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方法論記事

SH-SY5Yヒト神経芽腫細胞株の分化

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DOI:

10.3791/53193

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2016年2月17日

 ,  , 
1Department of Biochemistry and Molecular Biology, The Huck Institutes of the Life Sciences, The Pennsylvania State University

この記事について

サマリー

ヒトのニューロンで起こることの翻訳モデルとして機能する、信頼性のある複製可能なin vitroシステムを持つことは、神経生物学および神経ウイルス学において非常に重要です。このプロトコールでは、SH-SY5Yヒト神経芽腫細胞を培養し、in vitroアプリケーションで使用するための生存ニューロンに分化する方法を説明しています。

要約

>jove_content<人間の疾患の翻訳モデルを提供する適切なin vivoおよびin vitroシステムを持つことは、神経生物学と神経科学の研究の不可欠な側面です。神経生物学で使用される従来のin vitro実験モデルには、ラットおよびマウスの初代ニューロン培養、ラットB35およびマウスNeuro-2A細胞を含む神経芽腫細胞株、ラットPC12細胞、および短期スライス培養が含まれます。多くの研究者がこれらのモデルに依存していますが、ヒトの要素がなく、観察された実験効果はそれぞれの種に限定されている可能性があり、ヒトでは同じようには発生しない可能性があります。さらに、これらの細胞はニューロンであるにもかかわらず、不安定な核型を持っている可能性があるため、遺伝子発現の研究や細胞シグナル伝達の再現性のある研究に使用が困難になります。したがって、ヒトの神経疾患のより一貫したモデルを開発することが重要です。

次の手順は、染色体的に安定なヒト神経芽腫細胞株SH-SY5Yを分化することにより、均一で生存可能なヒト神経細胞培養を得るための、従順で再現性のある方法を説明しています。この方法は、前述のいくつかの方法1〜4を統合し、培地からの血清の逐次除去に基づいています。タイムラインには、細胞外マトリックスタンパク質と神経栄養因子の導入を伴う、段階的な血清飢餓が含まれています。これにより、ニューロンは分化し、上皮細胞はそれに対して選択され、均一なニューロン培養が得られます。代表的な結果は、SH-SY5Y神経芽腫細胞が初期の上皮様細胞表現型から、より広範で分岐したニューロン表現型への分化に成功したことを示しています。このプロトコルは、その後の生化学的および分子的分析に使用できるニューロン培養の均質な集団を生成する信頼性の高い方法を提供し、研究者にヒトの感染および疾患のより正確な翻訳モデルを提供します。

概要

ビトロモデル系で使用する能力は、神経生物学と神経科学の分野を大幅に強化しました。培養中の細胞は、タンパク質の機能と特定の現象の根底にある分子メカニズムを特徴づけるために病気や感染症の病態を理解するために、予備薬物検査の評価を実施するための効率的なプラットフォームを提供します。神経生物学では、細胞培養モデルの主要なタイプは、ラットB35細胞5、ニューロ2Aマウスセル 6、およびラットPC12細胞を7としてラットおよびマウス、および神経芽細胞腫細胞株に由来する初代神経細胞培養物を含みます。このような細胞株の使用が大幅にフィールドを進めているが、非ヒト細胞および組織を処理に関連するいくつかの交絡因子が存在します。人間と比較した場合、これらは理解種特異的代謝過程の違い、病気の症状、および病原性の表現型が含まれます。ことに注意することも重要です再齧歯類モデルおよび経路は、げっ歯類およびヒト8-11との間で保存されているの理解の重要性の限界を強調し、マウスとヒトの遺伝子発現と転写因子のシグナル伝達の間に有意な差です。他のものはN-テラ-2（NT2）ヒト奇形癌細胞株および誘導多能性幹細胞（iPS細胞）を含むヒト神経細胞株の使用を採用しています。これらの細胞株は、 インビトロでのヒト・システムのための優れたモデルを提供します。しかしながら、レチノイン酸（RA）、ニューロン、星状細胞の混合集団の発生をもたらし、さらなる精製工程を必要と放射状グリア細胞12とNT2細胞の分化は、ニューロンの純粋な集団を得ました。また、NT2細胞は、細胞の72％より大きい60染色体で、非常に可変性核型13を示しています。性IPSCは、異なる細胞株の間の区別の変動を示し、分化効率が変化します 14。これらの選択肢を補完するために一貫して再現性のヒト神経細胞モデルを有することが望ましいです。

