方法論記事

ガラスの表面機能を介して、標的細胞の単離方法

DOI：

10.3791/54315

⸱

2016年9月20日

 ,  ,  ,  , 
1Department of Bioengineering, University of Illinois at Urbana-Champaign, 2Department of Liberal Arts & Sciences, University of Illinois at Urbana-Champaign, 3Department of Biomedical Engineering, Illinois Institute of Technology

この記事について

サマリー

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

このプロトコルは、特定の目的の細胞タイプを分離するための、デスチオビオチン、ストレプトアビジン、およびAPTESシステムのカスタマイズ可能な表面機能化について説明しています。さらに、この原稿では、このプロセスのアプリケーション、最適化、および検証について説明します。

要約

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個別化医療の採用と進歩に対する制限要因の一つは、患者から患者への表現における個々のニュアンスを調査する診断ツールを開発できないことです。このニッチを埋めるために細胞を分離しようとする現在の方法論は、生理学的発現の混乱をもたらし、分離技術は診断ツールとして役に立たなくなっています。このプロトコルでは、細胞の捕捉と放出のための表面の機能化と最適化について説明します。この官能基化された表面は、ビオチン化抗体とアミノシラン(APTES)、デスチオビオチン、ストレプトアビジンで官能基化されたガラス表面を統合しています。ビオチンの導入により細胞の放出が促進され、表面に捕捉された細胞の回収と精製が可能になります。この放出は、二次部分であるデスチオビオチンを標的とすることで行われ、その結果、はるかに穏やかな放出パラダイムが得られます。このように、過酷な試薬とせん断力が減少するため、細胞発現の変化が減少します。 官能基化された表面は、単一細胞混合物中の細胞の最大80%を捕捉し、デュアルセル混合物では50%の捕捉が実証されています。この技術の異種移植片および癌分離研究への応用が調査されています。プレートリーダーやImageJ分析などの表面検証のための定量化技術についても説明します。

概要

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

現在のベンチトップ細胞分離手法（ 例えば 、蛍光活性化細胞は1ソート、レーザーキャプチャーマイクロダイセクション2、免疫磁気ビーズ分離1）が準備し、ソートの数時間かかることがあります。これらの大きな時間スケールは、生理学的応答3の代表ではない分析の結果、生理学的応答および発現レベルに影響を与えることができます。システムは、迅速かつ効率的な生物医学的用途のための細胞の単離及び濃縮を改善するために、細胞表面受容体レベルを中断することなく、特定の細胞型を分離することができる必要とされています。したがって、我々のアプローチの理論的根拠は、細胞単離のための穏やかなアプローチを開発することです。

「ラボオンチップ」概念が速く（時間・ツー・分）細胞単離を桁違いの約束を提供し、最も頻繁に表面上に細胞を捕捉し、細胞や細胞内のコンテを解放することを含みます4,5物理的または化学的方法6を通じてNTS。これらのアプローチは、このようなRNA発現9-11、あるいはin vitro培養12,13のための細胞を提供する識別、タンパク質7,8式を識別するなど、いくつかの利点を提供していますが、これらの技術の多くは、このような原因で細胞受容体プロファイリングなどの診断に翻 ​​訳することはできませんそれらの非生理的な環境です。このようなコラゲナーゼなどの酵素リフティング剤もこれらのリフティングエージェントが正確な生理学的データを生成しません使用する細胞受容体の定量化技術を意味し、これらの受容体の量14,15に影響を与えることができます。細胞溶解は、天然の表面受容体との間の差別化を防止し、あらかじめ16を内在したもの。このプロトコルは、細胞単離のための高速かつ穏やかなアプローチを説明しています。

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プロトコル

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1.ガラスの表面を洗浄および試薬の準備

  1. それをきれいにするために、50％のパワーで5分間酸素プラズマ機でガラス表面を置きます。
  2. コニカルチューブにAPTESを50μlとエタノールの2.45ミリリットルを追加することにより、再構成された2.5ミリリットルの2％（3-アミノプロピル）トリエトキシシラン（APTES）溶液を調製します。

