高密度バーコード抗体マイクロアレイのフローパターンガイド作製

Summary

このプロトコルは、細胞シグナル伝達研究やバイオマーカー検出の潜在的なアプリケーションと大​​規模の製造、多重化された二次元のDNAまたは抗体配列​​を、概要を説明します。

Abstract

抗体マイクロアレイは、十分に開発された技術として、現在、他のいくつかの確立された、または新興のハイスループット技術によって挑戦されています。本稿では、抗体マイクロアレイ技術を新たな製造手法を用いて革新し、新たな特徴を導入する。高密度抗体マイクロアレイの作製は、一本鎖DNAの垂直配向フローパターニングと、その後のDNA-抗体コンジュゲートによる変換によって行われます。このプロトコールでは、DNAのフローパターニング、DNA-抗体複合体の作製と精製、および作製されたマイクロアレイの品質評価における重要なステップを概説しています。均一性と感度は従来のマイクロアレイと同等ですが、当社のマイクロアレイ製造はアレイプリンターの支援を必要とせず、ほとんどの研究室で実行できます。もう一つの大きな利点は、当社のマイクロアレイユニットのサイズが印刷アレイのサイズの10分の1であり、一般的なマイクロチップ設計とインターフェースする際に、単一細胞から機能タンパク質を分析する独自の機能を提供することです。このバーコード技術は、バイオマーカー検出、細胞シグナル伝達研究、組織工学、およびさまざまな臨床アプリケーションに広く採用できます。

Introduction

抗体マイクロアレイは、広くタンパク質バイオマーカー^1-3を含む標的タンパク質の存在を調べるために何十年もプロテオミクス研究に使用されています。このフィールドは現在、質量分析（MS）のような他のハイスループット技術から大きな課題に直面しているが、これらのデバイスは、他のアッセイと、単純なデータ解釈と簡単なインターフェイスを提供する主な理由は、まだ抗体マイクロアレイの有用性の余地があります。近年では、マイクロチップの足場へのマイクロアレイの統合は、抗体マイクロアレイを^4-7を繁栄するための新しい機会を提供してきました。例えば、単一の細胞マイクロチップに組み込まれたバーコードのマイクロアレイは、細胞コミュニケーション研究^8,9で使用されています。この技術は、他の利用可能なマイクロアレイ技術上の独特の利点を有します。従来のマイクロアレイelemenで使用される典型的な150μmのサイズよりもはるかに小さい10-100ミクロンで配列要素を備えていTS。より小さな配列要素の構造は、系統的なフローパターン化手法を用いて達成され、これは、単一細胞の分泌タンパク質及び細胞内タンパク質を検出することができるコンパクトなマイクロアレイを生じます。もう一つの利点は、単純な楽器フリーのセットアップを使用することです。ほとんどの研究所や中小企業は、マイクロアレイコア施設にアクセスすることができないかもしれないので、これは特に重要です。このようなバーコードの抗体マイクロアレイは、強化されたアッセイのスループットを備え、従来のサンドイッチ酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA ^8）のそれに匹敵する高い感度と特異性を達成しながら、単一の細胞上に高度に多重化されたアッセイを実行するために使用することができます。この技術は、腫瘍細胞^の13膠芽細胞腫^9-11からのタンパク質、T細胞^{12を検出し} 、そして循環中の多数のアプリケーションを発見しました。あるいは、単独でバーコードDNAマイクロアレイは、模倣のために、ニューロンおよび星状細胞の正確な位置決めに利用されています脳組織¹⁴ の in vivoでのアセンブリをる。