SH-SY5Y神経芽細胞のような細胞は、親の神経芽細胞腫細胞株SK-N-SHのサブクローンです。親細胞株は、神経芽細胞様および上皮様細胞15の両方含ま骨髄生検から、1970年に生成されました。 SH-SY5Y細胞は、47の染色体からなる、安定な核型を有し、かつ異なるRAの使用を含む機構、ホルボールエステル、およびそのような脳由来などの特定のニューロトロフィンの様々を通して成熟ヒトニューロンへの神経芽細胞のような状態から区別することができます神経栄養因子（BDNF）。前の証拠は異なる方法の使用は、アドレナリン作動性、コリン作動性、およびドーパミン作動性ニューロン16,17のような特定のニューロンのサブタイプに選択できることを示唆しています。この後者の側面は、神経生物学実験の多数のためのSH-SY5Y細胞が有用となります。

ontent ">いくつかの研究は、未分化および分化した状態で、SH-SY5Y細胞との間の重要な違いを指摘している。SH-SY5Y細胞が未分化である場合、それらは急速に増殖し、非常に少数の、短いプロセスと、非偏光であるように思われる。彼らは多くの場合、成長します塊および分化、これらの細胞は増殖の減少、長く、分枝プロセスを拡張し、場合によっては2,18を偏光する。未成熟ニューロン18,19を示すマーカーを発現する。完全に分化したSH-SY5Y細胞は、以前に発現することが実証されています成長関連タンパク質（GAP-43）、ニューロン核（NeuNの）、シナプトフィジン（SYN）、シナプス小胞タンパク質II（SV2）、ニューロン特異的エノラーゼ（NSE）と微小管関連タンパク質（MAP）を含む成熟ニューロンの異なる様々なマーカー2,16,17,20、および4。SH-SY5Y細胞の分化をさらに支持するものreprese例えばグリア細胞繊維性酸性タンパク質（GFAP）のようなグリアのマーカーの発現を欠いているためにntの均質なニューロン集団は、BDNFの除去は、細胞のアポトーシスを4になります。これは、分化したSH-SY5Y細胞の生存は、成熟ニューロンに類似栄養因子に依存することを示唆しています。

サブクローンは、1978年3に設立されて以来、SH-SY5Y細胞の使用が増加している。その使用のいくつかの例としては、パーキンソン病17、アルツハイマー病21、およびポリオウイルス22などのウイルス感染症の病因、エンテロウイルス71（EV71）23,24を調査含ま、水痘帯状疱疹ウイルス（VZV）1、ヒトサイトメガロウイルス25、および単純ヘルペスウイルス（HSV）2,26。 SH-SY5Y細胞を用いたいくつかの研究は、特に神経ウイルス学27-36の分野において、その未分化形態において、これらの細胞を使用していることに留意することが重要です。分化したSH-SY5Y細胞対未分化の観察された表現型の違いは、WHEの問題を提起しますTHER感染の観察進行が成熟分化したニューロンで異なるだろう。例えば、分化したSH-SY5Y細胞は、原因HSVに結合し、未分化SH-SY5Y細胞2のエントリを調節する表面受容体の欠如にすることができる未分化、増殖するSH-SY5Y細胞に対するHSV-1の取り込みのより高い効率を有します。 in vitroでのニューロンのテストに焦点を当てた実験を設計する際に、SH-SY5Y細胞をin vivoモデルに変換し、比較のために最も正確な結果を得るためには区別されるべきであることが重要です。

ヒトニューロン培養物を生成するための信頼できる方法の開発は、研究者は正確に人間の神経系をモデル化する翻訳実験を実行することを可能にするのに不可欠です。ここで紹介するプロトコルは区別されている人間の神経細胞を濃縮するために、従来の方法1-4由来のベストプラクティスを描く手順ですレチノイン酸を使用。

