上向流嫌気性スラッジブランケット炉内の海洋堆積物やトリクロロエチレンの削減からSulfidogenic汚泥の開発

サマリー

微生物の硫酸塩の減少は、環境バイオテクノロジーにおいて非常に重要なプロセスです。硫化反応器の成功は、他の要因の中でもとりわけ、スラッジの微生物組成に依存します。ここでは、還元的脱塩素化の目的で、UASB反応器の熱水噴出孔堆積物から硫化性汚泥を開発するためのプロトコルを紹介します。

要約

微生物の硫酸塩削減の重要性は、それが環境バイオテクノロジーで提供するさまざまな応用に依存しています。人工的な硫酸塩の減少は化学酸素要求量(COD)および重金属と共に硫酸塩の高濃度を取除くために産業廃水処理で使用される。このプロセスへの最も一般的なアプローチは、主にメタン生成粒状汚泥を硫化に適応させることによって硫化性汚泥を得る嫌気性バイオリアクターを使用することです。このプロセスには時間がかかる場合があり、スラッジ中にメタン生成菌が存在するため、基材の競争が常に排除されるわけではありません。本研究では、熱水噴出孔の堆積物が微生物の元来の供給源である硫化汚泥を得るための新しいアプローチを提案する。硫酸塩と揮発性脂肪酸の存在下で発達する微生物群集は、硫化物による阻害を示さずに長期間にわたって硫酸塩の還元を維持するのに十分な広さです。

このプロトコルは、上流嫌気性スラッジブランケット(UASB)タイプの反応器の堆積物からスラッジを生成する手順を説明しています。さらに、議定書は、トリクロロエチレン(TCE)などの非常に有毒な有機汚染物質のモデルを還元的脱塩素化によって除去する汚泥の能力を実証する手順を示しています。プロトコルは、(1)スラッジの形成とUASBでのその硫酸塩還元活性の測定、(2)スラッジによるTCEを除去する実験、および(3)TCE還元後のスラッジ中の微生物の同定の3つの段階に分かれています。この場合、堆積物はメキシコにあるサイトから採取されましたが、海洋堆積物は硫酸塩還元細菌が豊富な微生物の天然プールであるため、堆積物の異なる供給源が採取された場合、この手順を使用して硫化汚泥を生成する可能性があります。

概要

環境バイオテクノロジーへの最も重要な貢献の一つは、（接種材料）を使用した汚泥は硫酸還元条件下で実行することができたしたバイオリアクターの設計でした。硫酸還元（SR）は、COD、重金属や有機汚染物質、SR汚泥¹の望ましい特性になるという事実の同時除去に加えて、硫酸塩の高濃度で含有廃水流の処理を可能にします。硫酸で汚染された排水のいくつかの例としては、皮なめし工場、紙、医薬・化学品製造業¹から来ます。メタングラニュール汚泥がsulfidogenesis ²に適合されている場合しかし、文献のほとんどはsulfidogenic汚泥を指します。この適応は、一般的に、バイオリアクター内のCOD / _SO 4 ^2-比を操作し、汚泥^2,3にメタンを阻害する化学物質を添加することによって達成されます。長い時間メートルに加えて、バイオリアクターで使用sulfidogenic汚泥はの適応から得られた場合AY sulfidogenic顆粒の形成を必要とする、メタン生成菌と硫酸減速や硫化物の高濃度汚泥の許容範囲との間の競合が発生する可能性のある主要な問題のいくつかであります条件を硫酸還元するため、主にメタン生成汚泥。本研究では、我々は時間をかけてその硫酸還元活性を評価し、実験を行う、上向流嫌気性スラッジブランケット型原子炉（UASB）は熱水噴出堆積物から主にsulfidogenic汚泥（プンタミタ、ナヤリット、メキシコ）を取得する手順を説明還元的脱塩素化への適用を評価しました。それはそのサイトで、特定の場所^{4に生息する}微生物群集が示す硫酸還元活性に起因する硫化物の形成があることが報告されているため、堆積物の場所を選択しました。