このプロトコルは、実験工程と、流体試料中の単一細胞中のバイオマーカーの検出において潜在的な用途を有する二次元（2-D）バーコード、抗体マイクロアレイの構築ブロックに焦点を当てます。技術は、アドレス可能な一本鎖、一次元（1-D）DNAマイクロアレイに基づいてガラス基板上に、空間的にパターニングされた直交するオリゴヌクレオチドを​​用いて構築しました。並列流路を流れパターニング工程において使用される場合、1次元パターンが形成され、このようなパターンは、1-D統一商品コード（UPC）バーコードと視覚的に類似した離散的なバンドとして現れます。 2-Dの建設（N×M個）抗体アレイ- 2-Dクイックレスポンス（QR）マトリックスコードを連想させるには-より複雑なパターン化戦略を必要とするが、より高い密度^8,15での抗体の固定化を可能にします。製作第二に垂直な第一のパターンで、二つのDNAパターニング工程を必要とします。これらの二つのパターンの交点は、アレイのn個のx m個の要素を構成しています。戦略フローパターニングに利用一本鎖DNA（ssDNA）の配列を選択することにより、所与の配列内の各要素は、特定のアドレスが割り当てられます。この空間参照は、マイクロアレイスライド上の蛍光シグナルを区別する必要です。一本鎖DNA配列をDNAにコードされた抗体ライブラリー（DEAL ^16）と呼ばれるプラットフォームを形成し、相補的DNA抗体コンジュゲートの取り込みを介して抗体の配列に変換されます。

このビデオプロトコルは、2つの方向で準備を含むn×m個抗体アレイポリジメチルシロキサン（PDMS）、バーコードの型、フロー・パターニングのssDNAを作成し、抗体-オリゴヌクレオチドディール複合体を調製し、3に3×3のDNA配列を変換する際に重要なステップを説明×3抗体アレイ。

Protocol

注意：このプロトコルで使用されるいくつかの化学物質は刺激物であり、皮膚との接触の場合には危険です。材料安全データシート（MSDS）を参照してくださいし、このプロトコルを実行する前に、適切な保護具を着用します。ステップ（1.1.1）において使用されるピラニア溶液は、非常に腐食性であり、そして攪拌しながら酸をゆっくりと過酸化物を添加することにより調製されるべきです。ヒュームフードで細心の注意を払ってこのソリューションを処理します。適切な眼の保護および耐酸性手袋を使用してください。トリメチルクロロシラン（TMCS）は（1.1.6）の後に任意の工程で使用される腐食性、可燃性の化学物質です。ドラフト内でこの化学物質を処理します。

注意：粒子状物質による汚染を最小限にするためにクリーンルーム内でのバーコードスライド製造および臨界流パターニングの手順を実行します。ダスト粒子は、PDMSモールドのポートとマイクロチャネルを遮断し流れパターン形成を妨害し得ます。