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プロトコル

1.一般的な考慮事項

  1. 必要な試薬のリストについては、 マテリアル/機器の表を参照してください。厳格な無菌条件下で、すべての手順を実行します。
  2. FBSを含むすべてのメディアの準備のための熱不活性化ウシ胎児血清（hiFBS）を使用します。熱-不活性化するために、10分毎に反転、30分間56℃でFBS 50mlのアリコートを温める（ 表 1 参照）。
    注：FBSを熱不活性化なしで使用される場合、上皮様表現型は、SH-SY5Y細胞の培養を通してより迅速に進行します。
  3. 使用前に、メディアが温め、すべてのステップの前に、適切なpHバランスを確立するためのインキュベーターで平衡化することを可能にします。例えば、培地の50mlを完全に平衡化するのに約1時間かかり液（pH 7、37℃、5％CO 2）。
    注：このプロトコルは、部分的に分化したSH-SY5Y細胞をトリプシン処理し、再メッキされている必要があり2段階の分割手順を使用しています。これはストレスが多いですこれらの非常に脆弱な細胞のためのプロセス。したがって、最小限の時間のために、トリプシンで細胞をインキュベートすることが重要です。これはまだ皿に付着した上皮様細胞を残して、ニューロンの優先リフトオフが可能になります。
  4. 細胞を含有する円錐管の底部に対して先端と10ミリリットルプラスチックピペットでゆっくりと分化した細胞のトリチュレーションを実行します。上下ない、低速で5倍以上のトリチュレーションを実行しません。

SH-SY5Yメンテナンス文化の2パッセージ

  1. 細胞が70-80％コンフルエントに達しており、10〜15継代を超えない分割維持培養。培養物は、典型的には、（培養が分裂中に以上の5倍に希釈されていないと仮定して）3〜5日毎に継代する必要があります。
  2. T-75フラスコから継代細胞に、約10ミリリットル1×PBSですすぎ、その後、メディアを吸引します。
    注：私たちは、SH-SY5Yメンテナンスの文化のfuを分割することはお勧めしません。1よりrther：5継代の間には、これは、細胞が低い密集度のために死ぬことを引き起こす可能性があるため。
  3. 吸引し、PBS、その後、2.5ミリリットル0.05％トリプシン-EDTA（1X）を追加します。
  4. インキュベーター2-3分でインキュベートし、フラスコの表面から細胞を解放するために穏やかに転倒。
  5. 10ミリリットルの基本的な成長培地を追加します（ 表2を参照）、1-2回粉砕します。
  6. 千×gで2分間スピンダウンし、培地を吸引し、次いで5ミリリットルの基本的な増殖培地でペレットを再懸濁。
  7. T-75フラスコ内で、通常のめっき用20ミリリットルの全容量に5、または分化（第5節）のためにカウントし、プレート：3から1：1から細​​胞を希釈します。

3.凍結SH-SY5Y細胞

  1. 5％（v / v）のDMSOを補充した基本的な増殖培地中でSH-SY5Y神経芽腫細胞の早期継代の凍結。
  2. 当初は、長期保存のために液体窒素に転送した後、24時間-80℃でアリコートを凍結します。
    注：参考のために、コンフルエント（75から85パーセント）T-75フラスコは、5を得られます凍結するSH-SY5Y細胞を1mlのアリコート。これらのアリコートのそれぞれが総どこでも2から5万個の細胞が含まれている必要があります。

4.解凍と文化未分化SH-SY5Y神経芽腫細胞

  1. 基本的な増殖培地を準備します。
  2. 急速に37℃の水浴（約2分）で凍結細胞を解凍します。
  3. 15ミリリットルコニカルチューブ内の9ミリリットルの基本的な増殖培地中で細胞を再懸濁し、そしてその後、千×gで2分間遠心します。
  4. 吸引し、ペレット化した細胞を妨害し、そして穏やかに10ミリリットルの基本的な増殖培地中で細胞を再懸濁させないように注意しながら上清。
  5. T-25フラスコまたは60ミリメートル2皿にプレート細胞。
  6. 次の日は、死んだ細胞を除去するためにメディアを交換してください。