2. APTESとDSB機能化

  1. 表面にAPTESソリューションを追加します。 8ウェルプレートウェル当たりピペットを150μl。 24ウェルプレート用のウェルあたり100μLを加えます。 60×15ミリメートルのガラス皿のための1.1ミリリットルをピペット。蒸発およびAPTES液の偏在を防止するために、表面を覆います。 APTES層の均一な分布を作成し、室温で50分間、プラットフォームシェーカー上で表面を置きます。
    注：APTES表面の第1の層を形成するアミノシランです。異なる表面を使用する場合、ヒューリスティック表面を覆うために必要な溶液の量を決定します。
  2. 8ウェルプレートおよび24ウェルプレートのために2時間55℃に加熱する：表面がシェーカー上でありながら、オーブンの温度を選択します。 1時間90℃に加熱ガラスのみ皿。
  3. エタノールで表面を洗浄します。
    1. 使用される表面に基づいて参照することにより、必要なエタノールの量を管理します。 8ウェルプレート各ウェルに150μlのエタノールを追加します。 24ウェルプレート各ウェルに125μlのエタノールを追加します。ガラス皿のために1.1ミリリットルのエタノールを追加します。
    2. このようなウェルのコーナーとして、固定点から液体を排出し、描画することで表面をすすぎます。先端が直接表面に指摘されないように、約70°の角度ピペットを保持します。エタノールを使用して二回以上すすいでください。
      注：ガラスボトムウェルプレートのいずれかが、その中に任意のプラスチックを持っている場合は、プラスチックが溶融してワープするために開始されますように、65℃以上、それらを加熱することはありません。
  4. タンクから供給100％窒素ガスで乾燥しました。 Oで表面を配置ヴェン。
  5. 2462.5にジメチルスルホキシド（DMSO）の37.5μlの1.5 mg / mlでDSBを組み合わせることにより、D-デスチオビオチン（DSB）溶液2.5ミリリットルを準備、および5mg / mlの1-エチル-3-（3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（EDC） 0.1 M 4モルホリノエタンスルホン酸水和物（MES）（pHが6）バッファμlの。その後、両方のソリューションを組み合わせます。
  6. DSBとEDCとの反応をクエンチするために溶液中に、15分後、2-βメルカプトエタノールの1μLを加えます。オーブンからガラス表面を官能基化ホットAPTESを削除します。冷却するためにガラス表面のために5〜10分待ちます。
  7. MESは、表面に基づいた量を用いて、リンスする表面をバッファ加えます。 MESは、8ウェルプレート各ウェルにバッファー150μlを添加します。 MESは、24ウェルプレート各ウェルにバッファー125μlを添加します。ガラス皿のために1.1ミリリットルのMES緩衝液を追加します。
  8. このようなウェルのコーナーとして、固定点から液体を排出し、描画することで表面をすすぎます。先端が直接指摘されていないので、約70°の角度ピペットを保持します表面に。 MES緩衝液で2回以上すすいでください。
  9. それらをインキュベートすることを可能にするために表面にDSBソリューションを適用します。 8ウェルプレートウェル当たり150μlのDSBのソリューションを追加します。 24ウェルプレートのために、ウェルあたり100μlのDSBのソリューションを追加します。ガラス皿DSBソリューションの1.1ミリリットルを追加します。
  10. DSBは、ペトリ皿の内側に湿らせたペーパータオルでガラス表面を覆われて置きます。覆い、18-24時間、4℃の冷蔵庫でインキュベートします。