ワンdimensiona 1.建設リットルのDNAバーコードのスライド

1. バーコードフローパターンに対するSU-8マスターの調製
   注：垂直フローパターンための図（ 図1A-B）は、コンピュータ支援設計（CAD）ソフトウェアを使用して作成されます。これらのパターンは、クロムフォトマスク上に描画されます。マスクの透明領域は、SU-8マスターの特徴に対応します。
   1. 96°Cに加熱し、1〜30％の_H 2 O _2（ピラニア溶液）：完全に3 H ₂ SO ₄の混合物でシリコンウエハ（直径100mm）をきれい。脱イオン水およびイソプロピルアルコールでウエハを洗浄し、窒素ブローガンで乾燥しました。
   2. ウエハ上のSU-8 2025フォトレジストの約4ミリリットルを注ぎます。均一3,000rpmで、30秒、500 rpmで10秒間、ウエハ上のフォトレジストを広げるために、プログラム可能なスピンコーターを使用してください。これは〜25μmの厚さのフォトレジスト層を作成します。徐々に停止する前に減速し、紡糸できるように - これは舞にありますあっても、ウェハの表面上のコーティングntain。
   3. その後、95℃で5分間、65℃で1分間ホットプレート上にコーティングされたウェハ、焼きます。このステップでは、コーティングが固化することができます。 5分間室温に冷却。
   4. フォトレジストコート上クロムマスク（ 図1C）を配置します。 20秒間の近紫外光（350〜400ナノメートル、露光エネルギー150-160ミリジュール/ ^cm 2）でのマスク機能を公開します。
      注意：クロムマスクのデザインを50μmピッチで20ミクロン幅で、それぞれが20チャンネルが含まれています。チャネルは、反対側の端部へのパターンの一方の端部から巻線されています。要するに、20チャンネルが〜40 mmで〜20mmの幅の長さの長方形の領域をカバーします。各チャネルは、入口と出口に対応する2つの円形の特徴が隣接しています。入口と出口には互換性があります。
   5. 95℃で5分間、ホットプレート上で露光されたウエハを焼きます。徐々に室温まで冷却します。
   6. 撹拌しながら、SU-8現像液にウェハを浸し5分間。イソプロピルアルコールに続く新たなSU-8の開発者の小さな部分を有するウェハを、洗浄します。窒素ブローガンを用いてウェハを乾燥させます。 30分間200℃のホットプレート上のウエハベークハード、ウエハを室温に徐々に冷却します。
      注：白色フィルムはこの工程での洗浄の後に観察された場合の開発はより長い時間行うことができます。
      オプション：10分間閉じたペトリ皿に蒸気をトリメチルクロロシランに曝すことにより、SU-8マスターSilanize。
2. PDMSバーコード型の調製
   1. 4.0グラムの硬化剤と40.0グラムのシリコーンエラストマーベースを組み合わせます。 10分間激しくプレポリマー混合物を攪拌します。真空下で20分間ドガ。
      注：1（ベース：硬化剤）の質量比が一般的なルールとして、10を使用します。
   2. バーコードパターンのSU-8マスターを有するシリコンウェハを含むペトリ皿にプレポリマーを注ぎます。 PDMS混合物の高さは約7.5ミリメートル以上である必要があります。ペトル中の混合物を脱気私は、PDMSを硬化させるために75℃で1時間、混合物を焼くその後、残りの気泡を除去するために二度目の一品。
      注：これは、ステップでPDMSモールドの穴にピン/チューブの挿入時に、PDMS-ガラス結合にあまりテンションを加えることを避けるために〜7.5ミリメートル以上で、PDMSスラブの十分な厚さを維持することが重要である（1.3.3.1）
   3. メスを使用して、慎重にバーコード型の機能が含まれており、ウエハからスラブをはがしPDMSスラブの領域の周囲にカット。
   4. PDMSのバーコード型の所望の形状を得るために、スラブのエッジをトリム。プランジ​​ャーで生検パンチを使用して金型を介して20穴（1.0 mmの直径）をパンチ。穴がバーコードパターンの円形の特徴の位置が合っていることを確認します。これらの穴は、入口と出口としての役割を果たす。
3. ポリ-L-リジンの一次元パターニング（PLL）
   1. 窒素ブローガンを使用して、ポリ-L-リジンコートスライドガラスの表面についたほこりを取り除きます。 ATTACH清浄なスライドガラスにPDMSモールド。金型とスライドのエッジが整列していることを確認してください。
   2. PDMSモールドとPLLコートスライドとの間の結合を強化するために75℃で1.5時間焼きます。一方、（0.5mmの内径および1.5mmの外径を有する、4インチ片に3）柔軟なポリエチレン管の20個を準備します。
      注意：チューブの個数は、PDMSバーコードの型に注入口の数に対応します。チューブは、カップルに圧力調整器を装備した窒素ガスのタンクへのPDMSのバーコード型のチャネルを提供しています。
   3. チューブの各部分の一端に、ステンレス鋼中空ピン（1 mmの直径）を添付してください。吸引滅菌濾過チューブを1cm以上が溶液で満たされるまで、ポリ-L-リジンピンを通して溶液。
      1. PDMSのバーコード型（ 図1E）のインレットに（溶液で満たされたチューブに接続された）ピンを固定します。にチューブのもう一方の端を取り付けます圧力調整窒素タンクのセットアップ。解決策は、少なくとも6時間、0.5〜1 PSIの圧力範囲を使用して金型を通って流れることを可能にします。
         注：すべてのフローパターン化手順については（1.3.3）のステップを参照してください。
4. ssDNAを¹⁴の一次元のパターニング
   注：後続のステップで使用されるリン酸緩衝生理食塩水（PBS）を137mMの塩化ナトリウム、10mMののNa ₂ HPO _4、2mMのKH ₂ PO ₄緩衝液のpHは7.4から調製されます。
   1. PBS中の2 mMのビス（スルホスクシンイミジル）スベレート（BS3）溶液を調製します。 PBSまたは超純水にA、B、Cの一本鎖DNA（5'-アミンは、80個のヌクレオチドを修飾された）の300μMの溶液を調製します。
      注意：N個のヒドロキシスクシンイミドエステルは、簡単に加水分解を受けるため、製造後約30分以内BS3ソリューションを使用してください。
   2. 2 mMのビス（sulfosuccinimの2.5μlの300μMのA、B、またはCのssDNAの2.5μLを組み合わせます各チャンネルのPBSでidyl）スベレート。A、B、及びC DNAをそれぞれ、チャネル1、2に指定され、3ています。この順序は、3チャンネル（ 図2A）の残りのセットにも適用されます。
   3. ステップ（1.3.3）を実行します。この時間は、窒素源に結合PDMSモールドを、次いで、ステンレス鋼のピンを介して、ポリエチレンチューブに、5μlのBS3 / DNA溶液を吸引します。 BS3 / DNA溶液を約40分間またはチャネルが満たされるまでにバーコードの金型を通って流れることができるようにします。
   4. 一度、すべてのチャネルが満たされているフローを停止し、その後、室温で2時間のバーコードでBS3 / DNA溶液をインキュベートします。解決策が枯渇しないようにしてください。 75℃で1時間付されたバーコードのスライドとPDMSモールド焼きます。
      注：続くフローパターニング工程で位置合わせを容易にするために、バーコード・スライド上のチャネルパターンのエッジが概説されてもよいです。これは、慎重にダイヤモンドのScribを用いてガラス表面を引っ掻くことによって行われますガラススライドの底部上のアライメントマーカを生成するために、E。プロトコルの後の段階でのアライメントは、顕微鏡下でチェックすることができます。
   5. バーコードのスライドからPDMSモールドを削除します。超純水で1回と3回、0.01％SDSで軽くスライドを洗浄します。
      1. 顕微鏡スライドスピナーを使用して、バーコードのスライドを乾燥させます。その後の使用のためのクリーン50mlの遠心管のバーコードのスライドを保管してください。

