します。ケージの床の乾燥および湿潤キブルを自由に提供します。
      注：手術後のケアの重要な要素は、麻酔や手術からの回復時に、必要に応じて、動物と適切な介入の観察です。監視の必要な強度は動物によって異なり、COなどの即時麻酔回復期間中に高くなることがあります後で術後の回復にmpared。
    21. 継続的に、彼らは完全に回復するまでモニター施さ麻酔を持つ動物を監視します。動物は、補助なし胸骨横臥位を維持できるようにする必要があり、それが放置される前に、それは穏やかで、痛みのない表示される必要があります。
    22. 両方の皮下に、3日間の期間、ブプレノルフィン（0.1 mgの/ kgのBID）とケトプロフェン（5ミリグラム/ kgのSID）を得ました。
    23. 3日間の最低麻酔からの回復中に心血管および呼吸機能、体温、および術後の痛みや不快感を監視します。その他の手入れは、脱水や電解質の損失を最小限に抑えるために、このような鎮痛剤および他の薬剤の投与、および非経口流体として、必要になることがあります。
    24. 後肢の運動機能を観察することにより、移植手術の成功を評価します。移植の完全な成功は、アニメーションの回復時に即時でなければならない後肢と尾に遮るもののない血流を伴いますら、2日目に後肢のない麻痺との完全な回復

3.組織収集

注：予め定めエンドポイントは、所望の分析の種類および抗原ミスマッチの性質に応じて3-60日の範囲です。一般的には、内膜肥厚は、完全なMHCミスマッチのマウス系統全体の移植後30日目に堅牢です。

  1. ケタミンの腹腔内注射でマウス麻酔た（100mg / kgで、10 mg / mlで）およびキシラジン（10mg / kgの、1 mg / mlで）。動物フットパッドの脂肪部分をつまんで麻酔の深さを評価します。動物が引っ込め反射を示さないときに手術を続行します。
  2. 水で手術部位を清掃し、70％アルコールで終わります。
  3. 吸収パッドを敷いたトレイの上に仰臥位で動物を置きます。
  4. 大きな正中縦切開して腹腔を開きます。空洞を露出させる自己保持リトラクターを配置し、IVC AN腹部大動脈をdは。
  5. 静か医療号5ピンセットを使用して、隣接IVCから移植ドナー大動脈セグメントを分離します。移植血管の外膜を除去しないように特に注意してください。
  6. 胸椎の両側に沿ってリブを介して胸郭入口にすべての方法を切断して胸腔を公開します。心膜を露出させ、止血鉗子のペアで胸郭を確保するために上方に前胸壁を反映しています。
  7. 心臓が露出されると、左心室に（注射器に取り付けられている）25 G 5/8針を挿入し、ヘパリン化（100 U / ml）を0.1mlの生理食塩水でフラッシュ。
  8. ハサミを使用して、血液、ヘパリン化生理食塩水、および固定液は、灌流中に身体を残すことができるように、右心房を削除します。 4％パラホルムアルデヒド5mlで又は流体ラン透明になるまで動物を灌流。安楽死を確実にするために心を削除します。
  9. 物品血管セグメントを移植し、4％パラに浸します1時間を超えないため、ホルムアルデヒド。 10月（最適切断温度）行列とフラッシュ凍結に移植血管を設定します。セクション8ええと厚に設定クライオスタット下容器。ヘマトキシリン​​＆エオシンおよび/またはVerhoeff-ファン·ギーソン（ファン·ギーソン）弾性染色で染色切片。

移植片の4形態素解析

注：TAは、内膜肥厚13によって特徴付けられます。このモデルでは、内膜肥厚及び内腔の大きさの減少は、結果として得られる免疫媒介血管損傷の重症度を反映しています。同種移植片コントロールは同種免疫応答の非存在下での血管のベースライン特性を決定するために使用されます。これらの制御はまた、外科的処置の結果として生じる、動脈損傷の評価を可能にします。 syngraftsには内膜肥厚があってはなりません。

  1. 内膜肥厚と管腔閉塞を調べるために、内皮細胞内の面積を測定層、弾性ファン·ギーソンに内部弾性板（IEL）及び外弾性板（EEL）は、画像解析ソフトを用いて動脈セグメントを染色しました。以下のパラメータは、TAの反射動脈の変化を決定することができます。
    1. - 内皮細胞層内の領域内弾性板内の面積：絶対内膜面積を測定します。これは、TAの特徴である内膜の膨張の絶対測定を提供します。
    2. 内弾性板内の領域 - 外弾性板内の面積：絶対内側の領域を測定します。これは、時折血管壁のこの領域への免疫媒介性変化の結果として発生する可能性があります内側の低下や成長の絶対測定を提供します。
    3. 外弾性板内の領域として全血管面積を測定します。これは、免疫学的損傷の結果として動脈の膨張や収縮を伴う血管リモデリングの測定を提供します。
    4. メジャー（内弾性板内の領域 - 内皮細胞層内の領域）/（外弾性板内の領域 - 内部弾性板内の領域）：内膜/メディア。これは、内膜増殖の相対的な尺度を提供し、容器の大きさの差を正規化します。
    5. ％腔ナローイングを測定します：[（内弾性板内の領域 - 内皮細胞層内の領域）内弾性板と/面積）] * 100。これは、血管壁の内膜の拡大と改造（内側または外側）の組み合わせから生じる管腔閉塞の程度の尺度を提供します。