3.ストレプトアビジン官能

  1. 1.0×リン酸緩衝生理食塩水（PBS）の1ミリリットルで、各ガラス表面を3回洗浄します。このようなウェルのコーナーとして、固定点から液体を排出し、描画することで表面をすすぎます。先端が直接表面に指摘されないように、約70°の角度ピペットを保持します。 0.4 mg / mlで（推奨）へのストレプトアビジン（SAV）ストック溶液を希釈します。
    注：これは希釈およびリンスのための媒体として使用することができるように、PBSに等張性です。 PBSは、SAのための溶媒として使用されますV、およびそのため、表面に結合するSAVの能力には影響しません。
  2. ガラスの下部にあるフォームの薄い層は、表面に基づく溶液の量を選択するように、表面に均等にSAV液の0.4 mg / mlとを適用します。 8ウェルプレートについては、ウェル当たり150μlの0.4 mg / mlでSAVのソリューションを追加します。 24ウェルプレートの場合は、ウェル当たり100μlの0.4 mg / mlでSAVのソリューションを追加します。ガラス皿のために、1.1ミリリットル0.4 mg / mlでSAVのソリューションを追加します。
  3. 覆い、水分を保持するために14センチメートルペトリ皿にプレートを移動します。 18-24時間冷蔵庫でペトリ皿をインキュベートします。
    注：これは、各表面上にAPTES、DSB、およびSAVの一貫性のあるボリュームを利用することが不可欠です。
  4. SAVを除去するために、PBS150μlで各ガラス表面を3回洗浄します。このようなウェルのコーナーとして、固定点から液体を排出し、描画することで表面をすすぎます。先端が直接表面に指摘されないように、約70°の角度ピペットを保持します。
  5. ペーパータオルワットをぬらしi番目の脱イオン水、ウェル中の水分を保持するためにプレートを囲む14センチメートルペトリ皿にペーパータオルを平らに置きます。井戸を含むペトリ皿をカバーしています。必要になるまで4℃バイオセーフティレベル1（BSL-1）冷蔵庫でペトリ皿をインキュベートします。

4.細胞捕捉およびリリース

  1. 実験のために意図された細胞のT175フラスコ（複数可）から開始します。フラスコ（複数可）からメディアを吸引除去します。室温PBS 5mlで残りのメディアを洗浄します。フラスコ（複数可）から吸引し、PBS。
  2. 細胞のT-175フラスコに、このような細胞解離ソリューションなどの非酵素的なリフティング剤の10ミリリットルを追加します。フラスコから細胞を持ち上げを可能にするために、6分間インキュベーターにフラスコを置きます。
  3. リフティング剤を不活性化するために、6分後、冷たいハンクス液（材料の一覧を参照してくださいHBSS）の10ミリリットルを追加します。血球計を使用して溶液中の細胞の数をカウントするために、細胞を20μlを取り出します。
    注：FUNCに応じて、捕獲実験に用いた表面をtionalized、必要な細胞の数が変化します。官能基化8ウェルプレートの場合は、十分に300,000細胞を使用しています。官能基化ガラス皿のために、110万セルを使用。官能化24ウェルプレートの場合は、125,000細胞が推奨されています。細胞計数の詳細については、サプリメントに含まれています。
  4. 手順を繰り返して、4.1- 4.3細胞の別のフラスコのために、少数の細胞は、実験のために必要以上に存在している場合。溶液中の細胞の総数を取得するために、細胞懸濁液と再集計のセルを結合します。
  5. 濃縮された細胞のペレットを得るために、4℃で5分間、500×gで遠心分離して細胞懸濁液をスピンダウン。その後、スピンダウンした細胞からの上清を吸引し、算出されたボリュームを追加、1mlあたり1×10 6細胞の濃度を得るために、細胞懸濁液に追加するHBSSの適切な量を見つけます。このボリュームは、追補の式を用いて計算することができます。
  6. 目を再懸濁するために上下にピペット（粉薬）抗体結合を減少させることができる電子細胞溶液中および溶液中の細胞凝集を減少させます。別々の制御と実験ソリューションにセルラーソリューションを分割します。コンポーネントと計算のための補足ファイルを表示します。
  7. 補足ファイルに記載されているそれぞれの細胞溶液にビオチン化抗体を追加します。転倒ミキサーで4℃で30分間インキュベートします。
    注：MCF7GFP細胞については、0.5 mg / mlでのhIgGまたは0.5 mg / mlでHLA-ABC抗体を推奨します。 RAWマクロファージについては、1mg / mlのmCD11b希釈の違いを考慮して半分の容量で推奨されています。ヒト臍帯静脈内皮細胞（HUVEC）については、0.5 mg / mlでhCD31をお勧めします。
  8. HBSSで官能ガラス表面を洗浄します。この実験では、8ウェルプレートをお勧めします。
    1. 8ウェルプレート各ウェルに150μlのHBSSを追加します。 HBSSを用いて二回以上すすいでください。このようなウェルのコーナーとして、固定点から液体を排出し、描画することで表面をすすぎます。先端が直接表面に指摘されないように、約70°の角度ピペットを保持します。 4℃で冷間保管してください。
  9. ウェルに細胞のソリューションを追加し、シェーカー上で、氷上でインキュベートした細胞のために45分を待ちます。補足で説明したように計算されたボリュームを使用することによって、滅菌HBSS中のビオチンの溶液を作ります。
  10. HBSSを用いてガラスウェルから細胞溶液を除去します。
    1. 静か各ウェルに150μlのHBSSをピペット。その後、HBSSをピペット。このようなウェルのコーナーとして、固定点から液体を排出し、描画することで表面をすすぎます。先端が直接表面に指摘されないように、約70°の角度ピペットを保持します。
    2. さらに2回繰り返します。洗浄後、湿潤細胞を維持するためにウェルにHBSSを追加します。
  11. 各ウェルのそれぞれのリリースに20mMのビオチン溶液を150μlのを追加し、反応を可能にするために20分を待ちます。
  12. 非特異的に結合した細胞を思い出し前述した、その後、蛍光標識された細胞を用いた場合、蛍光画像に細胞を進むにつれて、HBSSで洗浄することによって秒。また、フラスコ内の画像、生細胞（対照としては、ウェル中の細胞と比較します）。緑色蛍光タンパク質（GFP）トランスフェクトされた細胞を使用する場合、励起は470nmでなり、そして発光は515nmです。