バーコードのスライド上の一次元パターンの2検証

注：この検証プロトコルは、その後のフローパターニング工程の品質を評価する際に使用するために適合させることができます。

1. スライドのブロッキング
   1. PBS中の1％ウシ血清アルブミン（BSA）を準備します。使用前に0.45μmのシリンジフィルターを通して、このソリューションをフィルタリングします。ゲルローディングチップを用いて、バーコードスライドの一方の端部に1％のBSA溶液50μlを加えます。
   2. 1％のBSA solutをインキュベートRTで1時間イオン。
2. シアニン3（Cy3の）とのインキュベーションは、相補的DNAを抱合しました
   1. A '、B'のカクテルを用意し、C 'オリゴヌクレオチドは、一方の端部でのCy3とコンジュゲート。 '、B'、およびC 'Aの配列は、それぞれ、A、B、およびCのものと相補的です。たCy3-DNAの使用濃度は、0.1％のBSAで0.05μMです。
   2. スライドの同じエッジ上のDNAカクテル溶液の30μLを適用した後、ピペットでスライドからBSA溶液を除去します。 1時間室温でスライド上のCy3-DNAカクテルをインキュベートします。光退色からのCy3部分を保護するために暗所でこのインキュベーションステップを実行します。
3. 蛍光強度の分析
   1. Cy3-DNAカクテルをピペットで、1％のBSAでスライドを洗浄し、PBS、そして最終的に希釈したPBS（1 Pで50部品の超純水を当PBS）。スピナーを用いてスライドを乾燥させます。
   2. 蛍光顕微鏡またはマイクロアレイスキャナーを用いて蛍光（ 図2B）を観察します。マイクロアレイスキャナーを使用する場合は、532nmで、5ミクロンの画素サイズは、15％での光電子増倍管（PMT）450でゲインと電源にレーザ発振波長を設定します。