5. 0日：分化のためのめっきセル

  1. 分化スケジュールについては、図1を参照してください。
  2. 1×PBS、吸引と未分化細胞をすすぎ、その後、温めた1〜2ミリリットルを使用してトリプシン処理1倍、0.05％トリプシン-EDTA。
  3. 細胞はトリプシンである場合に、インキュベーター内で約3分間インキュベートします。
  4. 、10ミリリットルの基本的な成長培地を添加することにより、トリプシンをクエンチフラスコまたは皿の側面を洗い流し、そして穏やかに1-3回を粉砕します。 15ミリリットルコニカルチューブにコンテンツを転送します。
  5. 千×gで2分間遠心分離し、ペレットを乱さないように注意しながら、メディアを吸引除去します。
  6. 5ミリリットルの基本的な増殖培地で再懸濁ペレットと1-3回粉砕します。
  7. 50,000細胞/ mlに基本的な増殖培地を用いて希釈した後、血球計数器を用いて細胞数を計測します。
  8. プレート2皿当たり100,000細胞の合計のための35ミリメートル2ディッシュあたりの細胞mlのインキュベーターに戻し置きます。

6. 1日目：メディアの変更（分化メディア＃1）

  1. 分化メディア＃1のアリコート50mlを（ 表2を参照）、37℃の水浴中でインキュベートします。
  2. メディアが温められたとき、それは培養器に平衡化させる（37°Cで、5％CO 2）は、少なくとも1時間、使用前に適切なpHバランスを確立します。
  3. レチノイン酸（RA）を追加し、すぐに皿にメディアを追加する前に温めし、平衡化した培地（ 表1参照 ）。
    注：レチノイン酸は光に敏感であり、4℃で暗所瓶に保存する必要があります
  4. ゆっくり古いメディアをオフに吸引し、廃棄します。
  5. 35ミリメートル2ディッシュあたりRAに2ミリリットル分化メディア＃1を追加し、インキュベーターに戻します。

7. 3日目：メディアの変更（分化メディア＃1）

  1. 繰り返しセクション6（1-5ステップ）

8. 5日目：メディアの変更（分化メディア＃1）

  1. 繰り返しセクション6（1-5ステップ）

9. 7日目：セルの分割1：1

  1. すぐに料理にメディアを追加する前に分化メディア＃1を温めて、平衡化するためにRAを追加します。
  2. ゆっくり古いメディアをオフに吸引し、廃棄します。
  3. 200μLを加えます35ミリメートル2ディッシュあたり0.05％の1xトリプシンEDTAを温め、約2〜3分または細胞までは目に見えて、顕微鏡下で観察されるようにプレートから持ち上げられるインキュベーターで暖かいです。
  4. 35ミリメートル2皿あたりRAに2ミリリットル分化メディア＃1を追加することにより、トリプシンをクエンチ そしてプレートから残りの神経細胞を洗浄するためにメディアを使用しています。次いで、50mLのコニカルチューブにコンテンツを転送します。
    注意：トリプシン処理手順の間に、一度にあまりにも多くの料理をトリプシン処理しません。これは、神経細胞培養は、細胞毒性であることができる、あまりにも長い間、トリプシン中でインキュベートされないことを保証するのに役立ちます。
  5. 50ミリリットルコニカルチューブに最大10個の皿からのコンテンツを組み合わせて、静かにアップなしの5倍以上ダウン10ミリリットルプラスチックピペットでゆっくりと摩砕。
  6. 35ミリメートル2新鮮な料理とインキュベータへの復帰へのアリコート2ミリリットルの細胞懸濁液。

10. 8日目：変更メディア（分化メディア＃2）

  1. RAを追加します（参照<すぐに料理にメディアを追加する前にメディアを温めて、平衡化するための強力な>表1）。
  2. ゆっくり古いメディアをオフに吸引し、廃棄します。
  3. ゆっくりと2 mLの分化メディア＃2を追加します（ 表2参照 ） 35ミリメートル2皿当たりRAと、インキュベーターに戻します。ニューロンは、彼らはすぐに乾燥させることができるように長期間にわたって大気に曝されないようにしてください。