5.抗体の最適化：抗体滴定

  1. ステップ4.1- 4.3で説明したようにT75またはT175フラスコから細胞を持ち上げることから始めます。
    注：これらのボリュームは、24ウェルプレートのために校正されていますが、ヒューリスティックなテストを通じて任意のガラス官能表面に合わせて変更することができます。代表的な抗体の滴定は、図1に示されています。
  2. 血球計を用いて細胞をカウントし、その後4℃で5分間、500×gでコニカルチューブに細胞溶液をスピンダウン。補足で説明した計算を使用して、1ml当たり100万個の細胞に細胞を再構成します。
  3. 1メートルを分割します抗体（Ab）ソリューションのための別の遠心管中で500μlの6つの異なるソリューションへml溶液あたりillion細胞。
    1. 10μg/ mlの、1 / mlの、100 ng / mlで、10 ng / mlで、1 ngの/ mlまでの抗体原液を希釈します。染色バッファー（PBS + 1％アジ化ナトリウム+ 1％BSA）を100μl、及びその中に無いのAbと制御のための細胞の500μlのを使用してコントロールを作成します。ブランクコントロール（無抗体と細胞なし）の場合は、300μlのPBSの溶液を使用してください。
      注記：注意：アジ化ナトリウムは、非常に、毒性、爆発性であり、それを使用する際に細心の注意を払わなければなりません。材料安全データシート（MSDS）を参照し、適切な安全装置を使用してください。
  4. 合わせて、4℃で30分間転倒ミキサーでセルソリューションとアブソリューションをインキュベートします。 HBSSで3回官能24ウェルプレートをすすぎます。このようなウェルのコーナーとして、固定点から液体を排出し、描画することで表面をすすぎます。パイを保持pette先端が直接表面に指摘されないように、約70°の角度。
  5. 適切なAPTESに小分けし、各サンプル溶液の125μLを、DSB、およびSAVがよく、官能。ガラス表面上で45分間、4℃又は氷上でインキュベートします。非特異的に付着した細胞を除去するために、HBSSで3回表面を洗浄します。このようなウェルのコーナーとして、固定点から液体を排出し、描画することで表面をすすぎます。先端が直接表面に指摘されないように、約70°の角度ピペットを保持します。それらはコントロールであるように、一番下の行を洗わないでください。
  6. 、よく洗浄し、それぞれにHBSSの150μl加え、氷上で24ウェルプレートに入れ、その後、GFP細胞（励起485 nmの/発光528 nm）での蛍光を測定するために、プレートリーダーを使用します。