2次元（3×3）DNAアレイ¹⁴の3製作

1. PDMSバーコード型の調製
   1. 別のSU-8マスターを構成するが、この時間は、最初の設計のものに垂直な流れパターンをクロムマスクを使用する手順（1.1）を実行します。垂直パターンで新しいPDMSモールドを構築するための手順（1.2）を実行します。
2. 一本鎖DNAの二次元流れのパターニング
   1. 3×3アレイの場合、A'-I、B'-II、C'-III、A'-IV、B'-V、C'-VI、A'-VII、Bの150μMのストック溶液を準備'-viii、および3％BSA / PBSでC'-IXの DNA。これらのオリゴヌクレオチドは、「ブリッジング配列」（ 図2A）として機能します。オリゴヌクレオチド溶液（溶液1〜3）作業濃度は、各オリゴヌクレオチドのために、50μMであるように結合します。 表1に設けられたガイドを使用してください。
   2. 0.5 psiで1時間、全20チャンネルに3％BSA / PBSブロッキング溶液を流します。
   3. それぞれのフローソリューション1、2、およびチャネル1に3,2、および3、。 3チャンネルのセット以降については、この順序に従ってください。フローは、通常、約40分で完了します。 DNAがハイブリダイズすることができるように、2時間室温でDNA溶液をインキュベートします。
   4. ハイブリダイズしていないDNAを除去するために、0.5 psiで1時間、全20チャンネルに3％BSA / PBSブロッキング溶液を流します。 PDMSスラブをはがし、および希釈したPBS（1部PBSおよび50部の超純水）に続いて、3％BSA / PBSで一回、PBS中二回、中にスライドガラスを浸漬することにより得られたDNAマイクロアレイスライドを洗うこと。 D顕微鏡スライドスピナーを使用してスライドをRY。
   5. Cy3結合されているi 'は IXには'そのセクション内2.オリゴヌクレオチドと同様の第2の検証ステップ（ 図2C）を実行します。その後の使用のために50mlの遠心管中で3×3アレイスライドを保管してください。
      注：DNAマイクロアレイは、数ヶ月のために、デシケーター中、室温で保存することができます。