11. 9日目：細胞外マトリックス（ECM）を準備コートディッシュ

  1. 氷上でECMソリューションの1つのバイアルを解凍し、1を希釈：100を冷たいDMEMに。
  2. 各35ミリメートル2皿に混合物の2ミリリットルを分配し、皿のベース全体が覆われていることを確認します。
  3. 一晩で1時間またはインキュベーター（37℃、5％CO 2）内の場所。
  4. 吸引した混合物とフードで約1時間、空気乾燥させ。最大2ヶ月間室温で保管してください。

12日10：転送細胞にECMコーティングプレート1：1

  1. RAを追加直ちに皿にメディアを追加する前に温めし、平衡化した培地（ 表1参照 ）。
  2. 静かにメディアをオフに吸引し、廃棄します。
  3. 各35ミリメートル2皿にトリプシン温め200μlを添加して、約1〜2分間、またはニューロンが目に見えて、顕微鏡下で観察されるように皿から持ち上げられるまで室温でインキュベートすることができます。
    注：トリプシンニューロンを過剰インキュベートし、損傷が発生しないように室温でこのトリプシン処理ステップを実行します。ニューロンは、この段階で上皮様細胞よりもはるかに高速プレートから離します。
  4. 35ミリメートル2皿当たり2ミリリットル分化メディア＃2を追加することにより、トリプシンをクエンチし、プレートから残りの神経細胞を洗浄するためにメディアを使用しています。次いで、50mLのコニカルチューブにコンテンツを転送します。
  5. 50ミリリットルコニカルチューブに最大10個の皿からのコンテンツを組み合わせて、優しくまでととせいぜい5回上下にゆっくりと粉砕します10ミリリットルプラスチックピペット。
  6. ECMコーティングされた35ミリメートル2皿に2ミリリットルの細胞懸濁液を分注し、インキュベーターに戻します。

13.日11：メディアの変更（分化メディア＃3）

  1. RAを追加直ちに皿にメディアを追加する前に温めし、平衡化した培地（ 表1参照 ）。
  2. ゆっくり古いメディアをオフに吸引し、廃棄します。
  3. ゆっくりと35ミリメートル2ディッシュあたりRAと（ 表2参照 ）2ミリリットル分化メディア＃3を追加し、インキュベーターに戻します。ニューロンが長時間空気中に露出することはできません。

14日14：メディアの変更（分化メディア＃3）

  1. 繰り返しセクション13（1-3ステップ）

15.日17：最後のメディアの変更（分化メディア＃3）

  1. 繰り返しセクション13（1-3ステップ）

16.日18：使用する準備ができて神経細胞培養

  1. 新鮮な差分にメディアを変更3日ごとにRAとerentiationメディア＃3は、ニューロンの健康を維持します。
    注：細胞は、神経細胞に分化し、神経細胞の表現型を示すべきです。培養物は、しかし、ニューロンの生存率の持続時間は分化の開始時に未分化細胞の継代回数に依存して、最終分化次の14日まで一般的に安定しています。高い継代数は、より短い耐用寿命と分化したニューロンをもたらします。

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結果

現時点では、未分化SH-SY5Y細胞は、ヒトのニューロン27-36のための機能モデルとして使用されている神経生物学と神経ウイルス学の分野で多くのインスタンスがあり、重要なのは、未分化細胞である、そのような最適なウイルスの取り込み2のような表現型を欠いてもよいです正確な解釈のために必要な。 SH-SY5Y細胞または他のin vitroの神経系を使用する場合、細胞は適切にインビボで神経細胞に発生することができるものの可能な限り最高の表現であるデータを得るために、神経細胞に分化することが重要です。その後の生化学的およびイメージングのために使用することができる18日以内に高い生存、均質、分化した神経細胞の培養上プロトコル収率は、分析します。細胞を分化しつつ、未分化SH-SY5Y神経芽腫細胞は、外向きに延びる多数の短いプロセスと大、フラット、上皮様表現型（ 図2A）を実証しますsが周囲の細胞（ 図2B）に接続し、いくつかの神経突起の突起を有しています。 SH-SY5Y細胞の分化と、細胞は、ニューロンの...