断絶があります。sulfidogenesisにメタングラニュール汚泥を適応させるの上に堆積物からこのsulfidogenic汚泥を得る際にアル利点。これらの利点のいくつかは、（1）（3）が存在する汚泥を適応さメタン汚泥で動作他UASBと比較して硫化物の比較的高濃度を許容し、（2）、バイオリアクターを操作するための顆粒を形成する必要がなく、かつ酢酸スラッジの形成を促進する培地に含まれる揮発性脂肪酸の混合物で使用してもメタンを有する基板には競合しません。

海洋堆積物が細菌を発酵し、わずか数^5,6を言及する細菌を脱ハロゲン化、硫酸塩還元菌などの微生物の多種多様な自然のプールであるため、この手順はsulfidogenesisを促進するために行きました。このプロトコルを使用して、海洋堆積物から開発コンソーシアムの種類は、硫酸還元したがって、高いS効率を示すことができます ulfate時間とメタン生成菌と硫酸還元菌の毒性として報告よりも高い濃度で硫化物に高い許容度にわたって活性を低下させます。一方、脱ハロゲン化機能は、プロトコルに従うことにより、堆積物に示されている可能性があるが、ここで提案されているが、それは元の微生物のコミュニティに依存してもよいです。この仮定は、還元的脱塩素は呼吸やcometabolismのいずれかによって発生する可能性があるという事実に基づいて行われ、海洋微生物群集⁷に促進することができる両方の条件。これらの揮発性脂肪酸は、硫酸塩還元菌のいくつかの株によって使用されるため、汚泥を得るために、堆積物の培養基質として、酢酸、プロピオン酸および酪酸の混合物を用いて行きました。これらの酸は、海の堆積物^5,6における炭素質材料に関する文献にはいくつかの報告によれば、また、しばしば、海洋堆積物中に見られる炭素化合物の一種です。

コンテンツ ">最後に、世界中の地下で発見された最も毒性の強い化合物および他の水域の一部は、トリクロロエチレン（TCE）やパークロロエチレン（PCE）のような塩素化溶媒である。これらの化合物は、人間のみならず毒性があるが、また、まだ米国⁸の環境保護庁が優先汚染物質と考えられている。本研究ではsulfidogenic汚泥をしている濃度でTCEを削減するその能力にテストされた実験を提案した微生物、特にTCEへメタン生成条件^9,10の下で塩素化合物の生分解について報告範囲。それは、塩素化合物の生分解に関する研究のほとんどはメタン生成条件^9,10の下で行われていることを言及する価値がある。我々は、このプロトコルで提案されたTCEを用いた実験であることを考慮します汚泥の潜在的なアプリケーションの良い例。この実験の目的は、EとしましたTCEへの汚泥の許容度および活性を硫酸還元のTCEの影響を評価します。 （1）（2）CODを除去し、（3）削除し、硫酸塩を除去する：塩素化合物の生分解に関する研究のほとんどはメタン条件下で行われることを考慮すると、このプロトコルは、スラッジの形成を同時にするために使用され得ることを示唆する塩素化合物。さらなるステップは、（ほかに硫酸塩およびCODする）メタン生成条件で評価することができない二つの条件をTCEと重金属の同時除去に汚泥​​を評価する可能性があります。