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結果

このモデルでは、のBalb / cYJマウスの腹部大動脈を、C57BL / 6レシピエントの腎臓下の大動脈に介在されています。これは、同種移植片の動脈を対象と同種免疫応答の総合的な評価を可能にします。このモデルにおいて、免疫媒介血管損傷は内膜肥厚、管腔狭窄および免疫細胞の動員に終わる血管修復応答を開始（ 図1および2）。これらの基準は、その後、同種免疫応答の重症度、血管拒絶反応、およびTAのための読み出しとなります。手順の成功は、同種移植動脈セグメントの堅牢な内膜肥厚の開発および同種移植片のコントロールで内膜肥厚が存在しないことによって評価することができます。臨床的に関連する免疫抑制は、より密接に臨床移植に似るように、このモデルで使用することができます。このモデルはまた、同種免疫応答に特異的なタンパク質/経路の効果を研究するために、トランスジェニック動物で使用することができますの我々は14を行っています。

同種移植片の大動脈セグメントは、内膜肥厚を開発します

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ディスカッション

我々は、免疫介在性血管拒絶反応やTAを研究するために有用であるマウスにおける大動脈介在移植するためのプロトコルを記述しています。このモデルは、TAの原因だけでなく、新規治療戦略の開発を研究するために使用することができます。これは、適応免疫、細胞傷害性T細胞応答、サイトカイン媒介性CD4 T細胞エフェクター応答、およびTA 14,17-21における抗体媒介性移植片損傷の重要な役割を確立するために過去に使用されています。マウスにおける動脈移植が原因で動物の明らかなサイズが小さいために困難です。しかし、練習とデューデリジェンスと、成功した手術を行うことができます。成功は、血管の開存性に依存します。これは、移植片が不適切に、血管内腔の鉗子で血管、くびれを処理容器の後壁と、同じサイトの繰り返しの縫合を縫合することによって破損していないことを確実にすることを含みます。容器の漏れも問題があると電子に注意が必要ですステッチの数と位置は、血管壁の周りに均等に分割されているnsure。これは、グラフト虚血は30分未満に最小化されることが不可欠です。これにより、95％以上の成功率を達成することができます。

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謝辞

この作品は、ヘルスリサーチとハートとBC＆ユーコンの脳卒中財団（JCC）のカナダの研究所からの助成金によってサポートされていました。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
C57BL/6J (H-2B)ジャクソン研究所、バーハーバーME株#000664
Balb/cBYJジャクソン研究所、バーハーバーME株#001026
タミン塩酸塩注射液 USP 100 mg/mlケタリアンDIN 00612316
キシラジン注射剤 20 mg/mlロンパムDIN 02169592
ケトプロフェン注射100mg / mlアナフェンDIN 01938126
酒石酸ブトルファノール 注射10 mg / mlトルブゲシックDIN 008450000
プレノルフィン注射0.3 mg / mlレキットベンキーザーBN5241
チパメゾール塩酸塩滅菌注射液アンチセダンDIN 02237744
ヘパリンナトリウム注射、USP、1,000ユニット/ mlケソンディストリビューションDIN 02264315
涙自然眼軟膏AlconDIN 02082519
実体顕微鏡ライカM80
0.9% 塩化ナトリウム, 滅菌済みBaxter Corporation
Lactated Ringer'溶液、滅菌バクスター コーポレーション
0.9% 塩化ナトリウム注射、滅菌、10 mlバクスター コーポレーション
アルコール調製パッドロリス
ポビドン ヨウ素ベタジン
クロロヘキシジン グルコン酸 4% w/vGermi-Stat
ブラック ポリアミド モノフィラメントAROSurgicalインスツルメントT4A10Q07
縫合糸、10-0 縫合糸、70 ミクロンコーポレーション
ブルー モノフィラメント 縫合糸 5-0、P3 針Ethicon8698G
1 ml シリンジBDREF 309659
10 ml シリンジBDREF 309604
1cc TB インスリン シリンジ、28 G 1/2BDREF 309309
25 G7/8、皮下注射針BDREF 305124
27 G 1/2、皮下注射針BDREF 305109
Colibri Retractor- 1.5 cm スプレッド 4 cmファイン サイエンス ツール17000-04
S&T CAF-4クリップ鉗子適用、ロックなしファインサイエンスツール00072-14
スーパーグリップ鉗子、S&Tファイン サイエンス ツール00632-11
医療 No.5 鉗子ファイン サイエンス ツール11253-20
レクサー ベビー ハサミファイン サイエンス ツール14078-10
マイクロ アドソン鉗子 鋸歯状ファイン サイエンス ツール11018-12
バンナス チューブン マイクロハサミファイン サイエンス ツール15003-08
マイクロ クランプ、b-1;3.5mm x 1mm;長さ7mmファインサイエンスツール00396-01
フ鉗子、10cm 1x2歯サイエンスツール11054-10
とタングステンジョー付きカストロビエホサイエンスツール12565-14
ガラスビーズ滅菌器Inotech 250IS-250-Steri-250
ガーゼProgene
コットンチップアプリケーター、ピューリタン
、ひげトリマー、ウォール
加熱パッド、サンビーム
ケブアマッグレーファインロックファインホット不織布、

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