抗体配列に3×3のDNA配列の4の変換

1. 抗体、オリゴヌクレオチド（DEAL）コンジュゲートの調製
   1. 200mMのスクシンイミジル-4-ホルミル安息香酸（S-4FB）および無水Nで40 mMのスクシンイミジル-6- hydrazinonicotinamide（S-HYNIC）、N-ジメチルホルムアミド （DMF）の溶液を調製します。
   2. PBS中の捕捉抗体の7別々の溶液（1 mg / mlの）まで準備します。
      注：抗体のストック溶液は、アジ化ナトリウムの静菌が含まれている場合、スピン脱塩cを使用して、PBSで緩衝液交換を行います7 kDaの分子量カットオフ（MWCO）とolumns。
   3. I '、II'、III '、IV'、V '、VI'、およびVII 'DNAの別々の400μMの溶液を調製します。 1オリゴヌクレオチド配列に、各捕捉抗体を割り当てます。マイクロ遠心チューブ中のDMFの12.25μlの400μMDNAを40μlのを結合し、完全に混合するためにスピンダウン。
      1. 各DNA / DMF溶液に、DMF中の200 mMのS-4FBの2.3μlを添加します。捕捉抗体の各100μgのために、DMF中の40 mMのS-HYNICの2.25μlを添加します。
   4. 抗体/ S-HYNIC、室温で4時間DNA / S-4FBソリューションをインキュベートします。
   5. 抗体DNAのカップリング反応のための調製において、pH6でクエン酸緩衝液でそれらを洗浄することにより、新しいスピン脱塩カラム（各抗体に​​ついて、各DNA溶液について1つずつ）を調製。
   6. インキュベーションの4時間後、各抗体/ S-HYNICとDNA / S-4FB液のバッファー交換を行います。 S-4FB共役を組み合わせます i 'は、II'、III '、IV'、V '、VI'および抗体-S-HYNIC複合体とVII 'オリゴヌクレオチド。 RTで2時間混合物をインキュベートします。
   7. 4℃で反応O / Nインキュベートします。
2. 抗体 - オリゴヌクレオチド（DEAL）複合体の精製
   注：たSuperose 6 10/300 GLカラムを備えた標準FPLCシステムに高速タンパク質液体クロマトグラフィー（FPLC）を行い、抗体 - オリゴヌクレオチド複合体を精製します。
   1. 280 nmのFPLCシステムのUV検出器の波長を設定します。過剰のS-4FB-DNAからの抗体 - オリゴヌクレオチド複合体を分離するために、0.3ミリリットル/分でPBS（pH7.4）でのアイソクラティックフローを使用してください。
   2. コンジュゲートを含有する画分をプールし、10kDaのMWCOをスピンフィルターを使用して150μlの容量に画分を濃縮します。
3. 抗体の二次元パターニング
   1. マイクロチャンバーまたはマイクロウェル私たちと一緒に別のPDMSモールドを準備ステップる製造手順（1.2）。 PDMSモールドは、イムノアッセイのためのナノリットルウェルにマイクロリットルを含有することができます。
      注：流体試料中の一般的なバイオマーカーの検出のために、複数のウェルを有するPDMSモールドは、アレイスライドと交配されます。 PDMSモールドの特徴が検討されているシステムに依存します。例えば、単一の細胞実験からのタンパク質の検出は、0.15-NL体積のマイクロチャンバを含むPDMSモールドを用いて行うことができます。
   2. （オプション）、そのパターン化された表面を親水性にするために1.5分間プラズマにPDMSモールドクリーニング（18 W）を件名。プラズマ洗浄の前に、直接3×3アレイスライドに結合される他のすべての面をブロックするように粘着テープを使用しています。
      注：ステップ（4.3.2）は任意であるが、PDMSモールドは、単一細胞実験での使用を意図されている場合、通常行われています。
   3. PBS中の1％BSAでスライドをブロックし、その後、3×3アレイスライドとPDMSモールドメイト。室温で1時間インキュベートします。 Meanwhiル、抗体 - オリゴヌクレオチド結合体のカクテル（200μlの最終容量）を準備します。各コンジュゲートの使用濃度は、1％BSA / PBS中10μg/ mlです。
   4. その後、それによって抗体の配列へのDNA配列を変換し、複合体のオリゴヌクレオチド部分の3×3アレイ上の特定のスポットにハイブリダイズすることができるように、37℃で1時間インキュベートし、抗体-オリゴヌクレオチドカクテルを加えます。
   5. スライドをきれいにし、乾燥させる手順を繰り返し（3.2.4）。抗体アレイがすぐに使用された場合に最も高い感度を達成することができます。長期保管は、感度の低下をもたらすことができます。
4. タンパク質の検出
   1. 組換えタンパク質を再構成するか、濾過した細胞サンプルを準備します。
   2. カスタムデザインのチップをマイクロアレイメイト、そして1時間、PBS中の3％BSAで表面をブロックします。その後、BSA溶液を除去し、サンプルを適用し、2時間インキュベートします。
   3. PBS中3％BSAを用いてサンプルを洗浄3回その後、製品データシートによって提供される濃度で検出抗体を加えるdは。 2時間インキュベートします。
   4. PBSで3回、3％BSAにより検出抗体を洗い流し、次いで、1時間インキュベートしたを1μg/ mlで - ストレプトアビジンシアニン5（Cy5の）を加えます。
   5. スキャン用のスライドをきれいにし、乾燥させる手順を繰り返し（3.2.4）。