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ディスカッション

上記のプロトコルは、均質かつ実行可能な人間の神経細胞培養を生成するための簡単​​で再現性のある方法を提供します。このプロトコルは、いくつかの以前に公開された方法1-4を統合手法と実践を利用し、それぞれのベストプラクティスを描写することを目指しています。 SH-SY5Y細胞の分化は、緩やかな血清欠乏に依存しています。レチノイン酸、神経栄養因子および細胞外マトリックスタンパク質の添加。シリアル分割は分化し、成熟した付着性ニューロンを選択しました。この細胞株は、付着性と懸濁された細胞の異種集団として始まります。このプロトコルは、継代またはメディア変更前のPBS洗浄を源泉徴収することにより、両方の集団を維持することを目指していたが、懸濁された細胞のいくつかの損失が死んだ上皮細胞の除去を可能にすることが必要です。提示された方法は、更なる実験のために分化したヒトSH-SY5Y神経細胞の均質な集団を生成します。

パーソナルプラグインが、R剤は、コリン作動性またはアドレナリン作動性表現型16,17へのニューロンの分化を誘導するために使用することができ、S...

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開示事項

著者らは開示するものは何もない。

謝辞

SH-SY5Y分化のための条件の最適化におけるYolanda Tfuriの貢献と、この研究が始まった研究室のLynn Enquist博士の支援に感謝します。Y. Tafuriは図3に示す画像を提供しました。この研究は、NIH-NIAID Virus Pathogens Resource(ViPR)、Bioinformatics Resource Center(MLSおよびL. Enquist)、およびK22 AI095384(MLS)の支援を受けました。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
B-27ThermoFisher Scientific17504-044<><脳
由来神経栄養因子 (BDNF)SigmaSRP3014 (10 μg)/B3795 (5 μg)
ジブチリル環状AMP(db-cAMP)グマD0627調製については<>表<1>を参照してください
DMSOATCC4-X-Minimum
Essential Medium Eagle (EMEM)SigmaM5650-Fetal
Bovine Serum (FBS) HycloneSH30071.03調製については表 1
GlutamaxILife Technologies35050-061-Glutamine
HycloneSH30034.01-
塩化カリウム (KCl)Fisher ScientificBP366-1の調製については表 1
シグマE0282プロトコルのステップ11を参照してください
NeurobasalLife Technologies21103-049-
ペニシリン/ストレプトマイシン(ペン/連鎖球菌)Life Technologies15140-122-
レチノイン酸(RA)シグマR2625で4°Cで保管する必要があります。この試薬は光感受性であるため、この試薬は光感受性
SH-SY5Y細胞ATCCCRL-2266-0.5
%トリプシン+ EDTAライフテクノロジーズ15400-054-
ファルコン35ミリメートルTC皿ファルコン(コーニングブランド)353001-
>シのを参照してください MaxGel Extracellular Matrix (ECM) solution を参照してください 暗闇