プロトコル

プロトコルのステップについては、図1のスキーム。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。

1.スラッジの形成のための海洋堆積物を収集

1. （より高い硫酸還元活性を示すことが硫化物の存在に）熱水噴出孔に近いか有機物の残骸が検出された領域のいずれかに親しみ海中エリアを特定します。
2. この研究の目的のために、堆積物の約3または4キロを取ると、サンプルから水を抜きます。暗いビニール袋中のサンプルを置きます。いいえ冷凍は必要ありません。
3. 彼らはすぐに使用する予定がない場合は一度研究室で、冷蔵庫内のサンプルで袋を保ちます。この研究の目的のために、SAMPレは、それらを使用する前に、数週間または数ヶ月のために冷蔵庫にすることができます。
4. 堆積物試料（ すなわち 、1または2キロ）の大部分を取ると堆積物から見つかった、または存在することができるいくつかの岩することができる炭素質材料の大きな破片を除去するために、適切なメッシュ（0.1センチ）を使用します。
   注：この場合には0.20センチの直径（中0.0767）のメッシュを使用したが、それは、試料中の粒子の大きさに応じて異なるサイズであってもよいです。
   1. メッシュを通して沈殿物を通過した後、一部が均一であることを促進するために選択した部分を混ぜます。
   2. 標準的な方法^{11に従って、}揮発性浮遊物質（VSS）含量を決定するために分離した小さい試料（ すなわち、2~3 gで）を取ります。
      注意：手順1.4から1.2のために、図2を参照してください。

堆積物試料の2写真を図。前揮発性懸濁物質（VSS）決意に計量するために取られたメッシュを通過した後の（A）堆積物試料だけ取られた後。（B）土砂サンプル。（C）サンプル 。ペトリ皿を滅菌する必要はありません。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。

2.バイオリアクターのセットアップ

1. この研究の目的のために、あるいは、3 Lの総作業容積でUASBのガラス反応器を使用して、1または2 L容量のガラス反応器を使用します。
2. 堆積物のVSSの内容に基づいて1 LにVSSの5 gを得接種材料として使用する沈殿物の量を算出します
3. 計算後の沈殿物の量が多すぎる場合には、バイオリアクターの約25％〜30％の量ではなく、堆積物によって占有されるべきであることを考慮に入れます。
   1. それ以来、VSSのコンテンツを記録します微生物群集は、バイオリアクター中で濃縮されたときに変更されます。 VSSのコンテンツは、バイオリアクター中の硫酸還元活性の計算のために必要とされます。
4. バイオリアクターにおける基礎培地および緩衝液の最終濃度はゲレロ・バラハスらによって報告さに似ていることを確認してください。 （2014年^）12。
   1. 堆積物の最終的な体積を確保する、基礎培地、緩衝液及び揮発性脂肪酸は、反応器の最終的な作業容量に等しいです。基礎培地レシピ^12は、微量金属やビタミン解決のための適切な濃度が含まれています。
   2. それを希釈されたときに、それがあることを確認する（ステップ2.4で報告さよりも濃縮すなわち、2、3または4倍に）使用される反応器の作業容積のために適当な濃度で基本培地および緩衝液のストック溶液を調製しますゲレロ・バラハスらによって報告された濃度で。 （2014年）^12）。
      注：基礎培地原液が常に必要であるが、緩衝液のみ起動時に必要とされます。これは、この時間の後、緩衝液を添加する必要はありません。
   3. 1：1のCOD割合2.5で酢酸、プロピオン酸および酪酸：揮発性脂肪酸のストック溶液を準備します。酢酸ナトリウムは、基礎培地に含まれる計算のため考慮してください。反応器内の最後のCOD濃度は、2.7グラム/ Lでなければなりません。
      注意：ドラフト内でこの溶液を調製します。この溶液の調製のためのニトリル手袋やゴーグルを着用します。アカウントに図3に示されている揮発性脂肪酸と硫酸の反応の化学量論を取ります。
   4. 反応器に硫酸イオン_（SO 4 ^2-）の4,000ミリグラム/ Lの最終濃度を提供するために適切な濃度の_硫酸ナトリウム（Na 2 SO _4）のストック溶液を調製します。また、目が含まれます代わりに限り、最終的な硫酸（SO _{⁴ 2-）}濃度が権利であるとして原液からそれを加えるの基礎培地に必要な硫酸の電子量。
5. 彼らは反応器の底部に達することを確認する基礎培地の一部と混合し、反応器内の堆積物を置きます。
   1. 揮発性脂肪酸の溶液と硫酸溶液と混合した基礎培地および緩衝液の残りを加えます。揮発性脂肪酸の溶液を液体中に注ぎ入れていることを確認します。注：ドラフト内でこのステップを実施します。
   2. リサイクルポンプに接続し、反応器のパイプラインを設定します。 /分60ミリリットルでリサイクル流量を設定します。 34℃の恒温槽内のバイオリアクターを設定します。定期的に温度変化（すなわち、34±1.7℃）に小さいことを確認してください
   3. ガス置換列への接続を設定します。
      注意：手順2.5から2.1のために、図4を参照してください 。