6.セルの最適化：細胞滴定

  1. 手順4.1 -4.3で述べたように、細胞を持ち上げます。
  2. 血球計を用いて細胞を数えます。そう、細胞をスピンダウン4℃で5分間、500×gで円錐管でリューション。 1mlあたり100万個の細胞に細胞を再構成します。
    注：血球計の使用の詳細については、サプリメントで見つけることができます。
  3. ピペットの円錐管で160万個の細胞株と場所のための細胞溶液から1.6ミリリットル。円錐管で80万細胞株と場所のための細胞溶液からの細胞のピペットで800μlの。円錐管80,000細胞株と場所のための細胞株からのピペットを80μl。ピペットの円錐管で8000細胞株および場所のための細胞株から8μlの。
    注：濃度は、必要に応じて複製し、8ウェルプレートの測定ごとに与えられています。プレート出力の例が図2に示されています。
  4. 4ストック溶液を取り、4℃で5分間、500×gで遠心機でスピン。 HBSS400μlの中のすべてのストック溶液を再懸濁します。
  5. 0.8μ、160万細胞ストックに100ng / mlの抗体の1.6μLを追加80万細胞ストックにリットル、および他のすべての株式を0.5μlの。 4℃で30分間転倒ミキサーで30分間抗体をインキュベートします。 HBSSで3回、官能化ガラス表面を洗浄します。
    注：官能化24ウェルプレートをプレートリーダーの定量化のために推奨されている間に官能8ウェルプレートは、顕微鏡定量化のために推奨されます。 8000細胞株のための抗体濃度は、溶液中の抗体の欠如ではなく、表面の捕捉特性ではないに捕獲表面の制限要因を可能にするために減少しませんでした。
  6. 各ウェルに試料溶液を150μlを適用します。左の井戸の最初の列に160万細胞ストックを適用します。左から2番目の列に80万細胞ストックを適用します。左から3列目80,000細胞ストックを適用します。最後に、最後の列に8000細胞ストックを適用します。シェーカー上で4℃で45分間インキュベートします。
    注：160万細胞ストックは、試験すべき最高濃度となっており、二重、それは典型的な細胞濃度であるとして80万細胞株は、実験のための対照として役立つ細胞分離実験（よく60万細胞）で一般的に使用される細胞の量でありますそれは、細胞分離実験（ウェル当たり300万細胞）において使用されます。 8万細胞ストックは、細胞の捕獲のためのより低い濃度（ウェル当たり30,000細胞）をテストするための10倍希釈として機能します。 8000細胞株は、細胞の分離（ウェル当たり3000細胞）の下限を確認するためのテストとして使用するために百倍希釈として機能します。
  7. HBSSで3回洗浄します。このようなウェルのコーナーとして、固定点から液体を排出し、描画することで表面をすすぎます。先端が直接表面に指摘されないように、約70°の角度ピペットを保持します。すべての洗浄液を収集します。
  8. 画像は、蛍光顕微鏡で細胞を、8ウェルプレートを使用する場合、SURそれぞれの写真を撮ります顔、そしてシェーカー上で4℃で1時間各表面に150μlのビオチンを適用します。 1時間後、前のようにHBSSで3回ビオチン放出ウェルをすすぎます。血球計数器と画像でリリース井戸をカウントするための井戸からすべての洗浄を収集します。
  9. 24ウェルプレートを使用した場合、1時間ビオチンリリース適切なウェルに、その後、HBSSでそれらのウェルを3回洗浄するために20mMの過剰ビオチン溶液を150μlを適用します。プレートリーダーを用いて24ウェルプレートを定量します。すべてが順調に集めた洗浄液から細胞をカウントし、血球計数器を使用してください。

7.画像解析

注：フィジー・ソフトウェア・パッケージは（http://fiji.sc/Fiji）画像解析のために推奨されます。最初に、画像はグレースケール画像に変換した後、明るさ/コントラストは、細胞を引き出すために変更されました。