Results

PDMSモールド（ 図1A-1B）のデザインは、CADプログラム（AutoCADの）を使用して描かれました。フローパターニングのための機能チャネルを示す2つのデザイン、水平および垂直方向の1 1。各デザインの左右の部分が対称的です。それらのいずれかは、入口または出口である可能性があります。 20チャネルの各々は、一端から他端にはすべての方法を巻いています。各デザインは、クロムフォトマスク（ 図1C）に印刷されています。ウェハ上に作製SU-8マスターは、 図1Dに示されています。 PLLまたはDNAのフローパターン形成を容易にするために、PDMSモールドは、窒素ガス流のセットアップ（ 図1E）に結合させました。

このプロトコルで使用される3流パターニング工程があります。後続のステップは、オリゴヌクレオチド溶液を導入しな...

Discussion

フローパターン設計は、2-Dのマイクロアレイの製造における最初の重要なステップです。ガラス基板上に2つの重複DNAパターンを生成するために、最初の設計のチャネルの特徴は、第二の（ 図1A-B）のものに対して垂直であるべきです。デザインはまた、マイクロアレイの下流の適用を検討してください。単一細胞分析の場合には、マイクロアレイは、したがって、チャネルの寸法が2次元配列と整列マイクロチャンバとの互換性が作られている、マイクロチャンバー内に封入単一細胞からタンパク質を検出するために使用されます。各設計は、フォトマスク上にレンダリングされ、標準的なフォトリソグラフィ技術は、シリコンウェハ（ 図1C-D）でSU-8のチャネルの機能を製造するために使用されます。これは、成形PDMSのマスターとして機能します。金型が製造されたら、それはPLLでコーティングしたスライドに接着した後、窒素ガス流のセットアップ（ 図1E）と結合されます。セットアップたち使用が簡単であり、容易に圧力調整窒素ガス源と、任意の実験室に組み込ま...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
シルガード184シリコーンエラストマーベース	ダウコーニング	3097366-1004
シルガード184シリコーンエラストマー硬化剤	ダウコーニング	3097358-1004
SU-8 2025フォトレジ	MicroChem	Y111069
シリコンウェーハ	University Wafers	452
Poly-L-lysineコーティングガラススライド	Thermo Scientific	C40-5257-M20
Oligonucleotides	Integrated DNA Technologies		*Integrated DNA Technologiesからのカスタムオーダー、表2を参照してください。
ポリ-L-リジン接着剤原液	ニューカマーサプライ	1339
Bis (スルホスクシンイミジル) suberate (BS3)	Thermo Scientific	21585
1x リン酸緩衝生理食塩水、pH 7.4	Quality Biological	114-058-101
Äkta Explorer 100 高速タンパク質液体クロマトグラフィー(FPLC)システム	GE(アマシャムファルマシア)	18-1112-41
Superose 6 10/300 GLカラム	GEヘルスケアライフサイエンス	17-5172-01
キャプチャ抗体	さまざまな	様々	*抗体の選択はアプリケーションによって異なります
スクシンイミジル-6-ヒドラジノ-ニコチンアミド(S-HyNic)	ソルリンク	S-1002
スクシンイミジル-4-ホルミルベンズアミド(S-4FB)	ソルリンク	S-1004
N,N-ジメチルホルムアミド	シグマ・アルドリッチ	227056
クエン酸、無水	アクロス	42356
水酸化ナトリウム	フィッシャー・サイエンティフィック	S318
アミコン ウルトラ スピンフィルター 10 kDa MWCO	EMD ミリポア	UFC201024
スピンコーター	ローレル・テクノロジー	ズ WS-650-MZ
プランジャー付きバイオプシーパンチ(直径1.0mm)	Ted Pella, Inc.	15110-10
ダイヤモンドスクライブ(スタイル60)	SPI供給	6004
トリメチルクロロシラン	シグマアルドリッチ	92361