VFA（酢酸、プロピオン酸および酪酸）と硫酸還元の図3.化学量論。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。

図4. UASBリアクター。（A）初期時間。（B）連続運転政権の300日後。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。

Sulfidogenesisと微生物の成長を促進するために原子炉の3.操作

注意：接種物は、Vを消費するための許可脂肪酸および硫酸olatile。この目的のために、硫酸塩、硫化物およびCOD消費のために第1の分析を実行するために一週間を待ちます。

1. インキュベーションの一週間は、CODのための分析を行うために、液体の5~7ミリリットルのサンプルを採取した後、硫酸塩及び硫化物の含有量及びpHを^、13は標準的な方法^11を以下。
   1. メチレンブルー法^{13に従って、（}波長670nm（λ）での）液体の分光光度法で硫化物を分析します。
      1. 25 mlの容量フラスコに酢酸亜鉛溶液（2％w / w）の5mlのを置き、酢酸亜鉛溶液に迅速にサンプル200μLを加えます。
      2. N、N -ジメチル- p個のフェニレンジアミン、シュウ酸2.5 mlを加え（DMP）溶液（0.2％w / wの_20％H 2 SO ₄で）、鉄/ W（III）硫酸アンモニウム溶液（10％125μlの2％の_H 2 SO _4）し、メスフラスコ中で25 mlの蒸留水で完全でワット反応のために30分を待ちます、ブルー色が安定した時刻^13を発生します。
         注：分光光度計でサンプルをテストするために60以上の分、少なくとも15分待ってからではなく。分光光度計の青い最終溶液の読み取りを実施します。
   2. 標準的な方法¹¹に従って、硫酸を分析します。ここで、比濁法を用いて、硫酸バリウムなどの硫酸塩の定量。
      1. コンディショニング溶液5mlを配置（塩酸HClを1：1）25 mlにメスフラスコに、先に遠心分離したサンプルを1ml（11320×gで）、蒸留水でメスフラスコ中の25 mlのを完了を追加し塩化バリウム1gを追加します。
      2. ボルテックスで1分間この溶液を混ぜます。 420 nmで¹¹の波長（λ）で分光光度計にサンプルを形成し、読むために、硫酸バリウム、4分間待ちます。
   3. 標準的な方法¹¹に従って、CODを分析します。また、代金引換determinaを使用ションキット。
      1. CODの決意に先立ち、決意に干渉する可能性が残っている硫化物を除去するために、（11320×gで）完全にサンプルを遠心します。必要に応じて、遠心分離は二度：すぐに試料を採取した後、1回目と2回目は6または8時間を待ってから、COD分析を行います。
      2. 、代金引換決意キットの反応バイアルに試料を2 mlを加え、バイアルを密封し、穏やかに撹拌することにより混合物を均質化します。別の反応バイアルに2mlの蒸留水を加えることで、ブランクを準備し、混合物を均質化します。
      3. 2時間150℃で消化反応器内のバイアルを置きます。バイアルを取り外し、それらを暗闇の中でクールダウンしましょう​​。波長620nmで分光光度計でのバイアルの読み取りを行います。
   4. ガス置換塔からのガス量を取得します。
2. 硫酸塩が消費されるまでにさらに5〜7日間待ちます。硫酸とCODがで消費されなければなりませんpproximately 85％前〜90％の新しい供給バッチが開始されます。
3. 硫酸（代金引換）が消費されると、完全にステップ2.4​​を繰り返します。バッチごとに新鮮な培地と新しい栄養素を供給してください。
4. 繰り返しは3.1と3.2を繰り返します。この時点で、各バッチは7と10日の間持続させるべき。
5. 3~4のバッチが完了したら、ステップ2.4​​を繰り返すが、4グラム/ LにCOD濃度を増加させます。
6. 繰り返しステップ3.1およびステップ3.2。
   1. 手順を繰り返し3.3が、6グラム/ LにCOD濃度を増加させます。
   2. それは10グラム/ Lになるまで、3.6と3.6.1徐々に増加するCOD濃度を繰り返します。
      注：時間（D）対硫酸塩濃度（mg / L）提示グラフを作成します。
7. 硫酸の消費量がより少ない、24時間で80％以上であり、これは複数の週間発生した場合、連続モードに原子炉の運転を切り換えます。連続モードのために24時間後に水理学的滞留時間（HRT）を設定し、4グラム/ LとCODで硫酸濃度を維持10g / Lで。
   注意：時間の経過とともに硫酸の消費量があるべき 速いです。