参考文献

  1. Christensen, J., Steain, M., Slobedman, B., Abendroth, A. Differentiated Neuroblastoma Cells Provide a Highly Efficient Model for Studies of Productive Varicella-Zoster Virus Infection of Neuronal Cells. Journal of Virology. 85 (16), 8436-8442 (2011).
  2. Gimenez-Cassina, A., Lim, F., Diaz-Nido, J. Differentiation of a human neuroblastoma into neuron-like cells increases their susceptibility to transduction by herpesviral vectors. Journal of Neuroscience Research. 84 (4), 755-767 (2006).
  3. Biedler, J. L., Roffler-Tarlov, S., Schachner, M., Freedman, L. S. Multiple Neurotransmitter Synthesis by Human Neuroblastoma Cell Lines and Clones. Cancer Research. 38 (11 Pt 1), 3751-3757 (1978).
  4. Encinas, M., Iglesias, M., et al. Sequential Treatment of SH-SY5Y Cells with Retinoic Acid and Brain-Derived Neurotrophic Factor Gives Rise to Fully Differentiated, Neurotrophic Factor-Dependent, Human Neuron-Like Cells. Journal of Neurochemistry. 75 (3), 991-1003 (2000).
  5. Otey, C. A., Boukhelifa, M., Maness, P. B35 neuroblastoma cells: an easily transfected, cultured cell model of central nervous system neurons. Methods in Cell Biology. 71, 287-304 (2003).
  6. LePage, K. T., Dickey, R. W., Gerwick, W. H., Jester, E. L., Murray, T. F. On the use of neuro-2a neuroblastoma cells versus intact neurons in primary culture for neurotoxicity studies. Critical Reviews in Neurobiology. 17 (1), 27-50 (2005).
  7. Shafer, T. J., Atchison, W. D. Transmitter, ion channel and receptor properties of pheochromocytoma (PC12) cells: a model for neurotoxicological studies. Neurotoxicology. 12 (3), 473-492 (1991).
  8. Yue, F., Cheng, Y., et al. A comparative encyclopedia of DNA elements in the mouse genome. Nature. 515 (7527), 355-364 (2014).
  9. Cheng, Y., Ma, Z., et al. Principles of regulatory information conservation between mouse and conservation between mouse and human. Nature. 515 (7527), 371-375 (2014).
  10. Stergachis, A. B., Neph, S., et al. Conservation of trans-acting circuitry during mammalian regulatory evolution. Nature. 515 (7527), 365-370 (2014).
  11. Lin, S., Lin, Y., et al. Comparison of the transcriptional landscapes between human and mouse tissues. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (48), 17224-17229 (2014).
  12. Coyle, D. E., Li, J., Baccei, M. Regional Differentiation of Retinoic Acid-Induced Human Pluripotent Embryonic Carcinoma Stem Cell Neurons. PLoS ONE. 6 (1), e16174(2011).
  13. Mostert, M. M., van de Pol, M., et al. Fluorescence in situ hybridization-based approaches for detection of 12p overrepresentation, in particular i(12p), in cell lines of human testicular germ cell tumors of adults. Cancer Genetics and Cytogenetics. 87 (2), 95-102 (1996).
  14. Hu, B. -Y., Weick, J. P., et al. Neural differentiation of human induced pluripotent stem cells follows developmental principles but with variable potency. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (9), 4335-4340 (2010).
  15. Biedler, J. L., Helson, L., Spengler, B. A. Morphology and growth, tumorigenicity, and cytogenetics of human neuroblastoma cells in continuous culture. Cancer Research. 33 (11), 2643-2652 (1973).
  16. Påhlman, S., Ruusala, A. I., Abrahamsson, L., Mattsson, M. E., Esscher, T. Retinoic acid-induced differentiation of cultured human neuroblastoma cells: a comparison with phorbolester-induced differentiation. Cell Differentiation. 14 (2), 135-144 (1984).
  17. Xie, H., Hu, L., Li, G. SH-SY5Y human neuroblastoma cell line: in vitro cell model of dopaminergic neurons in Parkinson’s disease. Chinese Medical Journal. 123 (8), 1086-1092 (2010).
  18. Kovalevich, J., Langford, D. Considerations for the use of SH-SY5Y neuroblastoma cells in neurobiology. Methods in Molecular Biology. 1078, Clifton, N.J. 9-21 (2013).
  19. Påhlman, S., Hoehner, J. C., et al. Differentiation and survival influences of growth factors in human neuroblastoma. European Journal of Cancer. 31 (4), 453-458 (1995).
  20. Cheung, Y. -T., Lau, W. K. -W., et al. Effects of all-trans-retinoic acid on human SH-SY5Y neuroblastoma as in vitro model in neurotoxicity research. Neurotoxicology. 30 (1), 127-135 (2009).