  1. 「タイプ」にスクロールダウンしてからクリックし、次に画像]タブをクリックして画像をロードし、グレースケールに変換します4; 8ビット」。
  2. イメージ]タブをクリックし、「調整」するためにスクロールすることにより、画像のコントラストを高めます。 「明るさとコントラスト」をクリックして、細胞が目立つようにスクロールバーを使用します。蛍光画像を使用する場合、細胞はより明確にするために画像を反転させます。
  3. ImageJの上にプラグインをロードすると、画像を分析するためにITCN（http://rsb.info.nih.gov/ij/plugins/itcn.html）と呼ばれます。
  4. ITCNを開きます。ダイアログボックスがそれは、セルの大きさを推定するためにいくつかのパラメータをユーザーに促す表示されたら、最初に目的の細胞の最小幅を設定します。画像が蛍光であり、細胞が暗くている場合は、「検出ダーク・ピークス」オプションをクリックします。
  5. 当初は2でしきい値を設定し、「カウント」ボタンを押してください。絵の新た数えバージョンは、細胞がカウントされた場合に描く赤いドットで表示されます。
  6. definiすることにより、より正確な携帯電話のデータを取得するために、しきい値と幅のパラメータを調整します「セル」のサイズをngの。注：計数した細胞の数は、右のダイアログボックスになります。パラメータの変更は、計数した細胞の異なる数を与えます。
  7. 良好な推定値は、セルの数のために到達するまでのしきい値と幅のパラメータを反復処理を続行します。

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結果

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このプロトコルを使用して、我々は、細胞捕捉（ 図3A）とMCF7GFP細胞ならびに生細胞対照（ 図4）の細胞の放出（ 図3C）を示しています。 60％と80％が放出されたとして、我々は（ 図3C）細胞捕獲を定量化しました。私たちは、RAW 264.7マクロファージおよびMCF7GFP細胞の混合物にこのアプローチを拡張すると、RAWマクロファージの50％が捕獲された（ 図3D）およびRAWマクロファージの80％は、20 mMのビオチン（ 図3B）でリリースしました。過剰な抗体は、細胞捕獲を減少させることができるので、我々はHLA抗体の0〜10,000 nMのを滴定を経由して、最適化、および理想的な抗体濃度は100〜1000 mMの抗体（ 図1）の間にあることを確認します。同様に、我々は、細胞の数の下に、値が背景17より...

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ディスカッション

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細胞分離技術の改善は、血管生物学19で細胞の再生生物学でのプログラミング、および血管新生シグナル伝達幹、神経科学18における構造と機能の関係に科学的研究をfurthers。実際、初代細胞培養物20（ 例えば 、HUVECを）血管生物学のは、主として細胞分離技術を使用して行われます。細胞の単離は、最近細胞膜受容体3,14,15,19,21の定量的な流れ（qFlow）フローサイトメトリー分析に使用しました。しかしながら、既存の細胞単離方法は、細胞表面受容体のレベルに影響し、人員および試薬の両方に高価です。我々は、これらの欠点を満たす細胞タイプの混合物からの単一細胞型の再現可能な捕獲の穏やかなシステムの構築を可能にする表面機能17に新たな方法を進めてきました。この技術は、cの可能性を可能にする、反復システムに統合することができ特異的抗体を使用して段階的に異なる細胞型をapturing。さらに手順を明確にするために、トラブルシューティングの質問と回答の数は、以下に提供されています：