4.硫酸塩が活性試験を削減

1. この試験の前には、連続的な体制の下、バイオリアクターは、残りの硫酸濃度が10％未満の変動を示していることを確認してください。
2. 任意の日には、1 HRT周期や行動ステップ2.4​​の後に原子炉を停止します。ステップ2.4​​.3のために10グラム/ LのCOD濃度を使用しています。
3. バイオリアクターが供給されると、液体の5~7 mlのサンプルを取り、代金引換、硫酸塩、硫化物（ステップ3.1）及びpHを時間ごとに分析を行います。生成されたガスの量を記録します。
4. 文献¹⁴によると活性を低下させる硫酸を計算します。
   
   

SRA =硫酸還元活性（MG COD-H ₂ S）/ GVSS * D

m個の H ₂ 2 Sのように表現

VSS =揮発性懸濁物質濃度

T =時間（dまたは時間）

5. mg / Lでに時間をかけて硫化物濃度に対する硫酸の消費の割合を示し、対応するグラフを作成します。時間をかけて、CODの消費量の割合を示すグラフを作成します。時間をかけてpH変化を示すグラフを作成します。

5.トリクロロエチレン（TCE）還元試験

1. この試験の前には、バイオリアクターは、連続的な政権の下で働いて、残りの硫酸濃度の10％未満の変動を示していることを確認してください。バイオリアクター中の硫酸還元が90％未満である場合は、このテストを開始しないでください。
2. バイオリアクターの液相中のこの化合物の最終濃度は300μMでなければならないことを考慮してトリクロロエチレンの原液（TCE）を準備します。 partitioniを考えてみましょう34℃でのTCEのためHenry's法律無次元定数（H'）を使用して、ヘッドスペースへの化合物のNG。 TCEのためH'at 34°Cは0.4722です。
   