  21. Agholme, L., Lindström, T., Kågedal, K., Marcusson, J., Hallbeck, M. An in vitro model for neuroscience: differentiation of SH-SY5Y cells into cells with morphological and biochemical characteristics of mature neurons. Journal of Alzheimer's disease: JAD. 20 (4), 1069-1082 (2010).
  22. La Monica, N., Racaniello, V. R. Differences in replication of attenuated and neurovirulent polioviruses in human neuroblastoma cell line SH-SY5Y. Journal of Virology. 63 (5), 2357-2360 (1989).
  23. Cordey, S., Petty, T. J., et al. Identification of Site-Specific Adaptations Conferring Increased Neural Cell Tropism during Human Enterovirus 71 Infection. PLoS Pathog. 8 (7), e1002826(2012).
  24. Xu, L. -J., Jiang, T., et al. Global Transcriptomic Analysis of Human Neuroblastoma Cells in Response to Enterovirus Type 71 Infection. PLoS ONE. 8 (7), e65948(2013).
  25. Luo, M. H., Fortunato, E. A. Long-term infection and shedding of human cytomegalovirus in T98G glioblastoma cells. Journal of Virology. 81 (19), 10424-10436 (2007).
  26. Sun, Z., Yang, H., Shi, Y., Wei, M., Xian, J., Hu, W. Establishment of a cell model system of herpes simplex virus type II latent infection and reactivation in SH-SY5Y cells. Wei Sheng Wu Xue Bao = Acta Microbiologica Sinica. 50 (1), 98-106 (2010).
  27. Yun, S. -I., Song, B. -H., et al. A molecularly cloned, live-attenuated japanese encephalitis vaccine SA14-14-2 virus: a conserved single amino acid in the ij Hairpin of the Viral E glycoprotein determines neurovirulence in mice. PLoS pathogens. 10 (7), e1004290(2014).
  28. Garrity-Moses, M. E., Teng, Q., Liu, J., Tanase, D., Boulis, N. M. Neuroprotective adeno-associated virus Bcl-xL gene transfer in models of motor neuron disease. Muscle & Nerve. 32 (6), 734-744 (2005).
  29. Kalia, M., Khasa, R., Sharma, M., Nain, M., Vrati, S. Japanese Encephalitis Virus Infects Neuronal Cells through a Clathrin-Independent Endocytic Mechanism. Journal of Virology. 87 (1), 148-162 (2013).
  30. Haedicke, J., Brown, C., Naghavi, M. H. The brain-specific factor FEZ1 is a determinant of neuronal susceptibility to HIV-1 infection. Proceedings of the National Academy of Sciences. 106 (33), 14040-14045 (2009).
  31. Xu, K., Liu, X. -N., et al. Replication-defective HSV-1 effectively targets trigeminal ganglion and inhibits viral pathopoiesis by mediating interferon gamma expression in SH-SY5Y cells. Journal of molecular neuroscience: MN. 53 (1), 78-86 (2014).
  32. Oh, J., Fraser, N. W. Temporal association of the herpes simplex virus genome with histone proteins during a lytic infection. Journal of Virology. 82 (7), 3530-3537 (2008).
  33. Stiles, K. M., Milne, R. S. B., Cohen, G. H., Eisenberg, R. J., Krummenacher, C. The herpes simplex virus receptor nectin-1 is down-regulated after trans-interaction with glycoprotein D. Virology. 373 (1), 98-111 (2008).
  34. Thomas, D. L., Lock, M., Zabolotny, J. M., Mohan, B. R., Fraser, N. W. The 2-kilobase intron of the herpes simplex virus type 1 latency-associated transcript has a half-life of approximately 24 hours in SY5Y and COS-1 cells. Journal of Virology. 76 (2), 532-540 (2002).
  35. Handler, C. G., Cohen, G. H., Eisenberg, R. J. Cross-linking of glycoprotein oligomers during herpes simplex virus type 1 entry. Journal of Virology. 70 (9), 6076-6082 (1996).
  36. Nicola, A. V., Hou, J., Major, E. O., Straus, S. E. Herpes Simplex Virus Type 1 Enters Human Epidermal Keratinocytes, but Not Neurons, via a pH-Dependent Endocytic Pathway. Journal of Virology. 79 (12), 7609-7616 (2005).
  37. Korecka, J. A., van Kesteren, R. E., et al. Phenotypic characterization of retinoic acid differentiated SH-SY5Y cells by transcriptional profiling. PloS One. 8 (5), e63862(2013).
  38. Presgraves, S. P., Ahmed, T., Borwege, S., Joyce, J. N. Terminally differentiated SH-SY5Y cells provide a model system for studying neuroprotective effects of dopamine agonists. Neurotoxicity Research. 5 (8), 579-598 (2004).
  39. Qiao, J., Paul, P., et al. PI3K/AKT and ERK regulate retinoic acid-induced neuroblastoma cellular differentiation. Biochemical and Biophysical Research Communications. 424 (3), 421-426 (2012).

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