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開示事項

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

著者らは開示するものは何もない。

謝辞

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

私たちは、資金援助について、アメリカ癌協会、イリノイ支部(282802)、および国立科学財団CBET(1512598)に感謝します。また、顕微鏡トレーニングを提供してくださったイリノイ大学ベックマン研究所のDianwen Zhang博士にも感謝いたします。最後に、洞察に満ちた議論をしてくれたJared Weddell氏、Stacie Chen氏、Spencer Mamer氏に感謝します。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
(3-アミノプロピル)トリエトキシシラン(APTES)Acros Organics919-30-22%APTES溶液の製造に使用
プラズマクリーナー ピコ・ディーナーモデル1表面を洗浄し、PDMSのガラスへの結合を可能にする
d-デスチオビオチン(DSB)シグマD20655細胞捕捉表面の放出メカニズムとして使用されます。 
ジメチルスルホキシド(DMSO)British Drug Houses(BDH)BDH1115-1LPDSBを溶液
1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド(EDC)Thermo-Scientific5g:22980
25g:22981		カルボン酸を活性化し、タンパク質のガラス表面への結合を可能にします。
コーティングされていない8ウェル培養スライドBDファルコン24のケース:354118
96のケース:354108		初期捕捉および放出定量実験などのツァイス蛍光顕微鏡を含む細胞実験に使用
ガラス底24ウェルプレートMatTekP24G-0-13-F抗体や細胞滴定実験などのプレートリーダーを含む細胞実験に使用
メルカプトエタノールサイエンスラボ60-24-2EDCとDSBの反応を急冷するために使用
4-モルフォリノエタンスルホン酸水和物
(MES水和物99%)		フィッシャーサイエンティフィックAC172590250EDC反応で使用するための0.1M MESバッファーの製造に使用
精密オーブンサーモサイエンティフィック11-475-153PDMSおよびAPTES層の硬化に使用。
タイトラマックス 1000 シェーカーハイドル13-889-420APTESが表面に均一に分布するように使用します。
1x ストレプトアビジン 5 mg [e7105-5mg]Proteo Chem9013-20-1ビオチン結合タンパク質。刺激を引き起こす可能性があります。
5 cm グラスディッシュフィッシャーサイエンティフィック08748AHUVEC研究だけでなく、将来のプロファイリング研究にも使用されます。
カバー付き14cmシャーレシグマ・アルドリッチZ717231機能化されているサンプルを保持し、それらを輸送するために使用されます。
MCF7-GFP細胞Cell BiolabsAKR211液体窒素に保存
RAW264.7マウスマクロファージATCCTIB-71イリノイ大学のスミス研究室から贈られました。液体窒素で保存されています。
TrypLELife Technologies12605036室温で 100 ml で保存
Dulbecco'UIUC50003PC化学科学部でサプライヤー:コーニング
非必須アミノ酸UIUC25-025-CI化学科学部の細胞培地施設は、すでに施設によってDMEMに追加されています。サプライヤー:コーニング。
細胞スクレーパーフィッシャーサイエンティフィック12-565-58小型 23 cm 50パック
細胞解離液コーニングMT-25-056CI細胞実験で使用するために細胞を非酵素的に持ち上げるために使用されます
血球計算計ハウサー02-671-54細胞溶液の定量化と捕捉および放出の有効性のために細胞をカウントするために使用されます。
ビオチンアムレスコ58-85-5から細胞を放出するために使用されます。
HBSSN/Aから作成細胞を懸濁液で生き続けるため、また非特異的結合の洗浄面に使用します。コールドスプリングハーバープロトコルから適応:500 ml、4 を使用します。g NaCl, 0.2 g KCl, 0.0402 g Na2PO4•7H2O, 0.03 g KH2PO4 および 0.5 gグルコース。DI水を追加して 500ml、ろ過し、冷蔵します。
HLA-ABC 抗体BioLegend311402MCF7gfp細胞を捕捉するために使用される抗体
hIgG抗体BioLegendHP6017MCF7gfp細胞を捕捉するために使用される抗体
MCF7 GFP細胞Cell BiolabsAKR-211緑色蛍光タンパク質がトランスフェクションされた管腔性乳がん株。
各種コニカルThermo-Scientific15mL: 12-565-26850/15 ml プラスチックコニカル 溶液とアリコートを保管します。
ミニチューブローテーター(エンドオーバーエンドミキサー)フィッシャーサイエンティフィック05-450-127抗体をインキュベートし、他の細胞溶液を混合するために使用
Axiovert 200M (蛍光顕微鏡)ZeissN/AZeiss Axiovert 200 M 倒立蛍光顕微鏡。
Zeba脱塩カラムThermo-ScientificPI-87770ビオチン化キットの使用後に新たにビオチン化抗体を精製するために使用されます。指示書は以下で提供されます: http://www.funakoshi.co.jp/data/datasheet/PCC/89894.pdf
EZ Link Sulfo NHS Low Weight Biotinylation KitThermo- Scientific抗体をビオチン化してキャプチャー表面と統合できるようにするために使用されます
プレートリーダーBioTekSynergy HTX マルチモードリーダー滴定実験で蛍光強度を定量的に測定するために使用されます。
に溶解しますフ の修正されたイーグル培地細胞培地施設の表面 レシピ

参考文献

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