   注意：換気フードにこの溶液を調製し、手袋とゴーグルを着用してください。
   1. 例えば、5,000μMの原液、以下のように計算します：
      
      TCEの気相濃度=（0.4722）（* 5000）= 2139μM。 TCEのこの量は、ヘッドスペースになりますので、原液の製造においてこの濃度を含めます。
      そして、原液の液体（水）に、実際のTCE濃度は次のようになります。5000 + 2139 = 7139μM。 TCE密度= 1.43グラム/ mlです。 mgの7139μMを変換して、TCEの密度を用いて、ストック溶液のためのTCEの量を計算します。
      注：TCE原液mの濃度をAY未満5,000μM、 すなわち 、3000または1000μmであること、これは、このソリューションの多くの量は、その液相の量に応じて、バイオリアクターに送達することができる方法によって異なります。
3. TCE、 シス -1,2-ジクロロエチレン、 トランス -1,2-ジクロロエチレン、塩化ビニルおよびエテンのためのガスクロマトグラフにおける標準曲線を準備します。 TCEの原液5.2に記載したのと同じ手順に従うことにより、これらの化合物のストック溶液から、シス -1,2-ジクロロエチレン及びトランス-1,2-ジクロロエチレン標準曲線を準備します。規格（ガスボンベ）から各ガスの濃度を希釈することにより、塩化ビニルおよびエテンのための標準曲線を準備します。
   1. 20〜300μMの範囲で、これらの化合物の標準曲線を準備します。ゲレロ・バラハスらによって報告された方法を使用してください。ガスクロマトグラフにおけるこれらの化合物の分析のために^{（2011）15。}
      注意：これらのスタンドを準備ARD換気フード内のソリューションとは、手袋とゴーグルを着用してください。
4. 任意の日には、1 HRT周期や行動ステップ2.4​​の後に原子炉を停止します。ステップ2.4​​.3のために10グラム/ LのCOD濃度を使用しています。
5. バイオリアクターが供給されると、5.2で調製したストック溶液からのバイオリアクター内の液体に直接TCEを追加し、バイオリアクターの液相の最終のTCE濃度は300μMである必要があります。 12時間にHRTを設定します。
   1. 1 HRTサイクルの終わりに（3.1.1、3.1.2および3.1.3ステップ）、COD、硫酸塩および硫化物のための液体（500〜1,000μL）のサンプルや行動分析を取ります。ヘッドスペース（100〜250μL）のサンプルを取り、ガスクロマトグラフでTCE、 シス -1,2-ジクロロエチレン、 トランス -1,2-ジクロロエチレン、塩化ビニルおよびエテンのための分析を行います。
6. 手順を繰り返し2.4。ステップ2.4​​.3のために10グラム/ LのCOD濃度を使用しています。
7. バイオリアクタ9の上に提示するまで、任意のTCE還元試験を繰り返さないでください0％の硫酸還元との両方において10％の変動の少ない、バイオリアクター中に残存する硫酸還元および硫酸塩。
8. より5.4、5.5および5.6 2〜3回繰り返します。
9. TCEの還元試験が終了した直後の微生物の識別を行うために堆積物の試料（0.5 g）を取ります。 2または3 TCE削減試験後、これを行います。

TCE還元実験後に活性試験を減らす6硫酸

1. 完全にステップ4を繰り返します。

微生物の7.識別

1. 約0.5グラムそれぞれのスラッジのサンプルを取り、標準的な方法¹²に従ってRNA総抽出を行っています。
2. 逆転写と16S rRNA遺伝子を増幅し、ポリメラーゼ連鎖反応（RT-PCR）増幅を一段階^{12を行います} 。
3. 増幅または最初のアプローチとして文献¹¹で提案されているものを使用するようにプライマーを設計します。 amplifに従ってくださいication手順は、文献¹²で提案されています。
4. 16S rRNAのライブラリを構築します。 PCRアンプリコンをクローニングキット^{11を用いて}クローニングすることができます。典型的には、各プレート（1つのPCR産物を表す各コロニー）からの10コロニーをクローニングすることができます。文献¹²で提案されている手順に従って、配列決定のために、プラスミドDNAを準備します。
5. 断片の塩基配列決定を実施します。文献¹²で提案されている手順に従って、以前に説明したPCR増幅するためのプロトコル（ステップ7.4）とクローンを用いたPCR外部製品の約1,400塩基対を再増幅します。 Eから組換えプラスミドを分離文献¹²で提案されているように大腸菌コロニー。 M13ユニバーサルプライマー¹²と配列決定のために部分的な手続きを行ってください。
6. シーケンス解析を実施します。クラスタルXを使用してヌクレオチド配列の位置を合わせ、手動でテキストエディタで調整します。 NCBIのdatabasのBLAST検索を実行しますE。 ^{（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/Blast.cgi）12。}
7. ヌクレオチド配列のアクセッション番号を取得します。対応するアクセッション番号の下でEMBLヌクレオチド配列データベース（ジェンバンク/ EMBL / DDBJ） ​​で同定されたクローンの塩基配列を堆積させる（ すなわち 、アンプリコンからの配列のための^{JQ713915eJQ713925）12。}

結果

バイオリアクター中の硫酸化の典型的な動作は、 図5に示されている。これは、操作硫酸還元の最初の週の間に遅くなることを注意することが重要です。しかし、ゆっくりと時間をかけて硫酸の90％以上の消費量は接種物は硫酸還元菌が濃縮された、したがって硫酸を削減し、ことのできる微生物群集を、開発していることを示しています。図中の異なる期間が硫酸還元が経時的にその速度を増加させたことを示しています。初めに、バッチは、（期間I）を低減するために硫酸を20日かかったその減少率が増加し、それが供給される硫酸塩（期間II）を低減するのに約10日かかりました。期間IIIは、硫酸還元でより少ない変化を提示し、これは、それが、図5に見られるように10日間の平均で達成された。この期間の後、硫酸塩の還元は4,000 V 4日間の平均（期間IV）及び期間での取り硫酸塩のmg / Lで未満24時間で消費されました。バイオリアクターでのパフォーマンスは、24時間のHRTでの200日後に連続モードに設定されています。

ディスカッション

環境バイオテクノロジーにおけるsulfidogenesisのいくつかのアプリケーション、細菌を発酵する廃水処理であるとのコンソーシアム中の硫酸還元菌の代謝の最も使用されるアプリケーションの一つがあります。 UASB反応器は、高硫酸濃度の産業廃水処理の主な設計アプローチの一つです。本研究では、UASB反応器内での海洋堆積物からsulfidogenic汚泥を取得するためのプロトコルを提示します。海洋堆積物からsulfidogenic汚泥を取得するためのプロトコル内の重要なステップである：（1）反応器内に配置される堆積物試料の同性の促進、（2）硫酸の右濃度と揮発性脂肪酸の供給量（COD / SO _{⁴ 2-）}の比、（3）分析硫酸塩、硫化物、定期COD及びpHが、（4）微量金属およびビタミンバッチが開始されるたびに含まれている基礎培地をリフレッシュ。それはsludgの開発することを考慮することが重要ですeは、元のサンプルの微生物群集に、右の物質収支（硫酸とCOD）に大きく依存します。それが開発する活動を硫酸還元のための時間がかかりますが、バイオリアクターは、再循環ポンプを停止したり、温度制御を停止するこ...

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
トリクロロエチレン	シグマ アルドリッチ	251402
cis-1,2-ジクロロテヒレン	シグマ アルドリッチ
トランス-1,2-ジクロロエチレン	シグマ アルドリッチ	D-62209
塩化ビニル スコッティ標準	スーパーコ		1,000 ppm v/v 窒素中
エテン スコッティ標準	スーパールコ		99% 純度
ポンプ	Masterflex		モデル7553-75
分光光度計	任意の
微量遠心分離機	任意の
ガスタイトシリンジ	任意の		100および200マイクロリットルの
UASBガラス反応器	任意の		設計
ガスクロマトグラフ	任意の		FID検出器
、キャピラリーカラム、SPB-624	supelco
、pHメーター	、任意の
バイトンチューブ、	Masterflex
、基礎媒体試薬	、任意の
微量金属試薬	、任意の
ビタミン溶液試薬
硫酸ナトリウム	任意の
揮発性脂肪酸	任意の
COD測定キット	HACH		範囲 0-15,000 mg/L
TOPO-TAクローニングキット pCR®4.0;	Invitrogen, US
S.N.A.P. TM Miniprep Kit	Invitrogen, UK
Pure link TM Quick Plasmid Miniprep kit	インビトロジェン